菌种活化_操作方法

菌种的活化操作步骤
菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。

菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。

要明白菌种活化的情况就需要了解菌种保藏的方式和方法。

目前国际国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。

对于不同的保存方式活化的方式也不同：
1、定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可。

2、液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。

3、沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。

或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

活化菌种的方法菌种是微生物学研究中非常重要的一部分，它们可以用于制备各种发酵产品，如酸奶、酒、酱油等。

但是，菌种经过一段时间的保存后，会出现休眠或死亡的现象，这就需要进行活化处理，使其恢复生命活力。

本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。

一、温度法温度法是最常用的活化菌种方法之一。

该方法是将被保存的菌种移至适宜的温度环境下进行培养，使其恢复生命活力。

具体方法是将菌种从冰箱中取出，放置于适宜的温度环境中进行培养。

一般情况下，大多数菌株的培养温度为30℃左右。

二、营养法营养法是通过添加适当的营养成分来活化菌种。

该方法适用于营养成分缺乏、菌种处于休眠状态的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有适量营养成分的培养基中进行培养。

常用的营养成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨等。

三、pH法pH法是通过改变培养基的pH值来活化菌种。

该方法适用于菌种处于休眠状态、培养基酸碱度不适宜的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到pH值适宜的培养基中进行培养。

一般情况下，大多数菌株的适宜pH值为6.5-7.5。

四、氧气法氧气法是通过调节培养环境氧气含量来活化菌种。

该方法适用于需氧菌株、培养环境氧气含量不足的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有适量氧气的培养基中进行培养。

常用的氧气供应方式包括摇床培养和搅拌培养。

五、复苏法复苏法是通过多种活化手段的组合来活化菌种。

该方法适用于菌种处于极度休眠状态、多种单一活化手段无法恢复生命活力的情况。

具体方法是将保存的菌种接种到含有多种活化成分的培养基中进行复苏培养。

常用的活化成分包括葡萄糖、酵母粉、胰蛋白胨、氧气等。

总之，活化菌种是菌种保存和利用中的重要环节。

选择合适的活化方法可以使菌种恢复生命活力，保证其在后续的利用中发挥更好的作用。

活化菌种的方法菌种的活化是指将冷冻、干燥或其他方式保存的菌种重新复苏，使其具有生物活性和生长能力的过程。

活化菌种的方法有很多种，根据菌种的特点和保存方式的不同，选择不同的方法进行活化。

本文将介绍几种常见的活化菌种的方法。

一、液体培养法液体培养法是一种简单、易操作的活化菌种方法。

首先将保存的菌种接种到含有适当营养成分的液体培养基中，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。

液体培养法的优点是适用范围广，可以用于多种菌种的活化，且容易控制生长条件，可以获得较高的活化率。

但液体培养法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

二、固体培养法固体培养法是将保存的菌种接种到含有适当营养成分的固体培养基上，然后在适当的温度、湿度和通气条件下培养。

固体培养法的优点是可以获得单个菌落，可以对菌株进行纯化和鉴定。

但固体培养法的缺点是需要较长时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

三、滴定法滴定法是将保存的菌种加入到含有适当营养成分的液体培养基中，然后逐渐加入新的培养基，使菌株逐渐适应新的环境。

滴定法的优点是可以逐渐适应新的环境，可以获得较高的活化率。

但滴定法需要较长的时间才能获得足够的活化菌种，而且需要较大的培养设备和操作空间。

四、化学处理法化学处理法是利用化学物质对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。

常用的化学处理方法包括酸碱处理、渗透压处理、氧化还原处理等。

化学处理法的优点是操作简单，可以获得较高的活化率。

但化学处理法对菌株的适应性要求较高，有可能对菌株造成伤害，影响其生物活性和生长能力。

五、生物处理法生物处理法是利用其他微生物对保存的菌种进行处理，使其重新复苏。

常用的生物处理方法包括共培养法、共生法、共生菌法等。

生物处理法的优点是可以利用其他微生物对菌株进行适应性调节，可以获得较高的活化率。

但生物处理法对微生物的适应性要求较高，且需要较长时间才能获得足够的活化菌种。

菌种活化操作步骤引言：菌种活化是一项重要的实验室技术，用于使冷冻保存的微生物菌种恢复活力并进行后续研究。

本文将介绍菌种活化的操作步骤，以帮助读者正确进行实验并获得可靠的结果。

一、准备工作1.1 材料准备确保准备好以下实验材料：- 冷冻保存的菌种样本- 无菌培养基- 无菌培养皿或试管- 灭菌的移液器和吸头- 灭菌的培养箱或恒温培养箱- 无菌操作台或洁净工作台1.2 环境准备在进行菌种活化之前，必须确保实验环境的无菌和洁净。

清洁操作台或洁净工作台，并使用适当的消毒剂擦拭工作表面。

同时，确保培养箱或恒温培养箱已经预热到适当的温度。

二、菌种活化步骤2.1 无菌操作在进行菌种活化之前，务必进行无菌操作。

戴上手套，使用灭菌的移液器和吸头，避免任何外界污染。

2.2 菌种接种将冷冻保存的菌种样本取出，迅速将其转移到无菌培养基中。

使用移液器，将适量的菌种悬浮液滴入无菌培养皿或试管中。

确保每个培养皿或试管只接种一种菌种。

2.3 培养条件设置根据菌种的特性，设置适当的培养条件。

这包括温度、pH值、培养基成分等。

将接种好的培养皿或试管放入预热好的培养箱或恒温培养箱中。

2.4 培养过程管理在菌种活化的过程中，需要定期观察和管理培养过程。

这包括检查培养皿或试管中的菌落形态和生长情况，以及调整培养条件，如温度和培养基的补充。

2.5 菌种分离与保存当菌种活化成功后，可以进行菌种分离和保存。

使用无菌技术，将菌落转移到新的培养皿或试管中，并进行进一步的鉴定和研究。

同时，将一部分菌种保存在冷冻条件下，以备将来使用。

结论：菌种活化是一项关键的实验技术，为后续的微生物研究提供了可靠的菌种资源。

通过正确的操作步骤，可以成功地活化冷冻保存的菌种，并获得可靠的实验结果。

在进行菌种活化实验时，务必遵循无菌操作规范，并根据菌种的特性进行适当的培养条件设置和管理。

这将有助于保证实验的准确性和可重复性，为微生物研究提供坚实的基础。

菌种活化的操作方法
菌种活化的操作方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：根据菌种的特性选择适合它生长和繁殖的培养基，例如普通营养琼脂培养基、选择性琼脂培养基等。

2. 预处理培养基：将培养基加热至融化状态后，待其降温至大约45-50摄氏度时，加入适量的菌种悬浮液。

3. 均匀混合：用铁线或玻璃棒将菌液和培养基充分混合均匀。

4. 倒入培养器：将混合后的培养基倒入培养器（如琼脂培养皿或试管）中，使其均匀覆盖整个培养器底部。

5. 固化培养基：让培养器中的培养基自然凝固，或者将其放置在恒温箱中以加速凝固。

6. 培养：将已固化的培养基置于适当的环境中，如温度、湿度等适宜的条件下培养。

7. 观察生长情况：根据菌种的特性和培养的要求，定期观察并记录菌种的生长情况，如菌落形态、颜色等。

需要注意的是，不同的菌种可能有不同的活化方法，因此在操作前最好查阅相关的文献资料，或者咨询专业人员的建议。

此外，操作时要保持清洁，避免外界微生物的污染。

安瓿瓶冻干菌种活化（来源小木虫论坛）
操作步骤：1）安管的开封：a用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安管；b用火焰将安管顶端加热；c滴无菌水至加热的安管顶端使玻璃开裂；d用锉刀或镊子敲下已开裂的安管顶端。

2）菌株恢复培养：a用无菌吸管吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安管内轻轻振荡，使冻干菌体溶解成悬浮状。

b取约0.2ml菌体悬液移植于指定的琼脂斜面或平板培养基，剩余的菌液注入指定的液体培养基内（3-4ml），在建议温度下培养。

活化的代数根据菌株而定，有传2-3次，有的要5-6次才能用于工业生产，总之，看菌株的状态吧
试管斜面保存只能短期，一个月左右，相对来说，甘油保存法效果好些，且简单易行，保存方法：取菌液与15%甘油等体积混匀，于-20度保存。

菌种活化工艺流程说明
一、目的
本工艺流程的目的是重新活化已经冷冻保存的菌种,使其恢复生长复制功能。

二、应用范围
本工艺流程适用于所有需要从-80°低温贮存恢复的各种细菌菌种。

三、必需设备与材料
1. 试管
2. 转移枪或吸杆
3. 液体压缩氮槽
4. 37°或28°恒温培养箱
5. 理想培养基
四、流程操作
1. 取出低温保存的菌种草液,放在振荡机中,振荡均匀。

2. 用转移枪或吸杆取出少量菌种草液,转移至含有理想培养基的试管中。

3. 将菌种试管置入37°或28°恒温培养箱中培养恢复。

4. 每隔24小时观察菌变化,直到见到菌落增长。

5. 培养48小时后,菌种正式进入对数生长期,即完成活化。

五、注释
以上流程仅供参考,细节操作请根据不同菌种的生理要求进行调整。

活化过程需严格规范执行,以确保菌种活性的完全恢复。

菌种活化的一般步骤菌种活化是指将处于休眠或非生长状态的菌种重新恢复到活跃生长的状态。

菌种活化是微生物实验室中常见的操作步骤之一，也是进行微生物研究和实验的基础。

一般而言，菌种活化的步骤可以分为以下几个阶段。

第一阶段：选择适宜的培养基菌种活化的第一步是选择适宜的培养基。

不同的菌种对培养基的要求有所不同，因此需要根据菌种的特性选择合适的培养基。

常用的培养基包括琼脂培养基、液体培养基和固体培养基等。

第二阶段：制备培养基在选择好合适的培养基之后，需要按照配方将培养基制备出来。

制备培养基的过程包括称量培养基原料、加入适量的蒸馏水、加热溶解、高压灭菌等步骤。

第三阶段：接种菌种接种菌种是菌种活化的关键步骤。

首先需要从菌种保存液或冰冻物中取出菌株，然后在无菌条件下将菌株接种到培养基中。

接种方法可以采用平板接种、液体接种或斜面接种等不同的方式。

第四阶段：培养菌种接种完成后，需要将培养基含有菌株的培养皿放入恰当的培养条件下进行培养。

培养条件包括温度、pH值、氧气含量等因素。

根据菌种的特性，选择合适的培养条件进行培养，以促进菌株的生长和繁殖。

第五阶段：观察和记录在菌种活化的过程中，需要及时观察和记录菌株的生长情况。

观察菌株的生长速度、菌落形态、颜色等特征，并记录在实验笔记中。

这些观察和记录可以为后续的实验和研究提供重要的参考依据。

第六阶段：分离纯培养菌种活化的最终目的是获得纯培养的菌株。

在观察和记录菌株的生长情况后，可以根据菌落的形态特征进行分离纯培养。

分离纯培养的方法包括传代培养、单菌落挑选等。

通过分离纯培养，可以获得纯净的菌株用于后续的实验和研究。

总结起来，菌种活化的一般步骤包括选择适宜的培养基、制备培养基、接种菌种、培养菌种、观察和记录以及分离纯培养。

这些步骤的顺序和操作方法可以根据具体的实验目的和菌种特性进行调整和优化。

通过合理的菌种活化步骤，可以获得活跃的菌株，为后续的微生物研究和实验提供可靠的实验材料。

菌种活化与传代一、菌种活化下列步骤请在无菌环境下操作：1、把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。

2、先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。

点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。

（有些商品化的产品打开更方便）3、取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许（无菌水也可），加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。

( a ) 适用细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基或无菌水，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。

( b ) 适用霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。

4、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养才能正常生长。

经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。

二、菌种传代1、培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。

标签上写上菌名及接种日期。

至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。

2、点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。

左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。

放入-20度的环境保藏菌种，并不是很好。

最好用液氮保藏或者-70度的冰箱的保藏，菌种比较稳定。

其实，菌种的活化步骤如下：
第一天：
1、放入4℃，一直到变成液状；（用液氮保藏直接放入37度的温水中，待变成液体状，直接划线培养）
2、制备固体培养基，灭菌后，在超净工作台进行以下操作：
3、制备液倒入无菌培养皿，每培养皿约25ml；
4、待凝固后，用接种环，划板；
5、水平放置半小时以上，待菌吸附在培养基上。

5、用保鲜膜或者封口膜密封培养皿，倒置于37℃恒温箱中过夜；
第二天：
6、制备150mL液体培养基，灭菌后，在超净工作台进行以下操作：
8、挑平板上单个菌落，至液体培养液中，200rpm摇床过夜；
这样培养的菌液放入4度冰箱，可以在一周内做后续的实验。

但是超过一周，就别用了。

还有上述的平板放到4度的冰箱里，可以在两周内重新扩大培养成菌液。

但是超过2周，就别用了，活性和特性都不稳定。