实验二 影响酶促反应的因素

酶促反应速率的影响因素酶是一种特殊的蛋白质，它们能够催化化学反应并加速反应速率。

酶促反应速率受多种因素的影响，这些因素可以分为物理因素和化学因素两类。

一、物理因素1.温度：酶的反应速率随着温度的升高而增加，直至达到最适温度，此时反应速率最大。

但是，如果温度过高，酶的结构就会发生变化，导致失活。

因此，温度的升高对酶的活性具有双重影响，需要控制在适宜范围内。

2. pH值：不同的酶在不同的pH值下具有最适活性。

例如，胃蛋白酶在酸性环境下具有最高活性，而肠蛋白酶则在碱性环境下具有最高活性。

当环境pH值偏离最适值时，酶的活性会降低。

3.底物浓度：底物浓度对酶反应速率的影响呈现一定的规律。

当底物浓度较低时，酶活性受限于底物浓度；当底物浓度逐渐增加时，酶反应速率也呈现出增加的趋势，但是当底物浓度达到一定程度时，酶的活性已经达到饱和状态，继续增加底物浓度也不会增加酶的反应速率。

二、化学因素1.酶和底物的亲和力：酶和底物的亲和力越大，酶反应速率就越快。

酶和底物的亲和力受到酶的三级结构和底物的形状等因素的影响。

2.离子强度：离子强度对酶的活性也有一定的影响。

当离子强度过高时，离子和酶的结合会阻碍酶和底物之间的结合，导致酶的活性下降。

3.抑制剂：抑制剂是一种能够抑制酶活性的物质。

抑制剂可以分为可逆抑制剂和不可逆抑制剂。

可逆抑制剂可以通过改变酶和底物之间的亲和力来抑制酶活性，而不可逆抑制剂则通过破坏酶的结构来抑制酶活性。

酶促反应速率受到多种因素的影响，需要在实验设计和操作中充分考虑这些因素，以保证实验结果的可靠性和准确性。

同时，对于酶催化反应机理的研究，也需要深入探究这些因素的作用机制，以加深对酶催化反应的认识。

酶促反应的影响因素影响实验八酶促反应的影响因素一、目的要求1(了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

2(学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。

二、实验原理在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、 pH 值称为该酶的最适温度、最适pH。

在酶促反应中，酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。

本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。

淀粉(遇碘呈蓝色)?紫色糊精(遇碘呈紫色)?红色糊精(遇碘呈红色)?无色糊精(遇碘不呈色)?麦芽糖(遇碘不呈色)?葡萄糖(遇碘不呈色)。

所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

三、实验器材试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管(1 mL6支、2 mL4支、5 mL4支)、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。

四、实验试剂1(新鲜唾液稀释液(唾液淀粉酶液):每位同学进实验室自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5 min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。

2(1%淀粉溶液A(含0.3%NaCl):将1 g可溶性淀粉及0.3 g氯化钠混悬于5 mL 蒸馏水中，搅动后，缓慢倒入沸腾的60 mL蒸馏水中，搅动煮沸1 min，冷却至室温，加水至100 mL,置冰箱中保存。

3(1%淀粉溶液B(不含NaCl)4(碘液:称取2 g碘化钾溶于5 mL蒸馏水中，再加入1 g碘，待碘完全溶解后，加蒸馏水295 mL，混匀贮于棕色瓶中。

5(1%NaCl溶液6(1%CuSO溶液 47(缓冲溶液系统按下表混合配制。

酶的专一性及影响酶促反应的因素一实验目的通过本实验，证明酶对底物催化的专一性，以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。

二实验原理唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。

麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。

淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。

以此证明酶催化底物的专一性。

淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色；而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。

通过颜色变化可以了解淀粉的程度，以观察PH、温度激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

三药品器材试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱，冰箱等。

1.1%淀粉溶液称取可溶性淀粉1g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加蒸馏水至100ml。

此液应新鲜配制，防止细菌污染。

2．1%蔗糖溶液称1g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。

3．PH6.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液154.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液45.5ml混合即可。

4．PH4.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液98.6ml，0.1mol/L柠檬酸溶液101.4ml混合即可。

5．PH8.0缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液194.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液5.5ml混合即可。

6．班氏试剂溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml 为A液。

取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml ,加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。

将A液缓慢倒入B液中，混合即可。

7．稀碘液称取碘1g，碘化钾2g ,溶于300ml蒸馏水中。

8．0．9%NaCl溶液。

9．0．9%CuSO4溶液。

10．0．1%Na2SO4溶液。

实验影响酶促反应速度的因素一、实验目的通过本实验了解温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

二、实验原理唾液淀粉酶催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。

淀粉溶液与碘反应呈蓝色；糊精根据分子大小，与碘反应分别呈蓝、紫、红、无色等不同的颜色；麦芽糖不与碘呈色。

唾液淀粉酶的活性受温度、酸碱度、抑制剂与激活剂等的影响。

温度：温度降低，酶促反应减弱或停止；温度升高，反应速度加快。

当上升至某一温度时，酶促反应速度达最大值，此温度称为酶的最适温度。

由于酶的化学本质是蛋白质，温度过高会导致蛋白质构象的改变，因此如果温度继续升高，反应速度反而会迅速下降甚至完全丧失。

酸碱度：唾液淀粉酶最适pH为pH6.9，高于或低于酶的最适pH值，都将引起酶活性的降低，过酸或过碱的反应条件可使酶活性丧失。

抑制剂与激活剂：酶的活性常受某些物质的影响，能增加酶的活性称为酶的激活剂：降低酶活性且不使酶蛋白变性的称为酶的抑制剂。

如Cl-为唾液淀粉酶的激活剂，Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。

根据上述性质，可以用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断唾液淀粉酶是否存在及其活性大小。

三、试剂及器材1.试剂：1％淀粉溶液，1％氯化钠溶液，1％硫酸铜溶液，1％硫酸钠溶液，碘液，磷酸氢二钠（0.2mmol/L）, 柠檬酸溶液(0.1mmol/L)。

2.器材：试管，试管夹，恒温水浴锅(37℃),吸管，滴管，试管架。

四、实验操作：1.收集唾液：实验者先将痰咳尽, 用自来水漱口, 清除口腔内食物残渣, 再含蒸馏水约15 mL, 作咀嚼咕漱运动, 3min后吐入小烧杯中备用。

2.观察温度对酶促反应速度的影响取试管3支，编号1,2,3，按下表操作：3. 观察pH对酶促反应速度的影响（2）取试管3支，编号1,2,3，按下表操作：4观察激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响取试管4支，编号1,2,3,4，按下表操作：五、实验结果及分析六、思考题影响酶促反应速度的因素有哪些？它们如何影响酶的活性？。

酶促反应动力学实验报告14301050154 杨恩原实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。

在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度[S]的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。

底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(Michaelis-Menten方程)即：式中Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数，[S]为底物浓度当v=Vmax/2时，则Km=[S]，Km是酶的特征性常数，测定Km是研究酶的一种重要方法。

但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得Km和Vmax。

若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-Burk方程)，则此方程为直角方程，即:以1/V和1/[S]分别为横坐标和纵坐标。

将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出Km值。

本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据1/v和1/[S]的倒数作图，计算出其Km值。

二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。

酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。

可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。

竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大，但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。

非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合，故其Km值不变，然而却能降低其最大速度Vmax。

本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。

实验步骤：实验一:底物浓度对酶促反应速度的影响1.取试管9支，将0.01mol/L基质液稀释成下列不同浓度：管号试剂2.另取9支试管编号，做酶促反应：管号试剂3.混匀，37 ℃水浴保温5分钟左右。

2014--2015学年生物（苏教版）必修一同步导学案4.1.3酶促反应的影响因素一、目标导航1．酶促反应的影响因素二、知识网络1．影响酶活性的因素：温度和pH。

①温度：在较低的温度范围内，酶促反应的效率随着温度的升高而加快。

反应速率最高时的温度称为酶促反应的最适温度。

适当升高温度能加速酶促反应，但过高的温度又加速了酶蛋白的变性。

②pH：在一定的pH下，酶表现出最大活性，此时的pH称为最适pH，高于或低于此pH，酶的活性均降低。

过酸、过碱会使蛋白质变性而失去活性。

不同的酶最适pH是不同的。

（6）影响酶促反应速率的因素：pH、温度、酶的浓度、底物浓度等。

三、导学过程知识点一影响酶催化作用的因素甲乙丙1．酶相关实验的设计思路（1）根据两类催化剂催化H 2O 2产生O 2的多少判断酶的高效性 2H 2O 2――→H 2O 2酶2H 2O ＋O 2↑（气泡多而大）；2H 2O 2――→Fe 3＋2H 2O ＋O 2↑（气泡少而小）。

（2）根据斐林试剂与还原糖发生氧化还原反应判断酶的专一性蔗糖――→淀粉酶蔗糖(非还原糖)＋斐林试剂→蔗糖＋斐林试剂（无砖红色）。

（3）根据碘试剂与淀粉的颜色变化判断淀粉的水解淀粉＋蒸馏水→淀粉＋碘液→蓝紫色复合物（淀粉未被水解）； 淀粉＋淀粉酶→麦芽糖＋碘液→无蓝紫色复合物（淀粉已被水解）。

（4）根据温度变化来判断酶的活性和结构的变化温度：低温（0 ℃）→升温→最适温度（37 ℃）→再升温→高温（大于70 ℃）| | | | | 活性：活性低―→活性增高→活性最高―→活性降低→无活性 | | | | | 结构：未变性―→未变性―→未变性―→渐变性―→已变性 （5）根据酸碱度变化来判断酶的活性和结构的变化 酸碱度：过酸←酸性增强←最适酸碱度→碱性增强→过碱 | | | | | 活性：无活性←活性降低←活性最高→活性降低→无活性 | | | | | 结构：变性← 渐变性 ← 未变性 ―→ 渐变性―→变性 【例1】 甲、乙、丙三图依次表示酶浓度一定时，反应速率和反应物浓度、温度、pH的关系。

酶促反应实验报告一、引言酶是一类具有生物催化活性的蛋白质，能够加速化学反应速率而不参与其中。

酶促反应是指在酶的存在下，底物被转化为产物的过程。

本实验旨在通过观察和研究酶对反应速率的影响，探究酶在生物体内的重要作用。

二、材料与方法1. 材料：- 氢氧化氢溶液- 过氧化氢酶溶液- 磷酸盐缓冲液- 硫酸铵铁溶液- 甲酚溶液- 试管、移液器等实验器材2. 方法：- 首先，将一定浓度的过氧化氢溶液倒入试管中。

- 接着，加入适量的过氧化氢酶溶液并充分混合。

- 在反应开始后，记录下气泡产生的数量和大小，并计时。

- 重复上述实验步骤，但每次加入的过氧化氢酶溶液浓度逐渐减小。

- 最后，根据实验结果绘制出酶浓度与反应速率的关系曲线。

三、结果与讨论根据实验数据统计，我们得到了酶浓度与反应速率的关系曲线。

实验结果显示，随着酶浓度的增加，反应速率逐渐增大。

当酶浓度较低时，反应速率较慢；而当酶浓度较高时，反应速率明显加快。

这说明酶的浓度对反应速率有着直接的影响。

酶促反应的速率受多种因素的影响，其中最重要的因素是酶的浓度。

酶浓度的增加会导致反应底物与酶分子之间的碰撞频率增加，从而加速了反应速率。

然而，当酶浓度达到一定程度后，反应速率不再随酶浓度的增加而继续增加，这是因为反应底物的浓度成为限制因素。

此时，即使酶浓度再高，反应速率也不会继续增加。

除了酶浓度外，温度也是影响酶促反应速率的重要因素。

在一定温度范围内，随着温度的升高，酶活性增强，反应速率也随之增加。

然而，当温度超过酶的适宜工作温度范围时，酶的构象发生改变，导致酶的活性丧失，从而使反应速率下降。

pH值也会对酶的活性产生影响。

不同酶对于适宜的pH值有不同的要求，过高或过低的pH值都会导致酶的变性或失活，从而影响酶的催化活性和反应速率。

酶促反应的速率受到多种因素的影响，其中最重要的因素是酶的浓度。

酶浓度的增加可以显著提高反应速率，但当酶浓度达到一定程度后，反应速率不再继续增加，反应底物的浓度成为限制因素。

底物对酶促反应的影响主要体现在以下几个方面：
1.底物浓度：在其他因素不变的情况下，底物浓度的变化与酶促反应速度之间呈
矩形双曲线关系。

在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度的增加而加快；当底物浓度较高时，反应速度不再呈正比例加快；当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应速度也几乎不再改变。

2.酶浓度：在其他因素不变的情况下，酶促反应的速度与酶浓度成正比。

3.温度：温度对酶促反应的影响表现为最适温度和耐热性。

在最适温度下，酶促
反应具有最高的反应速度。

超过最适温度后，酶促反应速度会降低。

4.pH值：每一种酶只能在一定限度的pH范围内才表现活性，超过这个范围酶就
会失去活性。

综上所述，底物浓度是影响酶促反应的重要因素之一，其他因素如酶浓度、温度和pH 值也会对酶促反应产生影响。

在实际应用中，需要综合考虑各种因素，选择合适的条件以实现最佳的酶促反应效果。

竭诚为您提供优质文档/双击可除影响酶活性的因素实验报告篇一：实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。

2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。

酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

采用benedict试剂检测反应产物。

benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。

na2co3+2h2o2naoh+h2co3cuso4+2+na2so4还原糖(—choor—c=o)+2cu(oh)2cu2o(砖红色或黄色)+2h2与benedict试剂无呈色反应。

实验酶促反应的影响因素此实验可以根据酶的特性，设计影响酶促反应的各种因素，并进行实验检验。

（一）酶的激活剂和抑制剂一、实验目的1．了解酶促反应的激活与抑制。

2．学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。

二、实验原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。

例如，氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为其抑制剂。

通常少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性。

但是，值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。

例如氯化钠达到1/3饱和度时就可抑制唾液淀粉酶的活性。

三、器材1．试管及试管架 2．烧杯、椎形瓶和量筒（100mL）3．玻璃漏斗 4．吸管 5．滤纸 6．恒温水浴锅四、试剂1． 1% 淀粉溶液2．稀释100~200倍的新鲜唾液3． 1%氯化钠溶液4．0.1 %硫酸铜溶液5．碘化钾-碘溶液：将碘化钾20g 和碘10g 溶于100 mL水中，使用前稀释10倍。

五、操作方法取3支试管，向第一支试管中加入1%氯化钠溶液1 mL，向第二支试管中加入 0.1%硫酸铜溶液1 mL，向第3支试管中加入蒸馏水1mL作对照。

再向每支试管各加入 0.1%淀粉溶液3 mL和稀释的唾液1 mL。

摇匀各管，充分混合，一起放入37℃恒温水浴中保温10~15分钟后取出。

冷却后，各滴入2-3滴碘化钾-碘溶液。

混匀。

观察比较3支试管颜色的深浅，并解释之。

如果激活剂或抑制剂的作用不明显，主要可能原因是唾液淀粉酶的活性不够高，可以适当延长反映时间或者降低唾液稀释的倍数。

思考题1．激活剂可以分为哪几类？本实验中氯化钠属于其中的哪一类？2．抑制剂和变性剂有什么不同？试举例说明。

3．酶反应的抑制作用有哪些类型？根据什么划分的？它们都有什么特点？（二）温度对酶活性的影响一、实验目的通过检验不同温度下唾液淀粉酶的活性，了解温度对酶活性的影响。

影响酶促反应的因素——温度,ph,激活剂及抑制剂,生化实验报告(共8篇) 影响酶促反应速度的因素生化实验实验二影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。

淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。

在不同温度，不同PH值下，唾液淀粉酶活性不同，催化淀粉水解程度不一，生成的产物也就不同。

此外，激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性，影响淀粉的水解。

因此可根据在不同反应条件下，溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度，从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

淀粉I2 【操作】1. 温度对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：2. PH对酶促反应速度的影响取3支试管，编号，按下表操作：3．激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响取4支试管，编号，按下表操作：【结果及分析】观察各管颜色变化，说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。

【实验注意事项】篇二：生化实验思考题参考答案生化实验讲义思考题参考答案实验一淀粉的提取和水解1、实验材料的选择依据是什么？答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。

从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。

2、材料的破碎方法有哪些？答：(1) 机械的方法：包括研磨法、组织捣碎法；(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等；(3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。

实验二总糖与还原糖的测定1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。

间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。

实验二抑制剂对酶促反应速度的影响Effects of Inhibitors on the Velocity of Enzymatic
Reactions
一、实验原理
凡能降低酶活性甚至使酶丧失活性的物质，称为酶的抑制剂。

酶的特异性抑制剂可分为可逆性和不可逆性两类。

可逆性抑制剂又可分为竞争性和非竞争性两类。

竞争性抑制剂的作用特点是该酶的Km值增大，但最大的反应速率不变，而非竞争性抑制剂的作用特点是不影响底物与酶结合，故其Km值不变，而能降低其最大反应速度。

本实验中观察无机磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用，用磷酸苯二钠法测酶活性，使各管底物浓度不同，其他条件相同，除各管都加有同样量Na2HPO4外，实验操作完全同前一实验。

计算结果，画出曲线，判定Na2HPO4对碱性磷酸酶的影响。

二、实验操作
摇匀，37℃保温5min
充分摇匀，37℃准确保温15min
充分摇匀，室温放置10min
在510nm，以B管调零时读取各管光密度值。

计算并作图要领同实验一，求出Km值，判定结果，Na2HPO4属于哪种抑制剂。

三、思考题
联系实验结果，讨论抑制剂对酶活性的影响。

四、英语关键词
最大反应速度：Maximum velocity
米—曼式方程：Michaelis—Menten Equation
特性常数：Characteristic constant
绘图：Plot
直线：Straight Line
截距：Intercept
斜率：Slope
磷酸苯二钠：Disodium Phenylphosphate
4-氨基安替比林：4-Aminoantipyrine。

一、实验目的1. 了解酶促反应速率的基本原理和影响因素。

2. 掌握测定酶促反应速率的方法。

3. 通过实验，验证酶促反应速率与底物浓度、酶浓度、温度等因素的关系。

二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、可调节等特性。

酶促反应速率是指在一定条件下，酶催化底物转化为产物的速度。

酶促反应速率受多种因素影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋白酶、底物溶液、缓冲溶液、pH计、温度计、计时器、分光光度计等。

2. 实验仪器：恒温水浴锅、移液器、比色皿、试管等。

四、实验方法1. 酶促反应速率测定原理：在酶促反应中，底物浓度与产物浓度之间存在一定的比例关系。

通过测定在一定时间内产物浓度的变化，可以计算出酶促反应速率。

2. 实验步骤：（1）准备实验所需试剂和仪器。

（2）设置一系列底物浓度梯度，将底物溶液分别加入试管中。

（3）在恒温水浴锅中将酶溶液和缓冲溶液预热至设定温度。

（4）向每个试管中加入适量预热后的酶溶液，立即启动计时器。

（5）每隔一定时间，用分光光度计测定每个试管的吸光度值。

（6）根据吸光度值计算产物浓度，并绘制产物浓度随时间的变化曲线。

（7）根据曲线计算酶促反应速率。

五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）底物浓度对酶促反应速率的影响：随着底物浓度的增加，酶促反应速率逐渐加快，但当底物浓度达到一定值后，反应速率不再增加。

（2）酶浓度对酶促反应速率的影响：随着酶浓度的增加，酶促反应速率逐渐加快，且酶促反应速率与酶浓度呈正比关系。

（3）温度对酶促反应速率的影响：在一定温度范围内，酶促反应速率随温度升高而加快，但超过最适温度后，反应速率反而下降。

2. 实验分析：（1）底物浓度对酶促反应速率的影响：底物浓度增加，酶与底物的碰撞频率增加，从而加快反应速率。

但当底物浓度过高时，酶的活性位点被底物饱和，反应速率不再增加。

（2）酶浓度对酶促反应速率的影响：酶浓度增加，酶的活性位点数量增加，从而加快反应速率。