dna粗提取高考知识点

实验 DNA的粗提取与鉴定

目的要求

1.了解实验原理。

2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。

3．通过本实验培养实验操作能力和观察能力。

实验原理

1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

注意事项

1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。

2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。

实验用具

鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100mL，1个， 50mL，

500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。

课时安排 一课时

课前准备

制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180mL），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。（也可以用离心机离心2 min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。

板书（提前写好）

DNA的粗提取与鉴定 实验原理：

1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

班级 学号

1 盐城中学高二生物2014-2015学年度教学案

【课 题】DNA的粗提取与鉴定

【目 标】1.尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取2.了解DNA的物理化学性质

3.理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理

【知识梳理】

一、实验原理

1、粗提取原理：在NaCl溶液浓度 0.14M时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低；在0.14M时，DNA溶解度 ；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又 。利用上述原理，可以将DNA溶于高浓度的NaCl溶液中，使其与其他物质分开。

2、纯化的原理：DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精 。

3、二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。

（1）方法：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成 。

（2）原理：DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛，它再和二苯胺作用而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。

二、实验设计

1、实验材料的选取：凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是选用 的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：

鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌

【思考】哺乳动物的红细胞的特点？

2、破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用 搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用 溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的

第 - 1 - 页 共 4 页 §5.1《DNA的粗提取与鉴定》导学案

班级：高二（ ）班 姓名：

【学习目标】

1.说出DNA的物理和化学性质。

2.概述DNA粗提取和鉴定的原理。

3.尝试对动物或植物组织的DNA进行粗提取并对其进行鉴定。

【自主学习】

1.提取DNA的方法和原理:

(1)提取生物大分子的基本思路:选用一定的____________方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

(2)提取DNA的方法:利用DNA与____、_______和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。

2.DNA的溶解性:

(1)DNA在NaCl溶液中的溶解度:

DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,其中在

___________NaCl溶液中溶解度最低。

(2)在酒精溶液中的溶解性:____不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些_______溶于酒精溶液。

3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:

(1)对酶的耐受性:蛋白酶能水解_______,但对____没有影响。

(2)对温度的耐受性:大多数蛋白质不能忍受_________的高温,而DNA在_____以上才会变性。

(3)对洗涤剂的耐受性:洗涤剂能够瓦解_______,但对____没有影响。

4.DNA的鉴定:在_______的条件下,DNA与_______反应呈现蓝色。

二、实验设计

1.实验材料的选取:选用DNA含量_________的生物组织。

2.破碎细胞,获取含DNA的滤液:

(1)动物细胞的破碎。

①选材及方法:选用动物细胞作为实验材料时,由于其无_______,因此可直接采用吸水涨破的方法。

②过程:以鸡血为例。在鸡血细胞液中加入一定量的_______,同时用_______搅拌,细胞会吸水涨破,然后用纱布过滤,过滤后收集滤液即可。

(2)植物细胞的破碎。

①方法:需要先用_______溶解细胞膜。

DNA的粗提取与鉴定

（2012江苏）18. 下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是（ ）

A. 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度

B. 将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝

C. 常温下菜花匀浆中有些酶类会影响 DNA 的提取

D. 用玻棒缓慢搅拌滤液会导致 DNA 获得量减少

【答案】C

【解析】洗涤剂能够瓦解细胞膜，但不能增加DNA的溶解度，A错；将 DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝，不需要冷却，B错；常温下菜花匀浆中有些酶类可破坏DNA，而影响DNA的提取，C正确；用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量，而在粗提取时，缓慢撑拌有利于DNA附着，D错

【试题点评】本题主要是对实验内容的考查，主要是涉及“DNA 粗提取与鉴定实验”这一实验中的原理、方法和操作步骤等内容。属于实验考查中比较基础的内容。

（2011江苏）19．在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是

A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物

B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质

C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色

D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同

【答案】B

（2010江苏）32．(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下：

材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0 g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于—20℃条件下保存24 h。

DNA粗提取：

第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤．

取滤液备用。

第二步：先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液，再加人20 mL体积分数为95％的冷酒精

溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。