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河北医科大学硕士学位论文胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究姓名：王丽琴申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：王维平;李春岩2003.3.1中文摘要胚胎大鼠背根神经节体外培养的实验研究摘要目的：目前神经组织培养技术是神经科学一项很有价值研究手段和方法。
背根神经节（ｄｏｒｓａｌｒｏｏｔｇａｎｇｌｉｏｎｓＤＲＧｓ）是周围神经系统（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖｅｓｙｓｔｅｍ，ＰＮＳ）的感觉神经元，ＤＲＧｓ的体外培养模型已广泛用于轴突的导向及再生、突触发育和可塑性、中枢神经系统和周围神经系统的髓鞘形成，神经营养因子作用及受体分布、神经细胞衰老机制、基因治疗、组织工程等神经科学的研究，成为遗传性、获得性神经病的一个新的研究途径。
格林一巴利综合征（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－ＢａｒｒｅｓｙｎｄｒｏｍｅＧＢＳ）是包括许多临床亚型的周围神经系统疾病。
目前认为是体液免疫和细胞免疫共同介导的神经系统自身免疫性疾病，但病因及发病机制并不十分明确。
本实验建立ＤＲＧｓ体外培养模型为进一步研究格林．巴利综合征提供一个崭新的研究工具。
本课题建立了体外胚胎大鼠背根神经节的分离培养及纯化体系，在光镜水平从细胞形态学角度观察了培养神经元细胞的生物学特性。
方法：（１）采取神经组织单层原代分离培养的方法建立ＤＲＧｓ的混合培养体系：无菌取孕１５天（Ｅ１５）Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠胚胎的ＤＲＧｓ，用胰蛋白酶消化２０分钟，再用机械吹打法将ＤＲＧｓ制成单细胞悬液，以１０６细胞密度种植在预先包被细胞基质成分多聚赖氨酸（ｐｏｌｙ．Ｌ．１ｙｓｉｎ，ＰＬＬ）和层粘蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）的培养板中，加入含胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌＩｉＩｌｅＩ中文摘要ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）的ＮＢｌ培养基，于Ｃ０２培养箱中培养。
（２）＿币ｔＪ用差速贴壁法建立ＤＲＧｓ的分离纯化体系：将胰蛋白酶消化后的单细胞悬液首先种植在未包被基质的３５ｍｍ的培养皿中，于Ｃ０２培养箱中孵育５０分钟，收集未贴壁的细胞悬液以１０６细胞密度种植在预先包被ＰＬＬ和ＬＮ的培养板中，在ＮＢｌ培养基中培养。
高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【摘要】目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型.方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal (NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn.采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度.结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45 d,纯度可达到95％以上.结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)003【总页数】4页(P358-361)【关键词】背根神经节神经元;原代培养;大鼠胚胎【作者】韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【作者单位】广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33体外培养可使相互独立的神经元和神经胶质细胞在与体内环境相似的条件下生长。
随着相对纯化的细胞再次共培养，可进一步研究神经元的生长、神经元——神经胶质细胞的相互作用，特别是髓鞘形成等。
在体内，背根神经节神经元（DRGn）的轴突主要从中枢神经系统（CNS）和外周神经系统（PNS）伸展出来，在中枢（少突胶质细胞）和外周（雪旺细胞）神经胶质细胞的诱导下逐渐形成髓鞘。
与此同时，体外培养的DRGn在加入神经生长因子（NGF）后将会有较长的生命周期。
因此，共同培养纯化的DRGn和成髓鞘细胞（如雪旺氏细胞或少突胶质细胞）是一种较为理想的用于研究髓鞘形成的方法，但神经细胞分化成熟后不再具备分裂能力，其体外培养对培养体系要求较高，培养具有较大的困难。
新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定摘要】目的：建立一种简单、稳定、高效的新生大鼠背根神经节神经元原代培养方法。
方法：摘取新生24h SD大鼠背根神经节，采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶消化，制成单细胞悬液，接种于Neurobasal/B27无血清培养液中。
将培养3d 的DRGn于倒置相差显微镜下进行形态学观察，扫描电镜行细胞形态学检测，应用β-tubulinⅢ进行免疫细胞化学染色，鉴定细胞纯度。
结果：体外培养的背根神经节神经元生长状态良好，纯度可达到(92±6)%。
结论：本实验方法简单、稳定、高效，可以获得高纯度的背根神经节神经元。
【关键词】背根神经节；动物实验；细胞培养；纯化【中图分类号】R74 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）21-0034-03The dissection, purification and culture of dorsal root ganglion neurons from new born ratsZhang Yuyao1, Liang Chen1, HU Xueyu(corresponding author)21 Fourth Military Medical Un iversity, Xi’an, Shanxi, 710032, China2 Department of orthopaedics, Xijing hospital,Fourth Military Medical University, Xi’an, Shanxi, 710032, China【Abstract】Objective To establish an simple, efficient, reliable method for the purification culture system of dorsal root ganglion neurons derived from new born rats. Methods Dorsal root ganglions harvested from new born SD rats were digested with the mixture of trypsin and collegonease Ⅳ, then turned into single cell suspension and plated in neuralbasal media. The purified rate was evaluated according to cell count and β-tubulinⅢ immunocytochemistry stain. Results Cultured dorsal root ganglion cells could survive healthily. The purification rate of neurons was（92±6）%. Conclusion The method, which is used for culture and purification of DRGn, is a simple, efficient and reliable way. Using it could obtain highly purify neurons.【Key words】Dorsal root ganglion; Animal experimentation;CellCulture;Purification背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）主要由感觉神经元组成，参与脊髓反射与感觉功能的调节，DRG因其细胞种类、生物学特性单一，越来越受到人们的重视。
体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。
神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。
(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。
(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。
(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。
我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一、鸡胚背根神经节组织块培养主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。
在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。
1、材料和方法（1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一次。
（2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气室部蛋壳。
（3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。
（4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。
（5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。
2、结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)内是否存在神经前体细胞.方法:取成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片,进行Brdu,Nestin,P75免疫荧光组织化学检测,分别取成年和胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养,观察其增殖与分化情况,并行Nestin免疫组织化学和Brdu,P75,NF,GFAP免疫荧光组织化学鉴定.结果:在成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片上均见有Brdu/Nestin和Nestin/P75免疫荧光双标细胞.细胞培养观察到取自DRG的细胞有分裂增殖,呈Nestin免疫组织化学阳性反应和Brdu,P75免疫荧光组织化学阳性反应;培养第三代细胞加入胎牛血清后出现分化,分化细胞呈NF和GFAP免疫荧光组织化学阳性反应.结论:大鼠DRG内存在有分裂增殖的神经前体细胞,这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞.
作者：宋嵬曾水林朱建宝王磊李升阎荣李凤飞SONG Wei ZENG Shui-Lin ZHU Jian-Bao WANG Lei LI Sheng YAN Rong LI Feng-Fei 作者单位：东南大学神经生物学研究所,江苏,南京,210009 刊名：第四军医大学学报ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 27(18) 分类号：Q24 关键词：大鼠神经前体细胞神经节,脊细胞培养技术免疫荧光组织化学。
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法为了获得高质量的大鼠神经节样本，本文提出了一种改良的取材方法。
通过对大鼠腰椎进行解剖，切除脊柱并暴露出神经节，使用显微镊子和显微注射器进行取材，避免了常规方法中可能出现的神经节损伤和污染，同时保证了样本的完整性和纯度。
本方法在研究神经退行性疾病等方面具有应用前景。
关键词：大鼠腰椎；神经节；取材；改良方法引言神经节是神经系统中重要的组成部分，其功能与神经元的生存和发展密切相关。
因此，研究神经节的结构和功能对于理解神经系统的发育和疾病具有重要意义。
大鼠是神经科学领域中常用的实验动物，其神经节样本的获取对于研究神经退行性疾病等具有重要意义。
然而，传统的取材方法存在一些问题，如神经节损伤、污染等，影响了样本的完整性和纯度。
因此，本文提出了一种改良的大鼠神经节取材方法，以期提高样本的质量和可靠性。
材料与方法1. 实验动物本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，由实验动物中心提供。
2. 取材工具显微镊子、显微注射器、手术刀、剪刀、镊子、无菌手套、无菌巾等。
3. 取材步骤3.1 麻醉和解剖将大鼠置于麻醉盒中，用异氟醚气体麻醉2-3分钟，待大鼠完全麻醉后，将其移至手术台上。
用无菌巾将大鼠的四肢固定，用手术刀在腰部进行皮肤切开，剪开腹肌，暴露出腰椎。
3.2 切除脊柱用剪刀将腰椎两侧的肌肉和韧带剪开，用镊子将椎弓切除，将脊柱暴露出来。
用剪刀将脊柱切开，切除椎体和椎间盘，暴露出神经节。
3.3 取材用显微镊子将神经节取出，放置在无菌PBS缓冲液中。
用显微注射器将PBS缓冲液注入神经节，使其膨胀，便于后续的分离和处理。
将取出的神经节进行离心，去除PBS缓冲液，即可得到纯净的神经节样本。
结果本方法成功地获得了大鼠腰膨大背根神经节样本，样本完整、纯净。
与传统的取材方法相比，本方法避免了神经节的损伤和污染，取材效率高，样本质量好。
讨论本文提出的大鼠神经节取材方法具有一定的优势。
胚胎大鼠皮质神经元培养中细胞消化及重悬改进-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——随着现代神经科学及分子生物学的发展，在多个研究领域中原代大鼠大脑皮层神经细胞的培养日益被广泛应用，不仅促进了对神经元结构和功能的进一步了解，还为大脑神经系统疾病发病机制研究及药物的作用机制研究提供了一个平台。
但在具体的实验操作中，胎鼠大脑皮层神经元的分离和体外培养方面仍然存在一系列问题，如胎鼠胎龄难以控制，新生鼠进行神经元培养时细胞存活率较低，细胞数量少、细胞损伤大及神经元纯度欠佳等，严重限制了后续研究的进行。
因此，本研究在参照相关文献[1-5]及反复实验的基础上，对细胞消化及重悬细胞等步骤进行了适当改进，得到了较理想的培养结果。
详情如下。
1 材料与方法1.1材料1.1.1实验动物将适龄的Wistar大鼠（吉大医学部实验动物中心提供）雌雄各一只合笼过夜，次日观察，以见到阴栓开始将该雌鼠单独饲养并计算时间。
以24h为1d,至第16d时可用于实验。
1.1.2实验试剂及溶液的配制多聚赖氨酸（分子量70,000-150,000）购自美国Sigma公司。
L-谷氨酰胺（200mM 100X）、DMEM培养基、胰蛋白酶购自美国GIBCO公司。
细胞爬片（24孔）购自alafa公司。
胎牛血清购自四季青公司。
B27、Neurobasal神经元专用培养液、兔抗大鼠一抗、山羊抗兔荧光二抗购自美国life公司。
PBS缓冲液pH调至7.3-7.4,高压灭菌，4℃保存。
PDL包被液：用三蒸水配制1mg/ml的PDL储液，微孔滤膜过滤除菌，4℃保存。
含血清培养液：87%Neurobasal+2%B27（50）+1%L-glutamine（200mmol/L）+10%胎牛血清，混匀，4℃保存。
无血清培养液：97%Neurobasal+2%B27（50）+1%L-glutamine（200mmol/L）,混匀，4℃保存备用。
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察大鼠脊髓背根神经节（DRG）是感觉神经元的主要来源，内部存在着神经前体细胞。
这些细胞不仅具有分化为神经元的能力，还有一定的自我更新和再生能力。
因此，细胞生物学家们对大鼠DRG内神经前体细胞的观察十分关注，并期待能够通过对其进行深入研究，不仅了解神经类肿瘤和神经退行性疾病的发生机制，而且希望能够利用这些细胞为神经系统疾病的治疗提供新思路。
首先，大鼠DRG内神经前体细胞的来源和成分十分复杂。
这些神经前体细胞既有神经干细胞，也有神经前体细胞，细胞形态各异，可以分为大小、形状以及染色性质不同的细胞类型。
在活体的观测中，DRG内神经前体细胞常常呈现出“鱼鳞状排列”的现象，形成了独特的细胞结构。
这种观察所得数据，为研究神经退行性疾病的治疗提供了重要的参考信息。
其次，研究人员在细胞培养过程中，发现大鼠DRG内神经前体细胞的分化过程可以被不同的细胞因子和基因调控。
这些因素和基因以不同的方式影响着神经前体细胞的命运，例如维生素A酸、衍生物1类、神经生长因子等物质都能够诱导DRG内神经前体细胞向神经元的方向分化发展。
同时，研究人员还发现，神经系统发育过程中的一些信号途径，例如Wnt、Shh和Nodal等，也能够对神经前体细胞的分化起到调控作用。
无论在体内还是体外的情况下，这些调控因素对DRG内神经前体细胞的影响表现出了显著的效果。
因此，研究DRG内神经前体细胞分化的因素，可为神经系统疾病特别是神经类肿瘤的治疗提供新的策略。
最后，大鼠DRG内神经前体细胞在神经系统衰退性疾病的治疗中具有很大的潜力。
当前很多神经退行性疾病，所造成的背景环境的恶化对于这种病因有着重要的作用，在这样的病因环境下，DRG内神经前体细胞的再生能力很差，难以治疗。
但是，在特定的微环境下，这些细胞具有一定的自我修复能力，亦可通过移植方式调整周围的环境来保证其正常分化。
当前的一些实验表明，如果通过移植方式将DRG内神经前体细胞与一些适当的细胞因子和置换为正常化环境，这些细胞就能重新发挥出分化为神经元的能力，有效地治疗与神经系统细胞死亡有关的疾病。
大鼠背根节细胞原代培养⒈16mm2盖玻片置于70%酒精中浸泡2h，之后用擦镜纸擦拭干净，晾干，锡箔包裹，高温高压蒸汽灭菌20min；⒉将1/200多聚赖氨酸（30-35µl）滴于盖玻片中央，不能超过盖玻片边缘，盖玻片置于小培养皿内，小培养皿再置于大培养皿内，大培养皿放置在水盒内，于CO2培养箱内孵育12h；（1/200多聚赖氨酸的配制：300µl水中加入1.5µl多聚赖氨酸，水盒内需保持足够的湿度，即在盒盖上可以看到明显大水珠）⒊所有解剖器械浸泡在70%（或75%）酒精中，刀片于实验开始前半小时浸泡于酒精内所有实验用具（吸头<灭菌>、培养皿、离心管、试管架、移液枪、解剖镜等）及超净工作台喷洒70%酒精，并于紫外灯下照射消毒；⒋配制20ml OF培养基（用前取适量<2-3ml>分别放置在2个一次性小培养皿内），取适量4°C 预冷的PBS于2个一次性小培养皿（漂洗脊柱）和1支30ml离心管内（稀释器械上的消毒酒精）；（20ml OF：18ml optimum<基础培养基>+2ml 10%FCS）⒌将约3周龄大鼠置于75%酒精内，消毒并溺死，从尾根处剪开皮毛，取脊柱（尾根至颈下）；⒍所取脊柱放于PBS（室温）内清洗，第一次漂洗修剪脊柱上多余的肌肉，第二次漂洗纵行剪开椎管，取出椎孔内的背根节，并放置在含有OF的培养皿内；（背根节在脊髓两侧的椎孔内，取时，应小心、一点点剥离脊髓）⒎用镊子压住背根节一侧，用刀修剪背根节，切除轴突，并将被膜撕去，余下的膨大部分移入另一含有OF的培养皿内；⒏用无针头的2ml注射器吸取背根节膨大部分，放置于15ml离心管底部，留取约300µl培养液，再加入500µl OF和4µl胶原酶（5U/ml，100×），轻弹混匀后，置于CO2培养箱内孵育40min；（也可先全部去除离心管内的OF，再加入800µl OF和4µl胶原酶，胶原酶的用量可根据配制时间的长短而酌情增减离心管在培养箱内室，可将管盖稍稍拧松一点，取出时，记得拧紧管盖！）⒐孵育的同时，取出盖玻片，吸去其上的多聚赖氨酸，加入30-35µl 1/200层粘连蛋白；（多聚赖氨酸、层粘连蛋白有增强粘附的作用）⒑去除离心管内的液体，再一次加入500µl OF和4µl胶原酶，CO2培养箱内孵育40min，期间可轻微摇晃数下；⒒吸尽离心管内的液体，用PBS清洗3次（每次1ml PBS），动作轻柔，不要打散细胞，尽量完全去除PBS后，再用胰酶清洗1次；⒓加入500µl 0.25%胰酶（450µl PBS+50µl 2.5%胰酶），置于CO2培养箱内孵育30min；（加入胰酶后，可稍稍吹打）⒔轻轻尽量吸出胰酶液体，加入少量OF进行中和，然后将OF吸出；（OF的用量没有严格的规定，可多可少，一般50µl，中和的时间大约1min，OF能很快中和胰酶的作用）⒕加入300µl OF和5µl DNase，轻轻吹打，尽量减少气泡的产生，吹打至离心管内无明显团状或棉条状物，液体呈淡乳白色混浊液；⒖于1支新的15ml离心管中加入3ml 12%BSA，并将上述细胞悬液轻轻地、一滴一滴地加于BSA液体表面，1100rpm水平离心10min；（BSA的作用：分层，可使细胞沉于管底，而细胞碎片等杂质悬浮于BSA中细胞悬液加于BSA表面后，会稍稍下沉，但迅速上浮至BSA液面上）⒗尽量吸去BSA，再加入OF，700rpm有角度离心1min；（OF的用量不定，1ml左右，目的是为了去除BSA）⒘轻轻拿出，尽量吸除液体，再加入OF，轻柔吹打细胞，以形成细胞悬液；（OF的用量依据细胞沉淀的多少和盖玻片的个数而定，一般每个盖玻片上可滴加30-50µl 细胞悬液。
胚胎大鼠背根神经节神经元的原代培养孙青;梁晓春;张宏【摘要】目的原代培养胚胎大鼠背根神经节神经元(DRGn),并观察其生长特性.方法取E15 SD胎鼠的背根神经节,用胰蛋白酶消化法分离成单细胞,通过密度梯度离心法和差速贴壁法进行分离纯化,在无血清培养基中培养,用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体鉴定神经元.结果纯化培养神经元生长状态良好,纯度可达93％左右.结论该方法具有较好的可操作性和可重复性,用于DRGn的相关实验研究.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)001【总页数】4页(P66-68,73)【关键词】背根神经节神经元;原代培养;胚胎大鼠【作者】孙青;梁晓春;张宏【作者单位】100730 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院中医科;100730 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院中医科;100005 中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所细胞中心【正文语种】中文【中图分类】R3背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron，DRGn)是周围神经系统重要的初级感觉神经元，能量代谢旺盛，线粒体丰富，这种结构和功能特点使其对高糖和氧化应激等具有高度易感性，是周围神经病变重要的靶细胞之一[1]。
DRGn因其原代培养难度大、纯化复杂、培养基条件要求高，相关报道较少。
本研究介绍一种实验中摸索出的DRGn原代培养方法，旨在为周围神经病变的体外研究提供可靠的实验模型。
1.实验动物：孕15天(E15)的SPF级Sprague Dawley(SD)大鼠，购自北京大学医学部实验动物科学部，实验动物许可证号：SCXK(京)2006-0008。
2.主要试剂与仪器：Neurobasal培养基、DMEM高糖培养基、神经生长因子、B27添加剂(美国Invitrogen公司)；胎牛血清、胰蛋白酶(美国Hyclone公司)；L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、Hepes、多聚赖氨酸(美国Sigma公司)；青霉素、链霉素(华北制药集团有限公司)；人淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制品公司)；兔抗大鼠NSE多克隆抗体(丹麦Dako公司)；其余试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
大鼠胚胎神经干细胞的培养与鉴定胡钧涛;涂汉军;张力;李东升;李新建;黄宽明;付锐【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2006(5)1【摘要】目的体外培养大鼠胚胎神经干细胞(NSCs),观察其生长、增殖特点.方法取孕15d的大鼠,采用机械分离法获取海马区细胞,以106个细胞/ml的密度接种到无血清NSCs培养基中培养,分离纯化至第5代.以10%胎牛血清(FBS)和2%多聚赖氨酸诱导分化,免疫细胞化学鉴定.结果取NSCs的细胞球及诱导分化后的细胞作免疫细胞化学染色鉴定,细胞分别呈小鼠抗巢蛋白(nestin)、小鼠抗微管蛋白(β-tubulin)、豚鼠抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小鼠抗O4免疫化学反应阳性.结论大鼠胚胎脑海马区有NSCs存在,离体培养时能分裂增殖,并能被诱导分化.【总页数】4页(P5-8)【作者】胡钧涛;涂汉军;张力;李东升;李新建;黄宽明;付锐【作者单位】郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000;郧阳医学院附属太和医院神经外科,湖北,十堰,442000【正文语种】中文【中图分类】R394.26【相关文献】1.SD大鼠胚胎神经干细胞悬浮培养与鉴定 [J], 贺菊芳;余资江;朱晓瓞;方丽丽;王俊婕;2.Wistar大鼠胚胎脑源性神经干细胞分离、培养及其鉴定 [J], 葛岩;王医术;张丽红;高婷;廖祥宇;李亚娟;王心蕊;李玉林3.胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究 [J], 孔令胜;张军臣;张冉;赵万巨;邵彤;杨全祥4.大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究 [J], 周小兵;邹安琪;江志群;刘德华5.胚胎大鼠海马源性神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定 [J], 潘松;付勇;刘强;刘杰;刘立思因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓源运动神经元的方法探讨王菲; 王春芳; 李鹏飞; 蔚洪恩; 韩树峰; 李承罡【期刊名称】《《中国组织化学与细胞化学杂志》》【年(卷),期】2009(000)004【摘要】目的探讨应用免疫磁珠法分选脊髓源性运动神经元的实验条件,为研究运动神经元的特性,培养和移植创造有利条件。
方法取孕16天胚胎大鼠的脊髓腹侧组织,制备成单细胞悬液,应用免疫磁珠分选系统,在无血清限定性培养基条件下获得相对纯化的运动神经元。
应用运动神经元特异的胆碱乙酰转移酶(ChAT)抗体对培养细胞进行免疫细胞化学鉴定。
结果分离纯化的细胞在体外可以存活,经免疫荧光检测,ChAT阳性率可达95%。
结论本实验提供了一种有效的纯化脊髓运动神经元的方法,纯化所得的运动神经元可用于进一步的运动神经元的后续实验研究。
【总页数】4页(P422-425)【作者】王菲; 王春芳; 李鹏飞; 蔚洪恩; 韩树峰; 李承罡【作者单位】山西医科大学医学实验中心太原030001; 山西医科大学第一医院骨科太原030001; 山西医科大学第二医院骨科太原030001【正文语种】中文【中图分类】R322.812【相关文献】1.胚胎大鼠脊髓运动神经元的体外培养及鉴定 [J], 宋学琴;李春岩;吴淑玉;王丽琴;王晓娟2.生长底物对培养胚胎大鼠脊髓运动神经元的作用 [J], 宋学琴;王丽琴;吴淑玉;李春岩3.免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓源运动神经元的方法探讨 [J], 王菲; 王春芳; 李鹏飞; 蔚洪恩; 韩树峰; 李承罡4.免疫磁珠法分选胚胎大鼠脑神经干细胞的初步研究 [J], 高国一;卢亦成;江基尧;李莉;张玲珍;朱诚5.免疫磁珠法分离纯化SD大鼠神经干细胞 [J], 王雅;曲巍;周欣荣;邵正波;原慧萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
