CpG ODN诱导人PBMC增殖的体外实验研究

CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究的开题报告
题目： CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系
的初步研究
背景：肺腺癌是肺癌中最常见的类型，具有高度恶性和易转移的特点，虽然现有的治疗手段能够一定程度上控制肺腺癌的进展，但药物耐
受性和复发率仍然较高。

因此，探索新的治疗手段和机制对于肺腺癌的
治疗具有重要意义。

CpG寡核苷酸（CpG-ODN）是一种能够模拟细菌DNA并激活免疫应答的分子，已被证明具有抗癌作用。

Runx3基因编码
一种转录因子，参与调控细胞周期和细胞增殖，被认为在肺癌中的表达
下调，其与CpG-ODN对肺腺癌增殖的关系需要进一步研究。

目的：本研究旨在探究CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用，以及其与Runx3表达的相关性，为肺腺癌的治疗提供新的思路和理论支持。

方法：选取人肺腺癌细胞株作为实验材料，分为实验组和对照组。

实验组分别加入不同浓度的CpG-ODN处理，观察细胞增殖情况。

对照组不加任何处理。

采用Western blot方法检测不同浓度CpG-ODN处理后Runx3的表达情况，并进行相关性分析。

预期结果：预计CpG-ODN能够抑制肺腺癌细胞的增殖，浓度与效应的关系符合一定的规律；CpG-ODN处理后Runx3的表达会显著上调，并且与细胞增殖水平呈现负相关的趋势。

这些发现将为进一步探究CpG-ODN对肺腺癌治疗的潜在作用提供可靠的理论基础。

pbmc增殖实验原理
PBMC增殖实验是一种常用的细胞生物学实验，用于研究外周血
单个核细胞（PBMC）的增殖能力。

PBMC是一种混合细胞群，包括淋
巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等。

进行PBMC增殖实验的原理主
要包括以下几个方面：
1. PBMC分离和培养，首先，从外周血中分离PBMC，通常采用
密度梯度离心法。

然后将PBMC进行培养，提供适当的营养物质和生
长因子，以促进其生长和增殖。

2. 刺激因子的作用，在培养PBMC的过程中，可以加入不同的
刺激因子，如激活剂、抗原或药物等，以模拟体内的免疫应答过程。

这些刺激因子可以激活PBMC，促进其增殖和分化。

3. 测定增殖活性，通过不同的方法来测定PBMC的增殖活性，
常用的方法包括MTT法、放射性核素标记法、流式细胞术等。

这些
方法可以定量或定性地评估PBMC的增殖能力。

4. 数据分析和解释，最后，对实验结果进行数据分析和解释，
比较不同条件下PBMC的增殖活性，探讨刺激因子对PBMC增殖的影
响，从而揭示PBMC在免疫应答中的作用和调控机制。

总的来说，PBMC增殖实验的原理是通过培养PBMC并加入刺激因子，测定其增殖活性，从而研究PBMC在免疫应答中的生物学特性和调控机制。

这种实验方法在免疫学和临床医学研究中具有重要的应用价值。

CpG ODN纳米佐剂的免疫效应及应用进展作者：王征帆万曾培高小鹏来源：《湖北农业科学》2020年第13期摘要：CpG ODN是人工合成的具有非特异性免疫刺激的DNA序列，模拟细菌DNA在体内的应答过程，诱发细胞和体液免疫。

CpG ODN作为新型免疫增强剂在兽医临床上的应用展现出了巨大的潜力，并在免疫学、药物学和药效学等领域备受关注。

然而CpG ODN并不稳定且易被核酸酶酶解，其自身带负电荷，不易结合到细胞表面。

因此，CpG ODN如何高效传递并能有效摄取成了新的挑战。

纳米传递系统的研究使CpG ODN单独或协同疫苗免疫取得显著疗效，为改善CpG ODN在疫苗研究中的应用拓宽了思路。

从CpG ODN纳米佐剂的作用机制、免疫活性、安全性及临床应用等方面进行综述，并对该领域未来的研究方向进行展望，为后续工作提供有益参考。

关键词：CpG ODN;纳米佐剂;作用机制;免疫活性;安全性Abstract： CpG ODN is a synthetic DNA sequence with non-specific immunostimulation which simulates the response process of bacterial DNA in vivo， inducing cellular and humoral immunity. CpG ODN has shown great potential as a novel immunopotentiator in veterinary clinical applications， and has attracted much attention in the fields of immunology， pharmacology and pharmacodynamics. However， CpG ODN is unstable and easily digested by nucleases， which are negatively charged and do not easily bind to the cell surface. Therefore， how to efficiently transfer CpG ODN and effectively ingest it becomes a new challenge. The study of nano-transmission system has achieved significant efficacy for CpG ODN alone or in combination with vaccine immunization，and broadened the thinking for improving the application of CpG ODN in vaccine research. The mechanism of action， immunological activity， safety and clinical application of CpG ODN nanoadjuvant were summarized， and future research directions in this field was prospected， to provide useful reference for follow-up work.Key words： CpG ODN; nano adjuvant; mechanism of action; immunological activity; safetyCpG ODN是人工合成的具有免疫刺激活性的非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸的DNA重复序列，能诱导强烈的细胞免疫和体液免疫，增强机体免疫应答。

分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况摘要免疫佐剂的主要作用是提高抗原（免疫原）的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能诱导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。

近年来，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注，该文着重介绍分子佐剂CpG DNA 的研究进展及应用概况，以为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。

关键词分子佐剂；CpG DNA；研究进展；应用作为一种非特异性免疫增强剂，当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。

同时，既减少了抗原的使用量，增加了机体抗体的产生量，又可以减轻免疫耐受。

近年来，佐剂发展较快，多种新型佐剂不断涌现，黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。

用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键，很多分子佐剂如CpG DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。

1 CpG DNA的研究进展CpG DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能，它包括ODN（oligodeoxynucl-eotides，含CpG基序）和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA，其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。

研究表明，这种排列可激活多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列，其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍，使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别，从而激活相应的免疫应答机制。

CpG DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释，该理论是2000年由美国免疫学家Janeway et al提出的，病原相关分子模式（PAMP）是指天然免疫针对主要靶分子信号，模式识别受体（PRR）是指相对应的识别受体。

天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后，从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。