当前位置：文档之家 › 高效毛细管电泳分离模式

高效毛细管电泳分离模式

  • 格式：ppt
  • 大小：1.43 MB
  • 文档页数：11

下载文档原格式

  / 11

合集下载

高效毛细管电泳分析法

高效毛细管电泳分析法

CGE在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广 阔的应用。在分子生物学上实现了包括寡聚核 苷酸纯化、DNA测序和PCR产物的分析，在蛋 白质化学方面用于多肽和蛋白质分子的分子量 测定，原蛋白和结合蛋白的分离等。此外， CGE还可用于其它带电物质的分离，并可通过 加入手性试剂、离子对试剂、络合试剂等添加 剂改变分离的选择性。
离子色谱的固定相是离子交换树 脂。在固定相的表面，分布着许多适 合于分离阴离子的活性中心（如：
+ − — N(CH3 )3 OH，或适合于分离阳离子
的活性中心（如： SO− H+ ）。当被测 — 3 定的混合离子随流动相（淋洗液）流 经固定相时，由于不同离子的电荷数
或离子半径不同，使它与固定相的作 用力大小不同，造成各种离子在相对 运动的两相之间的分配系数不同，因 此，它们在柱中的迁移速度也就不同， 从而达到分离的目的。
图 毛细管分离示意图
在HPCE中电渗流的一个重要特点是具有 平面流型，电渗的驱动力沿毛细管均匀分 布，它使整个流体象一个塞子一样以均匀 的速度向前运动。而在HPLC中流体流型 则是抛物线型的层流，其中心处速度是平 均速度的2倍。
电渗流的平面流型和HPLC中高压泵驱动 所产生的抛物线型层流的速度曲线不同， 不会直接引起样品组分区带在柱内扩张， 这是HPCE获得高效分离的重要原因之一。
3．毛细管凝胶电泳（capillary gel ．毛细管凝胶电泳（ electrophoresis，CGE） ， ）
CGE是80年代后期发展起来的毛细管电泳 的主要分离模式之一，它将凝胶电泳对生 物大分子的高效分离能力和毛细管电泳的 快速、微量和定量分析相结合，成为当今 分离度极高的一种电泳分离技术。
毛细管电泳一般由一个高压电源，一 根毛细管，一个检测器及两个缓冲液 贮液槽及数据记录系统组成，其仪器 结构示意图如图

第五章 高效毛细管电泳分离技术

第五章 高效毛细管电泳分离技术

第五章高效毛细管电泳分离技术第一节毛细管电泳技术发展简史及其特点电泳是指带电粒子在电场作用下向电性相反的方向迁移的现象。

据此对某些化学或生物化学组分进行分离的技术称为电泳技术。

从1930年瑞典科学家Arne Tiselius首次提出电泳法至今已有70年的历史。

电泳法的发展大致可分为三个阶段。

1950年以前属初创阶段，主要是界面移动自由电泳，一般在U型管内进行，无支持物。

50年代至80年代中期出现了各种有支持物的电泳方法，如纸电泳、醋酸纤维电泳、琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等，70年代后实现了仪器的自动化。

80年代后期出现了毛细管电泳方法，实现了微型化、自动化、高效、快速分析，毛细管电泳技术已经成为同现代色谱技术相比的分析化学领域中的一个令人瞩目的分支。

毛细管电泳（Capillary Electrophoresis，CE）或高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE）是指以毛细管为分离室、以高压电场为驱动力的一类新型现代电泳技术。

毛细管电泳仪的基本结构见图5-1。

HV（0-+30KV）图1 毛细管电泳仪的结构图C—毛细管；D—检测器；E—电极槽；HV—直流高压电源；Pt—铂电极；S—样品；DA—数据采集处理系统完善的毛细管电泳仪应具备（1）有多种施压模式；（2）恒温精度高，恒温范围宽；（3）精确的进样控制；（4）检测器的灵敏度高等条件。

毛细管电泳分离技术用的是内径为5-100μm，外径为370μm，长为10-100cm的弹性熔融石英毛细管，毛细管的特点是（1）体积小；（2）散热快，可承受高电场；（3）可使用自由溶液、凝胶等为支持电解质，在溶液介质下可产生平面形状的电渗流。

毛细管电泳分离技术与传统的平板电泳和现代液相色谱分离技术相比具有很多优点：（1）高效（105-107理论塔板/米）；（2）快速（几十秒至几十分钟）；（3）分离模式多，选择自由度大；（4）分析对象广，从无机离子到整个细胞；（5）高度自动化；（6）样品需量小，运行成本低，无环境污染。

高效毛细管电泳HPEC

高效毛细管电泳HPEC

青霉素发酵液的高效毛细管电泳图
1. 青霉素G钠 ；2. 6-氨基青霉烷酸； 3. 对羟基苯乙酸 ；4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸
2. 中药成分分析 如：黄酮及其苷类分析
HPCE条件
毛细管40cm×50μm (Bio-Rad) 检测波长：UV275nm 进样：10psi × sec 操作压力：20KV(+)→(-) 柱温：20℃ 缓冲液：50mmol/L磷酸二氢钠-12.5mmol/L硼 砂(pH8.0)
北沙参供试品溶液的毛细管电泳图
1. 补骨脂素; 2. 花椒毒素; 3. 异茴芹内酯; 4. 佛手柑内酯; 5. 东莨菪内酯。
复方生脉散的毛细管电泳指纹 图谱研究
利用毛细管电泳(CE)方法建立中药复方 生脉散(红参、麦冬、五味子)的指纹图谱。
采用序贯式均匀设计的方法优化CE分离 条件，确定生脉散指纹图谱 电泳条件为:以pH为9.5、44 mmol/L硼砂、 34 mmol/L SDS为缓冲溶液体系， 运行电压25 kV，温度25℃， 压力进样50 mbar×100 s， 检测波长200 nm。
3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具 有分子筛的作用，可分离质荷 比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化 学上有着十分广泛的应用。
4. 毛细管等电聚焦
根据蛋白质的等电点不同 而进行分离。
E B B F A B D A C F C A B A A E D D D E AE D C C E B B AA BB AA BB CC DD CC DD EE EE FF FF
低
pH梯度
高
毛细管电泳的操作
将运行缓冲液充满毛细管柱 移去进样端缓冲液池，用样品池代替 用电动或压力进样方式进样 将进样端缓冲液放回 毛细管两端加操作电压进行电泳分离 分离样品迁移至检测窗检测，数据记录 和处理

5.3 高效毛细管电泳分离模式

5.3 高效毛细管电泳分离模式

5.2 高效毛细管电泳仪
5.3 毛细管电泳的分离模式
5.4 影响分辨率的因素及操作条件选择
5.5 高效毛细管电泳的应用
结束
2018/12/13
3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，
在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时， 呈电中性，淌度为零。
2018/12/13
4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用 下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中 性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离。
5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液。
2018/12/13
2. 电泳流和电渗流的方向相反，且v电渗流 > v电泳 ， 负电胶束以较慢的速率向负极移动。 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水 性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。 4.可用来分离中性物 质，扩展了高效毛细管电 泳的应用范围。
5.色谱与电泳分离模
式的结合。
2018/12/13
2018/12/13
5.4.6 毛细管电渗色谱
Capillary electroosmostic chromatography ，CEC
在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定
液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配
为分离机理的电动色谱过程；
2018/12/13
请选择内容
5.1 毛细管电泳的基本原理
第五章 毛细管电泳
Capillary electrophoresis, CE
5.4.1 毛细管区带电泳
5.4.2 毛细管凝胶电泳
5.4.3 胶束电动毛细管 色谱 5.4.4 毛细管等电聚焦 5.4.5 毛细管等速电泳
第四节 毛细管电泳分离 模式

5.4 高效毛细管电泳

5.4 高效毛细管电泳
带电粒子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。
粒子在缓冲溶液中的迁移速度υep与电泳迁移μep（淌度）和 电场E成正比：
υep= μepE 淌度μep：单位电场强度下的平均电泳速度,取决于带电粒子 和介质两者的性质。
5. 带电粒子在CE中的迁移速率：
υ =（ υ电渗流+υ离子）
阳离子：和电渗方向一致，电泳速度与电渗速度之和。
一、毛细管区带电泳（CZE）
（一）分离原理
毛细管区带电泳也称为自由溶液溶液区带电泳, 这种 电泳模式的特征是整个系统都用同一种缓冲溶液充满，带 电粒子的迁移速度是电泳和电渗流速度的矢量和。
阳离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出。 中性粒子：无电泳现象，随电渗流同行，在阳离子后 流出。但不同结构的中性分子无法相互分离。 阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流 >ν电泳,阴 离子在负极最后流出。
十二烷基三甲基氯化铵（DTAC）
16
十二烷基三甲基溴化铵（DTAB）
15
十四烷基三甲基溴化铵（TTAB）
3.5
十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）
0.92
•41
•42
三、毛细管凝胶电泳（CGE）
将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成一个细长的网状 多孔凝胶，其具有多孔性，类似分子筛的作用。电荷/质量 比相等但大小不同的分子，在电场力的作用下发生迁移，其 运动速度受到凝胶网状结构的阻碍。大分子受到的阻力大， 移动速度慢，小分子受到的阻力小，移动速度快，从而使它 们得以分离。
特点： （1）进样不均：淌度大的离子比淌度小的进样量大； （2）离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进 不去； （3）特别适合粘度大的试样。
2. 压力进样
（1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样

毛细管电泳的主要分离模式 免费

毛细管电泳的主要分离模式 免费

常用分离模式毛细管电泳是指所有在极细毛细管内进行的电泳新技术，它根据分离机理不同具有多种分离模式，能够提供互不相关而又相互补充的信息。

毛细管电泳常用的分离模式包括毛细管区带电泳（CZE）或称自由溶液毛细管电泳（FSCE）、胶束电动毛细管色谱（MECC）、毛细管凝胶电泳（CGE）、毛细管等电聚焦（CIEF）和毛细管等速电泳（CITP），各分离模式、分离机理见下表。

在大多数情况下，可以通过改变缓冲液的组成来实现不同的操作模式。

毛细管区带电泳毛细管区带电泳（CZE）是毛细管电泳中最简单、最基本、应用最广泛的一种分离模式。

在毛细管中仅填充缓冲液，基于溶质组分的迁移时间或淌度的不同而分离。

除了溶质组分本身的结构特点和缓冲液组成，不存在其他因素如聚合物网络、pH梯度或另一分配相对分离的影响。

CZE分离无需固体支持介质，不存在基质效应，能分离淌度差别很小的组分。

CZE 中由于电渗流的存在，阴、阳离子可以同时分析，中性溶质电泳迁移为零与电渗流同时流出，如下图。

CZE的特点是操作简单、快速、分离效率高，应用范围广。

从原理上讲可以适用于所有具有不同淌度的荷电粒子的分离，分子量范围从十几的小分子离子到几十万的生物大分子。

胶束电动毛细管色谱胶束电动毛细管色谱（MECC或MEKC）是电泳技术和色谱技术巧妙结合的分离新技术。

MECC是在电泳分离缓冲液中加人离子型表面活性剂胶束，使电中性物质能根据其在胶束相和水相的分配系数不同而进行分离。

MECC是毛细管电泳中唯一能同时分离中性物质和离子型物质的分离模式。

它是1984年由Terabe首先报道的一种新型的毛细管电泳技术，也是目前研究较多，应用较广的一种毛细管电泳操作模式。

MECC是基于胶束增溶和电迁移过程进行的，因此其分离要求有两相：一相是带电的离子胶束，是不固定在毛细管中的假固定相，它具有与周围缓冲液介质不同的电泳淌度，也可称为胶束电泳淌度（μmc），并且与分离溶质相互作用（胶束增溶过程）；另一相是导电的水溶液相，在电场作用下，水相由电渗流驱动流向阴极（电迁移过程）。

化学分析中的高效毛细管电泳技术

化学分析中的高效毛细管电泳技术

化学分析中的高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳技术（Capillary Electrophoresis, 简称CE）是一种目前被广泛应用于化学分析领域的分离技术，具有高分离能力、灵敏度和速度。

它可以同时进行多样品并行分析，适用于多种类型的样品，包括生物样品、环境样品、化学样品等。

毛细管电泳技术是基于电场作用下静电互斥效应对分子进行分离的一种方法。

输入狭小的管道（通常为毛细管）中，将溶液中分离物带电后，利用电场作用，将其向前驱动，从而实现品种之间的分离。

传统毛细管电泳技术所使用的电泳液通常是缓冲液，以静电作用之间的力为主导分离手段，运行时间长、分离精度低。

高效毛细管电泳则是一种改进后的技术，分离原理通过毛细管管壁与电泳液之间的热运动提高微分扩散率，导致选择性和分离速度快且准确，使传统毛细管电泳技术所不能完成的任务变得容易。

高效毛细管电泳技术是一种全自动的技术方案，成本较低、易于实验操作、重复性和稳定性优良（特别是借助于机器化和自动化实验流程）。

由于最小的检测体积与毛细管越小,假定其他条件一直不变（比如电泳液浓度、毛细管长度等），则分辨率就越高，尤其是在极小的机器装置中不失为一种非常适宜的选择。

高效毛细管电泳技术具有分离速度快、高分辨率、极高的检测灵敏度和线性范围广等优点，使得化学分析领域的许多应用成为可能，例如药物分析、毒物分析、食品检测、环境监测、生物学及基因研究等。

其中，高效毛细管电泳技术在药物研究领域中得到了普遍的应用。

例如，针对药物制剂快速筛选、有效成分定量分析、药物代谢产物的分析等这些方面，应用高效毛细管电泳技术已成为一种得到很好承认的分析和检测手段。

尽管高效毛细管电泳技术得到广泛的认同，并且得到了工业界和学术界的支持和投资，但是该技术在仪器精密度以及分离柱的可靠性方面仍有一定局限性。

因此，未来需要通过技术创新、展望未来科学发展进步等思想定力等途径不断拓展和改进高效毛细管电泳技术，使之广泛在许多领域得到应用，满足高速度、高分辨率、高灵敏度的需求。

高效毛细管区带电泳色谱的原理和应用

高效毛细管区带电泳色谱的原理和应用

色谱论文高效毛细管区带电泳色谱的原理和应用高效毛细管区带电泳色谱原理、方法和应用（化学化工学院 08级化学专业潘超张循）摘要：高效毛细管电泳( High Performance Capillary Electrophoresis缩写为H P C E ) , 是20 世纪末发展的一种高效、快速的分离技术，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物，是继高效液相色谱（HPLC）之后又一重大进展。

已在国际学术界引起强烈的反响和关注。

高效毛细管区带电泳是最基本、操作最简单、应用最广泛的一种毛细管电泳的分离模式, 通常看作其它模式的母体。

本文主要介绍它的原理和一些应用。

关键词：毛细管电泳毛细管区带电泳电渗流电渗现象引言在毛细管中进行区带电泳，一方面可减少焦耳热效应导致的区带加宽, 另方又可借用高效液相色谱的检测技术实现在线检测, 免除染色、脱色和扫描或照相。

1979年Mikkers 等[1]在内径为0.2mm长为20cm的毛细管中做区带电泳, 达到3.6万理论板。

1981年, Jorgenson和Lukacs做了理论上的初步考察, 认为在毛细管长度足够时, 电泳的分离效率与长度无关而与电压成正比：N=mV/2D。

其中N为理论板数, m为离子的迁移率, V为电压, D为离子的扩散系数。

为了提高电压而又不使电流太大, 同时也为了减小焦耳热效产生的径向温度梯度, 他们使用内径为0.075mm的毛细管。

在管长1米,电压3万伏时, 控制进样量尽量小, 达到约40万理论板的效率（用荧光胺衍生的肽）[2.3]是毛细管区带电泳的一次突破。

毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。

电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加，高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。

为今后毛细管区带电泳的快速发展奠定了基础。

1、高效毛细管区带电泳色谱的原理1.1装置的结构高效毛细管电泳指以高压电场为驱动力, 以毛细管为分离通道, 依据样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分离的一类液相分离技术[ 4]。

第4节 高效毛细管电泳分离模式-精品文档

第4节 高效毛细管电泳分离模式-精品文档
电渗流
>ν
电泳时,阴离子在
负极最后流出,在这种情况下,不但 可以按类分离,同种类离子由于差 速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式；
2019/2/18
二、毛细管凝胶电泳
capillary gel electrophoresis ，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分 离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。
第十一章 高效毛细管电泳 分析法
high performance capillary electrophoresis,HPCE
一、毛细管区带电泳(CZE)
capillary zone electrophoresis
二、毛细管凝胶电泳(CZE)
capillary gel electrophoresis
2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范
围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～ 8kV）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关， 在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈 电中性，淌度为零；
2019/2/18
第五节
应用与进展
结束
application and advances of HPCE
2019/2/18
五、毛细管等速电泳
capillary isotachophoresis ，CITP 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满
毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，
并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负 离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐 渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。

高效毛细管电泳HPCE

高效毛细管电泳HPCE
生物工程系 马 力
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
高效毛细管电泳的发展与进展
毛细管电泳方法虽新，但历史悠久。以毛细管等速电泳 （CITP）的发展为起点可以追溯到1960年甚至更远；多数 学者以毛细管区带电泳的出现为起点（CZE）。CZE是瑞典 科学家Hjerten首先提出的。1981年Jorgenson和Lukacs使用 75umID的熔融石英毛细管做CZE，利用电迁移进样和荧光 检测，在30kV电压下产生了4X105片/m的效率，成为毛细 管电泳史上的一个里程碑。Hjerten先后提出了毛细管凝胶 电泳和毛细管等电聚焦法，它们不仅可以大幅度提高效率， 而且可以实现自动化操作，便于定性定量工作。1986年， Lauer报道其在蛋白质CZE中获得了106片/m的高效率。这些 研究结果激发了关于CE 研究的热潮。而1988年美国BioRad公司商品仪器的推出，更加使毛细管电泳技术的发展进 入了应用的新时代。
生物工程系 马 力
理论
生物工程系 马 力
理论上，若分子(或离子)的相对迁移率不同，且泳动距离 足够长，则不同的物质应形成不同的区带而得以分离。但在 实际操作中传统的凝胶电泳技术有其自身的缺点：(1)凝胶的 制作比较费时，不能重复使用，每次实验的凝胶密度不能完 全相同，常使同一样品的分折结果不能重复，因此在分析中 必须同时以标准样品进行对照。(2)在电泳过程中，凝胶对分 子有一定的吸附作用，使区带变宽，分辨率下降。(3)在凝胶 电泳中，为减少焦耳热带来的对流扰动和凝胶变形等影响， 施加的电压不能太高，通常为5v／cm左右，这样使分子的泳 动速度较慢，在凝胶中的停留时间增长，而分子的扩散也使 区带变宽。要解决这些问题必须增加电场强度，缩短分离时 间，同时尽快将焦耳热耗散，减少热扩散的影响。Knox和 Grushka等发表的一个结论是：如果管子的直径能满足下述方 程，那么自身产生的热量就不会引起太严重的谱带展宽和效 率损失。

高效毛细管电泳技术

高效毛细管电泳技术
技术上采取了两项重要改进： ○ 一是采用了0.05mm内径的毛细管，大大减小了温度效应； ○ 二是采用了高达数千伏的电压，又可进一步使柱径变小， 柱长增加，柱效远高于高效液相色谱；
2.1 电渗现象
当固体与液体接触时，固体表面带一种电荷，则 因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界 面形成双电层，二者之间存在电位差。
202X 添加副标题
毛细管电泳
目录
一、概述-毛细管和电泳技术
+
毛细管柱是毛细管电泳（CE）的核心部件，目前多为2575μm之间，材料为聚四氟乙烯、玻璃和弹性石英，以石英 居多。 电泳：在电解质溶液中，带电离子在电场力的作用下，以不 同的速度向与其所带电荷相反的电极迁移的现象。由于不同 离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。
3.2 DNA分析
DNA分析包括碱基、核苷、核苷酸、寡核苷酸、引物、探针、单链 DNA、双链DNA分析。用CE测DNA序列的应用很多, 如用短寡核苷酸
引物库测DNA 序列、高速DNA 序列、毛细管阵列、毛细板阵列。
3.3 环境分析
01
水源是人类生存最重要的环境 资源，对水质的分析是CE 最 广泛的应用领域之一。CE 的 工作环境是水介质，这一特点 为环境分析带来极大方便。目 前，CE已经可以准确测量出 水环境中的多种多环芳烃、多 氯联苯等。
1. 邓光辉用毛细管电泳安培检测法检出了辣椒粉样品中的苏丹红 I 号。 2. 张辰凌等以 20 mmol/L 乳酸溶液为背景电解质，用毛细管电泳-电容耦合非接触
电导法检测了牛奶中的三聚氰胺的含量。 3. 管月清等采用毛细管电泳-电化学检测法同时测定了肉制品中盐酸克伦特罗与沙丁
胺醇的含量。
四、毛细管电泳的特点

毛细管电泳简介

毛细管电泳简介

毛细管电泳简介目录•1拼音•2英文参考•3高效毛细管电泳的基本原理•4高效毛细管电泳的分离模式o 4.1毛细管区带电泳（Capillary Zone Electroporesis，CZE）o 4.2毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis，CGE）o 4.3胶束电动斩学毛细管色谱（Micellar Electrokiic Capillary Chromatography，MECC）o 4.4等电聚焦电泳（Isoelectric Focusing，IEF）o 4.5等速聚焦电泳（Isotachophoresis，ITP）o 4.6毛细管电色谱(capillary electrochromatography,CEC) o 4.7亲和毛细管电泳(affinity capillary electrkphoresis,ACE)o 4.8电动色谱(electrokiic chromatography,EKC)o 4.9非水相毛细管电泳(nonaqueous capillary electrphoresis,NACE)•5高效毛细管电泳的临床应用o 5.1血清蛋白质分析o 5.2免疫堿法(Immunosubtraction)鉴别单克隆蛋白的特征o 5.3血红蛋白成分的分析o 5.4肌红蛋白分析o 5.5脂蛋白分析o 5.6糖化血红蛋白(HbAlc)分析o 5.7同功酶的分离o 5.8免疫复合物分析o 5.9DNA片段和染色体分析o 5.10在治疗药物监测中的应用o 5.11其他小分子/离子的检测能•6展望1拼音máo xì guǎn diàn yǒng2英文参考Capillary Electrophoresis毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛细管电泳(HPCE), 是近年来发展最快的分析方法之一。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关， 在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈 电中性，淌度为零；
2020/12/7
4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下 迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止 移动，形成窄溶质带而相互分离；
5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； 6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测； 7. 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。
四、毛细管等电聚焦
capillary isoelectric focusing，CIEF 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术；
2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范 围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V） 时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度；
2020/12/7
五、毛细管等速电泳
capillary isotachophoresis ，CITP 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满 毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间， 并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负 离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐 渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。
2020/12/7
三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）
micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界
浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作
用下，胶束在柱中 移动。
最基本、应用广的分离模式；
2020/12/7
二、毛细管凝胶电泳
capillary gel electrophoresis ，CGE
将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分 离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模 式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘 度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。
4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用；
2020/12/7
六、毛细管电渗色谱
capillary electroosmostic chromatography ，CEC 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电
渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动 色谱过程；
2020/12/7
一、毛细管区带电泳
capillary zone electrophoresis ，CZE
带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流 出； 阴离子：两种效应的运动方向 相反；ν电渗流 >ν电泳时,阴离子在 负极最后流出,在这种情况下,不但 可以按类离,同种类离子由于差 速迁移被相互分离。
2020/12/7
capillary isotachophoresis ，CITP 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同
(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小；
沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4 电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号， 该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号 中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队；
2020/12/7
2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 > ν电泳 ，
负电胶束以较慢的速度向负极移动； 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性
强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应
用范围； 5.色谱与电泳分离模式
的结合。
2020/12/7