下载文档原格式
HER2基因荧光原位杂交(FISH)检测是乳腺癌诊断和治疗中的重要方法。
HER2基因在某些乳腺癌患者中会发生扩增，导致肿瘤的侵袭性增强。
FISH检测可以检测HER2基因是否存在扩增，从而指导患者的治疗方案。
HER2基因FISH检测的判读标准通常基于以下几个方面：
1. HER2基因信号数:在FISH图像中，HER2基因通常呈现为成簇的红色信号和一个绿色的对照信号。
根据判读标准，红色信号的数量应该与绿色信号的数量相等或更多。
如果红色信号的数量少于绿色信号的数量，则可能表示HER2基因没有扩增或扩增程度较低。
2. HER2/CEP17比值:FISH图像中，HER2基因和CEP17(17号染色体的特定区域)通常会同时呈现为红色和绿色信号。
通过计算HER2信号和CEP17信号的比值，可以估算出肿瘤细胞中HER2基因的拷贝数。
如果比值大于等于2.0，则通常表示HER2基因存在扩增；如果比值小于2.0，则通常表示HER2基因没有扩增或扩增程度较低。
3. 平均HER2信号强度:除了计算HER2/CEP17比值之外，还可以单独评估HER2基因的平均信号强度。
如果平均信号强度明显高于背景噪声，则可能表示HER2基因存在扩增；如果平均信号强度与背景噪声相当或较低，则可能表示HER2基因没有扩增或扩增程度较低。
需要注意的是，FISH检测结果的判读应由经验丰富的实验室技术人员进行，并结合其他临床和病理学信息来综合评估患者的病情。
此外，不同的实验室和检测方法可能会有不同的判读标准，因此在比较不同实验室的结果时需要谨慎。
FISH检测：助力精准医疗发展FISH检测，即荧光原位杂交技术，是一种分子生物学检测方法。
它通过使用特定的荧光探针，检测基因、染色体异常以及基因表达水平。
在精准医疗领域，FISH检测为医生提供了强大的工具，帮助他们做出更准确的诊断和治疗决策。
在肿瘤精准医疗中，FISH检测发挥着重要作用。
例如，在非小细胞肺癌中，ALK基因重排是一种常见的分子遗传学改变。
通过FISH检测，医生可以准确地判断ALK基因是否存在重排，从而选择合适的靶向药物治疗。
一项研究表明，使用FISH检测筛选出ALK阳性的非小细胞肺癌患者，接受靶向药物治疗后的无进展生存期显著延长。
另一个例子是乳腺癌患者中的HER2基因扩增。
FISH检测可以帮助医生判断HER2基因是否扩增，从而选择是否使用HER2靶向药物治疗。
研究显示，HER2阳性的乳腺癌患者使用HER2靶向药物治疗后，无进展生存期和总生存期均显著改善。
除了在肿瘤精准医疗中的应用，FISH检测还在遗传性疾病诊断中发挥重要作用。
例如，囊性纤维化是一种常见的遗传性疾病，其发病机制与CFTR基因突变有关。
通过FISH检测，医生可以准确地判断CFTR基因是否存在突变，从而为患者提供合适的治疗方案。
然而，FISH检测在精准医疗中的应用也面临一些挑战。
例如，检测成本较高、操作复杂，且需要专业的技术人员。
FISH检测的标准化和质量控制也是亟待解决的问题。
尽管如此，随着技术的不断发展，FISH检测在精准医疗中的应用将越来越广泛。
FISH检测作为一项重要的分子生物学检测技术，在精准医疗中发挥着重要作用。
通过实际案例可以看出，FISH检测为医生提供了准确的诊断和治疗信息，从而提高了患者的生存率和生活质量。
面对挑战，我们期待未来能有更多的研究和创新，以推动FISH检测在精准医疗中的应用。
重点和难点解析：FISH检测技术在精准医疗中的应用及其价值。
FISH检测作为一种分子生物学检测方法，可以提供关于基因、染色体异常以及基因表达水平的精确信息。
荧光原位杂交fish检测目的
荧光原位杂交（FISH）是一种重要的分子生物学技术，用于在细胞或组织的原位上检测特定的DNA序列。
在医学和生物学研究中，FISH技术广泛应用于基因诊断、染色体分析和肿瘤研究等领域。
FISH检测的主要目的包括以下几个方面：
基因诊断：通过FISH技术可以检测基因的异常表达、基因突变和染色体异常等，用于诊断遗传性疾病、罕见病和癌症等疾病。
例如，针对乳腺癌的HER-2基因扩增检测，有助于指导靶向治疗和预后评估。
染色体分析：FISH技术可以用于检测染色体数目和结构的异常，对于产前诊断和遗传咨询具有重要意义。
通过检测染色体异常，可以预测胎儿是否存在遗传性疾病的风险。
肿瘤研究：FISH技术在肿瘤学研究中主要用于检测肿瘤细胞的基因变异、基因扩增和染色体异常等。
这些信息有助于了解肿瘤的病因、发展机制和耐药性等方面，为肿瘤的诊断、治疗和预后评估提供依据。
靶向治疗：在靶向治疗中，FISH技术可以用于检测肿瘤细胞是否存在特定的基因变异，从而指导医生选择合适的药物和治疗方案。
例如，肺癌的EGFR基因突变检测，有助于选择靶向EGFR的药物进行治疗。
总之，FISH技术作为一种重要的分子生物学技术，在医学和生物学研究中具有广泛的应用价值。
通过FISH检测，人们可以深入了解基因、染色体和肿瘤等方面的信息，为疾病诊断、治疗和预后评估提供有力支持。
FISH检测基因异常的原理及结果判读FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测基因或染色体异常的分子遗传学技术。
它利用DNA或RNA探针与待测细胞中特定序列的互补配对，通过荧光显微镜观察和分析，可以提供关于基因或染色体结构和数量的信息。
FISH的原理FISH的原理基于互补配对原则和荧光探针技术。
首先，选择一个特定的DNA或RNA探针，该探针具有与待测细胞中一些特定序列互补的序列。
这个探针可以是单链DNA或RNA分子，也可以是由DNA或RNA分子构成的染色体或基因库。
然后，将探针标记上荧光染料。
常用的标记方法包括直接标记（直接将荧光染料与探针反应）和间接标记（使用一些中间物质，例如生物素-亲和素结合体系统或抗原-抗体结合体系来标记探针）。
接下来，将标记后的探针与待测细胞样品的DNA或RNA进行杂交。
杂交的条件会因实验目的和探针性质不同而有所变化，通常在适当的温度下进行。
最后，使用荧光显微镜来观察和分析待测细胞中的荧光信号。
荧光信号的形状、数量和位置可以提供有关待测基因或染色体的结构和数量的信息。
FISH的结果判读FISH的结果基于荧光信号的形状、数量和位置进行判读。
根据待测细胞中的荧光信号情况，可以得出以下几种结果：1.正常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的正常特征相符，那么可以确定基因或染色体的结构和数量是正常的。
2.异常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的异常特征相符，那么可以确定基因或染色体存在其中一种异常。
例如，荧光信号的形状缺失、数量增加或位置改变等都可能说明基因或染色体存在缺失、复制或重排的异常。
3.无结果：有时，无法得到明确的结果。
可能是由于实验条件不合适，荧光信号过弱或过强，或者细胞的特定位置缺乏目标序列等原因。
在这种情况下，可能需要重新进行实验或使用其他技术来进一步分析。
需要注意的是，FISH是一种定位性技术，它只能提供有关特定基因或染色体的信息。
组织细胞荧光原位杂交检查组织细胞荧光原位杂交检查：新时代肿瘤诊疗的重要手段组织细胞荧光原位杂交检查（FISH）是一种现代肿瘤检测手段，已被广泛应用于癌症诊断、预后评估和治疗选择等方面。
本文将从技术原理、临床应用和未来发展三个方面进行介绍。
技术原理FISH技术首先需要获得肿瘤组织标本，并进行脱水、固定和切片等预处理。
随后，通过特定的探针标记DNA部位，FISH技术可以准确地检测染色体异常、基因拷贝数变异和染色体重排等基因结构异常。
同时，FISH技术能够利用荧光标记的探针直接定位到细胞核内某个部位，提高了细胞水平的检测精度。
临床应用FISH技术在临床上主要用于癌症检测和治疗决策。
例如，FISH技术可以检测HER2基因的扩增情况，预测HER2阳性乳腺癌患者对赫赛汀治疗的敏感性和疗效。
此外，FISH技术还可以检测多种癌症患者的病理类型、亚型和分级等信息，有助于个体化治疗的制定和预后评估的精准性提高。
FISH技术还可以应用于遗传学疾病的诊断和预测等方面。
未来发展随着生物技术的迅猛发展，FISH技术的应用范围将更加广泛。
例如，利用荧光标记的超高分辨率探针，可以实现单基因级别的检测。
此外，结合缺损补偿系统、多肽分子探针等新技术，FISH技术将更加高效、快速、精确地检测细胞内的基因变化和功能异常。
同时，在分子分型、免疫分析、仿生工程等多领域的应用下，FISH技术的潜力已经远远超出了当前的肿瘤诊疗范畴。
总之，FISH技术作为一种现代肿瘤检测手段，具有高度的准确性、灵敏度和特异性，为癌症诊断和治疗决策提供了重要依据。
随着技术的不断创新和应用范围的扩展，FISH技术的发展将为肿瘤诊疗带来新的突破和希望。
（注：本文700字）。
FISH检测标本要求FISH（荧光原位杂交）是一种基因诊断技术，可用于检测染色体异常或一些基因的扩增、缺失或重排等变异。
在进行FISH检测时，标本的质量和处理方法对检测结果至关重要。
下面是FISH检测标本所需的一些要求：1.标本类型：FISH检测可以使用不同类型的标本，包括固定组织切片、细胞悬液或细胞块等。
标本的选择取决于要检测的疾病类型和目标基因。
2.标本采集：标本采集必须严格按照操作规范进行，以确保标本的完整性和准确性。
对于组织切片标本，应按照标准的组织取样技术采集。
对于细胞悬液或细胞块标本，应使用无菌工具采集，并避免污染或损伤细胞。
3.标本固定：标本固定是指使用合适的固定剂将标本中的细胞或组织固定在载玻片上，以便进行后续处理。
常用的固定剂包括4%的甲醛和乙酸乙酯等。
固定必须足够强度以保持细胞形态和染色质结构的完整性。
4.标本处理：标本处理是指对固定的标本进行前处理步骤，以去除固定剂、蛋白质等，以提高FISH信号的强度和清晰度。
标本处理涉及细胞膜的渗透性改变、DNA的变性和解聚，以及FISH探针结合的条件等。
标本处理通常包括脱水、去脂、裂解和蛋白酶消化等步骤。
5.FISH探针：FISH探针是用于与目标DNA序列特异性结合的荧光标记探针。
对于不同的FISH应用，需要选择不同的探针，如诊断性FISH探针、定量FISH探针和断裂FISH探针等。
探针的选择应根据需要检测的基因、染色体和疾病类型进行。
6.标本稳定性：标本的稳定性是指在采集和处理过程中，标本中的核酸和蛋白质的完整性是否保持良好，以确保准确的FISH结果。
标本应在适当的温度下存储，并且在处理之前应避免冻结和解冻的过程。
7.检测结果的解读：FISH检测结果的解读应由经验丰富的专业人员进行，因为FISH结果的解读涉及对不同信号模式、缺失或重排等变异类型的鉴别。
除了以上的要求，FISH检测标本还应根据具体的疾病类型和检测需求，进行其他特定的处理步骤和质量控制。
FISH以及免疫荧光的实验步骤FISH（荧光原位杂交）是一种用于检测DNA或RNA序列的实验技术。
该技术结合了传统原位杂交和荧光显微镜技术，可以在细胞或组织样本中定位、标记和可视化特定的DNA或RNA分子。
下面是一个典型的FISH实验的步骤：1.准备标记探针：选择适当的探针来标记目标DNA或RNA序列。
探针通常是短的DNA或RNA片段，与目标序列互补，可以与其发生特异性杂交。
这些探针可以使用不同的标记物进行标记，如荧光染料或辐射性同位素。
2.样品制备：根据需要，制备细胞悬液或组织切片样品。
细胞悬液可以通过离心细胞，将细胞固定在载玻片上。
组织切片可以使用刮片或切片机获得，然后固定在载玻片上。
3.固定样品：将细胞悬液或组织切片固定在载玻片上，以保持细胞或组织的形态结构。
常用的固定剂包括乙醇、甲醛等。
4. 渗透化处理：使用渗透化剂渗透细胞或组织样品，以增加探针和标记物的进入性能。
常用的渗透化剂包括蛋白酶K和Triton X-100。
5.探针杂交：将标记的探针与样品中的DNA或RNA序列结合。
首先在浓度适宜的探针液中孵育样品，使探针与目标序列发生杂交。
温度和时间取决于探针和目标序列的碱基组成和长度，通常需要在高温下进行，以增加探针与目标序列的特异性。
6.杂交后的冲洗：使用适当的缓冲液冲洗样品，以去除未结合的探针和杂交条件中的非特异性结合。
冲洗通常需要进行多次，以确保特异性结合。
7.荧光染色：如果探针是荧光标记的，在杂交后可以直接进行荧光染色。
将样品浸泡在适当浓度的荧光染料中，以标记目标序列。
染色时间通常较短，一般在15-30分钟左右。
8.荧光显微镜观察：在荧光显微镜下观察和记录标记的目标序列的位置和数量。
使用适当的滤光片来选择和分离目标染色的荧光波长。
利用计算机软件，可以对显微镜下的图像进行分析和处理，以获得更多的信息。
在进行FISH实验时，需要注意一些技术细节和注意事项：1.适当的正向和阴性对照是必要的，以确保实验的准确性和可靠性。
braf fish 判读标准-回复【braf fish 判读标准】引言：BRAF Fish（细胞里是否有BRAF突变）是一种常用的遗传检测方法，用于判断癌症患者体内是否存在BRAF基因的突变。
BRAF基因突变与多种癌症的发展密切相关，包括黑色素瘤、结直肠癌等。
本文将一步一步解读BRAF Fish的判读标准，以帮助读者更好地理解和运用这一检测方法。
第一步：收集样本进行BRAF Fish检测的第一步是收集样本。
样本可以是患者体内的组织或者细胞，例如肿瘤组织或者血液细胞。
在收集样本之前，需要征得患者的同意并向其解释该检测的目的和内容。
第二步：制备样本收集到样本后，需要进行样本的制备工作。
这一步骤包括将样本组织或细胞进行固定、切片或离心等处理，以获得适合进行BRAF Fish检测的样本。
第三步：杂交过程在完成样本的制备后，接下来是进行BRAF Fish检测的关键步骤——杂交过程。
杂交是指把采集到的样本与BRAF基因突变与否相关的探针进行结合，从而检测到BRAF基因是否发生突变。
在杂交过程中，一般会添加辅助探针，用来辅助显现结果。
第四步：显微镜观察杂交完后，需将样本放在显微镜下进行观察。
BRAF Fish检测的结果主要依赖于探针特异性和显微镜的观察。
通过特定波长的激光或荧光剂，探针会显示出显著的荧光信号，显示样本是否存在BRAF基因的突变。
通过对样本的细微观察，可以判断患者体内是否存在BRAF基因突变。
第五步：结果解读最后一步是解读BRAF Fish检测的结果。
一般来说，BRAF Fish结果有两种解读方式：阳性和阴性。
阳性表示检测到BRAF基因的突变，而阴性表示未检测到BRAF基因的突变。
- 阳性结果：阳性结果意味着样本中存在BRAF基因的突变，这表明患者存在患有相关癌症的风险。
阳性结果需要进一步解读，以确定突变的具体类型和对患者的健康状况的影响程度。
- 阴性结果：阴性结果意味着样本中未检测到BRAF基因的突变。
FISH的基本原理及应用1. 引言FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种基于分子生物学技术的方法，用于检测染色体或细胞核酸序列的存在和位置。
本文将介绍FISH的基本原理和其在生命科学研究、临床诊断和基因组学等领域的应用。
2. FISH的基本原理FISH的基本原理是将一系列标记有荧光染料或放射性同位素的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列发生靶向杂交反应，从而实现对目标序列的检测和定位。
3. FISH的步骤FISH一般包括以下步骤：•取样：从样品中获取细胞或组织。
•固定：使用适当的方法固定细胞或组织，以保持其形态和结构。
•裂解：通过使用酶解等方法，将细胞或组织中的核酸释放出来。
•杂交：将标记有荧光染料的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列进行杂交，形成稳定的杂交复合体。
•洗涤：通过洗涤的步骤，去除未发生杂交的探针。
•显微镜观察：使用荧光显微镜等设备观察杂交信号，并记录图像。
4. FISH的应用领域FISH在多个领域中广泛应用，下面将重点介绍其在以下几个方面的应用。
4.1 生命科学研究FISH在生命科学研究中发挥重要作用，它可以帮助科学家研究染色体的结构和功能，揭示基因组的复杂性和变异性。
通过对细胞核酸序列的定位，FISH可以帮助研究者探索基因型与表型之间的关系，从而理解基因的功能和表达调控机制。
4.2 临床诊断FISH在临床诊断中应用广泛，尤其在肿瘤诊断中具有重要意义。
通过对肿瘤细胞进行FISH检测，可以鉴定染色体异常和基因突变，帮助确定诊断和预后评估。
例如，FISH可以用于检测BCR-ABL融合基因，在慢性髓系白血病的诊断和治疗方案制定中起到重要作用。
4.3 遗传学研究FISH在遗传学研究中也被广泛应用。
通过FISH技术，可以对染色体进行直接观察，从而帮助研究者了解染色体结构异常和数目异常对个体遗传特征的影响。
此外，FISH还可以帮助研究者进行染色体定位测序，从而进一步揭示基因组的组织和结构。
FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH（Fluorescence in situ hybridization）即原位荧光杂交技术，是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。
- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息，用于诊断和监测某些疾病。
二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交，通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。
- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息，特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。
三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排，从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。
- 例如，FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。
2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常，如唐氏综合征（21三体综合征）、爱德华氏综合征（18三体综合征）和智商障碍相关的染色体异常，用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。
3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常，如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。
4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列，辅助感染性疾病的诊断和追踪。
四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本，需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。
- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法，如骨髓涂片、组织切片等。
- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。
2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。
- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记，以便在荧光显微镜中观察到。
- 标记的探针需要存储在适当的条件下，以保持标记稳定性和活性。
临床诊断中的FISH检测FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。
FISH 检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。
FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病诊断的首选工具。
下面我们将从探针的设计，样本的制备，原位杂交和检测结果的观察等几个方面简单介绍FISH的操作。
探针是FISH检测灵敏度和准确性的关键。
FISH检测的准确性来源于探针的设计。
FISH能否应用于某一领域也取决于是否具有相应的探针。
用于FISH检测的探针必须具备很高的特异性，能特异性地识别特定的基因或染色体上特定的片断。
而且FISH的探针必须能经受原位杂交的处理而不变性。
荧光基团的标记也直接影响了检测的灵敏度和原位杂交结果的检测方式。
以著名的探针生产商Vysis公司的LSI系列探针为例：LSI系列探针来源于BAC大片断基因组文库，探针所覆盖的染色体片断总长可达100Kb-400Kb，保证了探针的高特异性和极强的荧光信号；荧光基团采用直接标记法标记，不同波长的荧光基团使探针在荧光显微镜下呈现多种荧光信号，借此我们可以一次检测多个染色体或基因的异常；由于探针具有极强的荧光信号因而对FISH结果的检测也采用直接检测法，即在荧光显微镜下直接观察FISH的信号，而无需抗原-抗体反应对荧光信号进行放大。
Vysis探针的设计既确保了探针的特异性和灵敏度，同时直接的镜检也使FISH检测更简便。
FISH检测对被测样本没有特殊的要求。
可以是来自骨髓的细胞，也可以是来自羊水的细胞；可以是冰冻切片的样本，也可以是经过石蜡包埋的样本。
甚至可以利用尿液样本进行膀胱癌复发的预后。
获取的样本细胞也无需经过培养扩增，FISH检测可以显示单个细胞核内染色体的异常情况。
我们以Vysis公司的AneuVysion多色DNA探针试剂盒为例，简要介绍FISH的原位杂交过程。
AneuVysion 多色DNA探针试剂盒用于羊水细胞的产前诊断，样本是来源于羊水的细胞。
试剂盒通过两组5种探针（LSI13/21和CEP18/X/Y）同时检测5个染色体的数目异常，以此为依据进行产前诊断。
样本的制备1. 1000转/分离心羊水（AF）5分钟。
羊水应没有血色或褐色。
2. 用2-5ml的1×胰酶/EDTA溶液（0.05%胰酶，0.53MEDTA4Na的Hank氏平衡盐溶液，不含CaCl2、MgCl2.6H2O、MgSO4.7H2O）悬浮沉淀，37℃水浴15分钟以上3. 1000转/分离心5分钟4. 用2-5ml的0.56%KCl溶液悬浮细胞，37℃水浴20分钟。
这些处理步骤的目的是使羊水细胞成为悬浮的单细胞。
5. 加0.8-2ml的固定液（3∶1甲醇∶冰醋酸）至细胞低渗液中，轻轻混匀6. 1000转/分离心悬液5分钟，用1ml新的固定液重新悬浮细胞。
4℃保存固定的样本30分钟以上，直至FISH检测前。
若要长期保存，-20℃保存在固定液中7. 制片前根据悬浮细胞数调整悬液的体积。
若储存时间超过一个月以上，在制片前用固定液清洗细胞8. 直接滴加细胞悬液至1-2片预冷的玻片上，每片2个杂交区（每个区域15-25霯细胞悬液）样本的老化（目的是为了使FISH达到最佳效果）1. 将样本片子放入2×SSC 37℃1小时2. 将片子放入新制的胃蛋白酶工作液中（20ul 10%胃蛋白酶溶液中加入40ml0.01NHCl）37℃13分钟3. 用磷酸盐平衡液（PBS）室温下清洗5分钟4. 将片子放入快速固定液（0.95%甲醛：1ml的37%甲醛，0.18gMgCl2和39ml的PBS，4℃保存，一个月内使用）室温5分钟5. 在室温下用PBS清洗5分钟6. 晾干片子。
为了加速晾干可以用带棉塞的巴氏移液管吹打玻片7. 将片子浸泡在70%的乙醇中。
用乙醇冲洗1分钟8. 从70%乙醇中取出，依次放入85%、100%乙醇中重复以上步骤9. 根据需要降解片子样本DNA的变性1. 片子的制作前将湿润的杂交盒（盒的边缘用1×3英寸的杂交膜或杂交纸密封）放入37℃孵箱内预热至37℃2. 在科普林氏染色缸中加入变性溶液，73±1℃水浴30分钟以上。
使用前测量温度。
3. 每次使用前测定变性溶液的PH值，确保在7.0-8.0之间。
将样本片子浸泡入73±1℃变性溶液中5分钟降解样本的DNA。
每个染色缸中的片子不能超过4张。
4. 用镊子拿出片子立刻放入室温的70%乙醇洗液中，漂洗片子除去甲酰胺。
片子放入乙醇溶液中一分钟5. 从70%的乙醇中拿出片子，依次放入85%、100%乙醇中重复上述步骤6. 用吸水纸从玻片的底部吸去多余的乙醇，并抹干片子的外缘在加入探针溶液前将片子加热至45-50℃2分钟（不得超过）注意：假如在探针准备杂交前，片子的闲置会超过2分钟，请将片子放入盛有100%乙醇的染色缸中保存。
在预热前不要让片子干燥探针的预备1. 让探针加热至室温，降低探针的粘度，使用合适的移液管2. 振荡混合。
用微型离心机将内容物离心（1-3秒）至底部。
轻轻振荡再次混匀3. 注意：该探针已经经过变性可直接与样本片子反应。
若探针是非降解型，需进行73℃5分钟的变性杂交1. 在片子上，将10ul的CEP18/X/Y混合探针加到一个反应区，将10斓腖LSI13/21混合探针加至另一个反应区。
将22mm×22mm的盖玻片立刻覆盖反应区，使探针溶液弥漫整个覆盖区。
气泡会干扰杂交，因此必须排除气泡注意：在盖玻片覆盖前，不能在多目标区加探针溶液；盖玻片应37℃预热2. 用树胶封片：用5ml的注射器吸去树胶，在盖玻片的四周加上树胶3. 将封好的片子放入37℃预热的杂交盒中，盖紧盖子，37℃孵育6-24小时杂交后的冲洗1. 在科普林染色缸中加入0.4×SSC/0.3%NP-40。
将染色缸放入73±1℃的水浴中半小时以上，使0.4×SSC/0.3%NP-40溶液的温度达到73±1℃。
每批使用前都必须确保0.4×SSC/0.3%NP-40溶液的温度达到73±1℃2. 在科普林染色缸中加入2×SSC/0.1%NP-40，放置至室温。
两种洗液使用过一天后就应丢弃3. 挪去树胶和盖玻片，将片子立即放入73±1℃装有0.4×SSC/0.3%NP-40的科普林染色缸中，漂洗3秒左右。
其他片子同样操作，然后孵育2分钟。
不要同时操作4片以上。
假如操作4片以上，取保0.4×SSC/0.3%NP-40的温度在73±1℃注意：在洗浴前不能揭去盖玻片。
当最后一片进入洗液后，开始计时2分钟4. 将片子放入装有2×SSC/0.1%NP-40的科普林染色缸中室温放置5-60秒，漂洗1-3秒5. 在暗处风干（一个关上的抽屉或是柜子就可以满足要求）6. 加入10霯DAPIⅡ复染，盖上盖玻片。
暗处避光保存储存在暗处-20℃保存杂交玻片。
玻片在上述的条件下可以保存超过12个月而不影响荧光信号的强度。
为了长期保存还可以用盖玻片密封防止干燥。
片子存放于-20℃下FISH结果的观察在荧光显微镜下观察时，应先对片子的适用性进行评估。
评估的标准如下：• 探针信号的强度：信号应该明亮、清晰和容易分辨。
信号是明亮紧凑的卵圆形或纤维状，弥散的卵圆形•背景：背景应该是黑色，没有粒状或是朦胧的荧光• 交叉杂交/目标特异性：探针应该特异性地只和目标DNA结合。
假如出现上述任何一种达不到标准，应重新进行杂交。
选择最好的视野区，计数细胞核用25倍物镜观察杂交区样本的分布。
选择样本分布稀疏的区域，在此区域内没有间期核或中期扩展的重叠，可以观察到部分的间期核。
避免选择细胞密集、重叠或核的边界模糊无法辨认的视野。
避免视野下出现成团的细胞。
只计数信号不连续的细胞。
计数扫描：用40倍或63倍的物镜，从选择区域的左上开始计数，从左往右，计数中期扩展和间期核边缘的信号数。
依据荧光信号的计数结果，结合染色体计数标准作出正确的诊断。
注意：以上介绍的步骤由Gene公司提供，仅供参考，具体的操作以产品说明书为准为了进一步简化操作，Vysis公司还推出FISH杂交仪和自动预处理系统，配合AI公司的染色体扫描计数系统，更能使FISH检测和分析实现自动化，大大节省了研究者的时间和精力。
FISH检测的操作简便，但是这并不意味着随便。
相反，FISH对检测的条件要求很高。
检测过程中的温度、试剂的酸碱度，反应的时间都会对结果产生影响。
因此在操作中应注意：• 杂交前样本的老化相当重要，尤其是胃蛋白酶的浓度、消化的时间掌握不好，直接影响杂交的效果。
若消化过度，细胞出现“鬼影”或整个组织消失成为废片；若消化不足，则显示持续的自发荧光或者差的DAPI 染色• 操作过程中的温度控制应严格按照产品说明书，而且在反应前把液体预温到所要求的温度，检测中所使用的设备例如盖玻片、载玻片都应注意预热• 各步骤时间应准确，每次操作都要迅速• 为防止淬灭，杂交后的洗脱和晾干要注意避光。
可以加入抗淬灭剂• 此种片在-20℃避光保存1周。
若要长期保存，应加入抗淬灭剂只有细心的操作，FISH才能真正成为准确而简便的诊断工具。
