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神经生长因子对培养的大鼠背根神经节神经元P物质释放的调节作用(英文)杨向东;刘真;刘花香;王丽红;马春红;李振中【期刊名称】《神经科学通报：英文版》【年(卷),期】2007(23)4【摘要】目的观察神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对原代培养的背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元中P物质(substance P, SP)的基础释放量和辣椒素诱发释放量的调节效应。
方法将15 天胚龄的Wistar大鼠DRG神经元培养于含有不同浓度NGF的DMEM/F12培养液中,不含NGF的培养液培养的神经元作为对照。
72小时后,用RT-PCR检测神经元中SP mRNA和辣椒素受体(vanilloid receptor 1, VR1)mRNA的表达,用放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)法检测SP的基础释放量和辣椒素(100 nmol/L)刺激10 min后的诱发释放量。
结果SPmRNA和VR1 mRNA在NGF孵育的标本中表达增加,并与孵育液中NGF的浓度呈剂量依赖关系。
SP的基础释放量和辣椒素诱发释放量在NGF孵育的标本中均增加,而且诱发释放量与NGF的浓度呈剂量依赖关系。
结论NGF使DRG神经元SP的基础释放量和诱发释放量增加,表明NGF能增加初级传入神经元感受伤害刺激的敏感性,该效应可能与SP和VR1的mRNA表达增加有关。
【总页数】6页(P215-220)【关键词】神经生长因子;背根神经节;辣椒素;辣椒素受体;P物质【作者】杨向东;刘真;刘花香;王丽红;马春红;李振中【作者单位】山东大学齐鲁医院肾内科;山东大学医学院解剖学教研室;山东大学齐鲁医院风湿科;山东大学医学院免疫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R322.85;Q42【相关文献】1.人神经生长因子β基因转染对糖尿病神经病理性痛大鼠背根神经节P物质表达的影响 [J], 王群;冉然;张东云;钟和英;余开峰;王清秀2.胶质细胞源性神经营养因子促进培养的背根神经节神经元中P物质的释放 [J], 杨涛;刘真;王丽红;邢子英;王怀经;李振中3.星形胶质细胞和神经生长因子对新生大鼠脑内P物质受体阳性神经元存活与突起生长的影响──体外培养研究 [J], 徐俊卿;朱敏;陈良为4.人类免疫缺陷病毒蛋白HIV gp120对培养的大鼠背根神经节神经元的神经毒性作用(英文) [J], 刘花香;李振中;邢毅;黄飞;杜芳;刘真;陈淑妍;王丽红;王怀经因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
神经生长因子对大鼠脑损伤神经细胞凋亡的影响胡会芹;苗成;秦得营【期刊名称】《医药论坛杂志》【年(卷),期】2008(29)2【摘要】目的探讨神经生长因子(NGF)对LPS致大鼠脑损伤神经细胞凋亡的影响。
方法采用颈内动脉注射LPS造成大鼠脑损伤模型。
大鼠3O只随机分为5组:生理盐水组(A)、LPS致脑损伤组(B)、NGF处理组C,各组分别于6、12、24、48h处死取脑标本,TUNEL法观察大鼠脑损伤神经细胞凋亡的变化。
结果与生理盐水组相比,LPS组大鼠脑皮层神经细胞凋亡数目显著增多(P<0.05);与LPS组相比,NGF处理组大鼠脑皮层神经细胞凋亡数目显著减少(P<0.05)。
结论NGF能明显减轻LPS 致大鼠脑损伤神经细胞凋亡,具有明显脑保护作用。
【总页数】2页(P52-53)【关键词】脑损伤;LPS;神经生长因子;大脑皮质;细胞凋亡【作者】胡会芹;苗成;秦得营【作者单位】嵩县人民医院小儿科;郑州大学第一附属医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.神经生长因子对实验性脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响 [J], 吕昀;郭建新;李文战;李学玲2.神经生长因子对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响 [J], 练海东;李双;杨俊洁;闫瑞嘉;杨炜;张奕霞3.神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响 [J], 郝红;李宁4.大鼠创伤性脑损伤后神经元的凋亡及NOS、NGF-R、bcl-2、ChAT阳性神经元的变化/大鼠创伤性脑损伤的神经生长因子治疗/切割海马伞海马对神经干细胞的存活、迁移和分化的影响 [J],5.神经生长因子对缺氧/缺糖诱导的大鼠小脑皮质神经细胞凋亡的影响 [J], 李强;赵宝东;王冬阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠神经营养因子3(NT3)说明书大鼠神经营养因子3(NT3)说明书一、产品简介大鼠神经营养因子3(NT3)是一种神经元特异性生长因子，具有促进神经细胞生长和发育的作用。
本说明书旨在提供有关大鼠神经营养因子3的详细信息，包括产品性质、适用范围、使用方法、储存条件和注意事项等。
二、产品性质1. 化学性质：大鼠神经营养因子3是一种多肽生物活性物质，由176个氨基酸残基组成。
2. 分子量：约为19.7kDa。
3. 纯度：大鼠神经营养因子3经过高效液相层析纯化，纯度高于95%。
4. 活性：经过酶活性测定，大鼠神经营养因子3活性为XXX U/mg （以某一标准试剂为参照）。
三、适用范围大鼠神经营养因子3可广泛应用于神经科学研究、组织工程学以及药物研发等领域。
主要功能包括但不限于：1. 促进神经元的生长和发育。
2. 改善神经元连接和突触传递效率。
3. 减轻神经退行性疾病患者的症状，并促进其神经再生。
四、使用方法1. 取适量的大鼠神经营养因子3溶液，按照具体实验要求进行稀释。
2. 使用前应先充分溶解，建议使用生理盐水、细胞培养基等缓冲液稀释。
3. 尽量避免反复冻融，以保持产品的活性。
五、储存条件1. 大鼠神经营养因子3应存放在-20℃以下避光、干燥的环境中。
2. 如需长期保存，建议将产品分装后置于-80℃的超低温冰箱中。
3. 避免反复冻融，每次使用后应立即回冻。
六、注意事项1. 本产品仅供科学研究使用，不用于临床诊断和治疗。
2. 使用本产品前请详细阅读相关文献，并参考相关实验方法及操作说明。
3. 避免将产品接触人体皮肤、摄入或吸入，如不慎接触，请立即用大量清水冲洗，并求医咨询。
4. 本产品为实验室专用品，严禁用于其他非法目的。
以上为大鼠神经营养因子3(NT3)的说明书内容，如有其他问题，请咨询相关生产商或供应商。
谢谢使用！。
基金项目：内蒙古自治区自然科学基金（２０１５ＭＳ０８５８），内蒙古科技大学包头医学院扬帆计划（ＢＹＪＪ－ＹＦ２０１６８９）通讯作者：裴汉军【基础医学】３－ＭＡ对缺氧／复氧心肌细胞自噬及凋亡的影响张新会，罗文龙，裴汉军（内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院心内科，内蒙古包头０１４０１０）［摘 要］ 目的：使用３－甲基腺嘌呤（３－Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ，３－ＭＡ）抑制自噬后对缺氧／复氧心肌细胞凋亡及相关凋亡蛋白及自噬蛋白表达的影响。
方法：取４８只出生２４ｈ内的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ乳鼠，随机分成３组：正常对照组（Ｃ）、缺氧／复氧组（Ｈ／Ｒ）、３－ＭＡ联和缺氧／复氧组（３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ），每组１６只。
使用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原蛋白酶分离心肌细胞，培养７ｄ后，正常组继续培养，Ｈ／Ｒ组更换无血清、无糖ＤＭＥＭ培养基，在低氧培养箱（３７℃，１％Ｏ２，５％ＣＯ２，９４％Ｎ２）３ｈ，更换完全培养基放入正常培养箱（３７℃，２１％Ｏ２，５％ＣＯ２）６ｈ。
３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ组在缺氧／复氧前３ｈ加入３－ＭＡ使其终浓度为１０ｍＭ，其后处理同Ｈ／Ｒ组。
测定培养基中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量、流式细胞仪测定细胞凋亡，以及ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测凋亡相关蛋Ｂｃｌ－２、Ｃｙｔｃ、以及自噬相关蛋白Ｂｅｃｌｉｎ－１蛋白的表达。
结果：（１）Ｈ／Ｒ组、３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ组心肌细胞培养液ＬＤＨ含量及细胞凋亡率显著增加，较正常对照组心肌细胞具有明显差异（Ｐ＜０．０１），３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ组ＬＤＨ含量及细胞凋亡率较Ｈ／Ｒ组明显增加，具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。
（２）与正常对照组相比，Ｈ／Ｒ组、３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ组Ｂｃｌ－２、Ｂｅｃｌｉｎ－１蛋白降低（Ｐ＜０．０１），Ｃｙｔｃ蛋白表达升高（Ｐ＜０．０１），３－ＭＡ＋Ｈ／Ｒ组中Ｂｃｌ－２、Ｂｅｃｌｉｎ－１蛋白表达较Ｈ／Ｒ组表达明显减少（Ｐ＜０．００１），Ｃｙｔｃ蛋白表达显著升高，差异显著（Ｐ＜０．０１）。
神经营养因子3在促进脊髓损伤大鼠功能恢复中的价值研究目的分析神经营养因子3在促进脊髓损伤大鼠功能恢复中的价值。
方法将80只大鼠采用Allen打击法制作脊髓损伤模型，随机分为对照组（电刺激治疗组）40只和观察组（电刺激联合神经营养因子3治疗组）40只，分别于干预前和干预后7、14、28 d对两组大鼠Tarlov评分、皮质运动和体感诱发电位及脊髓组织巢蛋白（Nestine）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、5-羟色胺（5-HT）阳性细胞数进行统计并比较。
结果两组大鼠干预前Tarlov评分、皮质运动和体感诱发电位及脊髓组织Nestine、GFAP、5-HT阳性细胞数比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）；而干预后7、14、28 d观察组Tarlov评分0、1级比例分别为60%、50%和40%，皮质运动诱发电位峰峰值和潜伏期分别为（172.08±15.56）、（221.46±18.63）、（255.56±20.43）μV和（2.97±0.25）、（2.89±0.22）、（2.78±0.20）ms，皮质体感诱发电位峰峰值和潜伏期分别为（229.19±19.69）、（280.73±23.07）、（312.48±27.85）μV和（2.91±0.22）、（2.80±0.19）、（2.65±0.15）ms，均优于对照组，差异有统计学意义（P 0.05），具有可比性。
1.2 方法1.2.1 治疗干预方法Allen打击法制作脊髓损伤模型：采用水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定，以T10节段为中心做一个切口，以10 g的铁锤从高处自由跌落打击创口，高度大约为3.0 cm，然后依次缝合创口。
两组大鼠分别于干预前和干预后7、14、28 d分别取10只大鼠进行Tarlov评分、皮质运动和体感诱发电位及脊髓组织巢蛋白（Nestine）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、5-羟色胺（5-HT）阳性细胞数的统计及比较。
・实验研究・三磷酸腺苷与神经生长因子对缺氧复氧后大鼠皮质神经元细胞活性及凋亡的影响金玉安彩霞兰州大学第一医院儿科33邮编 730000【摘要】目的 探讨体外三磷酸腺苷(ATP )、神经生长因子(NGF )对缺氧复氧大鼠皮质神经元的保护作用。
方法 取体外培养8d 的W istar 大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、缺氧组、ATP 组和NGF 组。
用噻唑盐比色法(MTT )、乳酸脱氢酶(LDH )法测定细胞活性变化,流式细胞仪术、透射电镜检测细胞凋亡率和凋亡。
结果 与对照组比较,缺氧组神经元细胞活性明显降低,细胞凋亡率显著增加;ATP 和NGF 能明显改善缺氧对神经元细胞活性的影响,细胞凋亡率降低(P <0105);与NGF 组比较,ATP 组神经元细胞活性增高,细胞凋亡率降低(P <0105)。
结论 缺氧能够造成大鼠大脑皮质神经元的损伤并诱导其凋亡,ATP 及NGF 对缺氧2复氧后大脑皮质神经元有保护作用。
【关键词】 三磷酸腺苷;神经生长因子;缺氧2复氧;皮质神经元;细胞活性;凋亡Effects of ATP and NGF on ra t corti ca l neuron s v i a b ility and apoptosis i n duced by anox i a 2reoxy 2gena ti on i n v itro . J I N Yu,AN Cai 2X ia .D epart m ent of Pediatrics,The F irst Hospita l,L anzhou U niversity,L anzhou 730000,Ch ina 【Abstract 】O bjecti ve To investigate the effects of adenosine tri phas phate (ATP )and nerve gr owth fact or (NGF )on cell viability and apop t osis in cultured rat cortical neur ons after anoxia 2reoxy 2genati on in vitr o .M ethods Cortical neur ons cultured for 8dayswere random ly divided int o f our gr oup s:contr ol gr oup,anoxic gr oup (anoxia for 6hrs and reoxygenated f or 24hrs ),NGF gr oup (anoxic gr oup +40ng/m l NGF in culture fluid )and ATP gr oup (anoxic gr oup+1μmol/L ATP in culture fluid ).The neur ons viability were detected with the method of MTT and LDH.The apop t osis of neur ons wasexa m ined by fl ow cyt ometry and electr o 2m icr oscope .Results I n comparis on with contr ol gr oup,Anoxia inhibited the cell viability and increased the apop t osis rate and death of cortical neur ons .ATP and NGFreversed upper p r ogress .Compared with NGF,ATP i m p r oved the cell viability (P <0105),a meli orate the rati o of apop t osis (P <0105)greatly .Conclusi on s Anoxia da mages cortical neur ons and induces apop t osis Both ATP and NGF offer neur op r otective effects t o anoxia 2reoxygenati on cultured rat cortical neur ons .【Key words 】 adenosine tri phas phate (ATP );nerve gr owth fact or (NGF );anoxia 2reoxygenati on;cortical neur on;cell viability;apop t osis 新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ische m ic ence 2phl opathy,H I E )是儿科常见的难治性疾病。
其主要病理生理变化是神经组织缺血再灌注过程中能量代谢障碍,细胞的膜性结构损害等引发神经元坏死和凋亡。
本研究采用对缺氧敏感的大鼠原代皮层神经元进行体外细胞培养,观察ATP 和NGF 对缺氧神经元的保护作用,进一步探讨其对H I E的治疗作用。
材料和方法一、材料W istar大鼠、乳鼠(甘肃省医学科学院动物实验中心提供),DME M(Gibco)培养液,鼠抗特异性神经元稀醇化酶(NSE)(武汉博士德)。
三磷酸腺苷二钠(adenosine dis odium tri phophte,ATP)(天津药业焦作有限公司),神经生长因子(nerve gr o wth fact or, NGF)(兰州生物制品研究所周旭教授惠赠)二、方法1.神经元培养及免疫组化鉴定出生1d W istar大鼠,无菌分离大脑皮质制成细胞悬液,1×106/m l接种,37℃、95%湿度、5%CO2孵育箱培养。
第3d加入阿糖胞苷3mg/L,抑制非神经细胞过度增殖。
第8天对神经元细胞进行NSE 抗体免疫组化染色,随机计数500个细胞,计算NSE 阳性细胞百分数。
2.实验分组及神经元缺氧模型制作将培养第8d皮层神经元细胞作为实验细胞,随机分为正常对照组、缺氧组、ATP处理组、NGF处理组。
除对照组外,其余各组均予缺氧6h复氧24h 处理(在恒温(37℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(95%N2、5%CO2)培养6h后立即转至原条件孵育箱内培养24h)。
ATP组、NGF组在缺氧前分别在培养液中加入终浓度1μmol/L ATP或40ng/m l N GF。
3.细胞活性和凋亡检测MTT比色法测定吸光度值,波长设定为570nm,吸光度值越高反映细胞活性越高;Beck Man 全自动生化仪测定培养液中LDH,LDH漏出量越高反映细胞损伤程度越重;流式细胞仪检测不同时段神经元凋亡率。
H2800型透射电镜下检测凋亡细胞。
三、统计学分析各组实验数据用( x±s)表示,检验用重复测量的方差分析,对各组数据方差不齐的采用非参数秩和检验,检验水准а=0105,使用SPSS1010统计软件进行处理。
结果一、细胞形态学观察1.光学显微镜下观察缺氧后神经元细胞开始出现肿胀、胞体增大。
随着缺氧时间的延长,神经元胞体肿胀明显,折光性下降,突起收缩。
ATP和NGF处理组神经元形态和缺氧前无明显变化。
2.免疫组化细胞鉴定NSE染色红色阳性细胞即为神经元,细胞着色率>90%。
3.电镜神经元超微结构核大而圆,核仁清晰,边界明显;核质均匀、散在,核膜光滑、过度自然。
缺氧组细胞核不规则,透亮度增加,核膜皱缩,核仁裂解,染色质浓集成块,贴边。
ATP、NGF组神经元趋于正常。
二、ATP、NGF对缺氧神经元细胞活性、LDH渗漏量及细胞凋亡的影响(见表1)表1ATP、NGF对缺氧神经元细胞活力、LDH渗透量及细胞凋亡的影响检测指标组别 0小时缺氧6小时 复氧24小时 细胞活力(吸光度值)正常对照组0179±011401780±01090177±0119缺氧组0177±011601402±0111330132±011133 ATP组0179±011301720±0114△△0161±0112△△NGF组0177±012001580±0112△#0148±0113△△#LDH漏出量(LDH法,I U/L)正常对照组29133±710531174±619729133±7105缺氧组30112±510986150±1519533129146±20114333 ATP组31190±618052114±12120△△79110±1417△△NGF组32125±912971111±1714△##103172±17105△##细胞凋亡率(流式细胞仪)正常对照组4110±21093199±11473162±1164缺氧组4111±115919162±61483329104±814533 ATP组3159±111310182±4140△△19144±6178△△NGF组3193±114713114±3156△△#20138±5170△注:与正常对照组比较,333P<01001,33P<0101;与缺氧组比较,△△P<0101,△P<0105;与ATP组比较,##P<0101,#P<0105讨论H I E不仅可造成死亡,而且可造成永久性神经功能障碍。
积极探索、开发包括药物治疗在内的一套完整、合理、有效的治疗方案是当前研究的热点之一。
本实验旨在探讨ATP和NGF对缺氧神经元的保护作用。
一、缺氧-复氧培养对大鼠皮质神经元的影响本研究发现,缺氧作用后神经元病理改变主要为神经元肿胀、变形、胞体增大,细胞生存能力下降、LDH漏出显著增加,神经细胞凋亡和死亡,说明缺氧可以引起神经元明显损害,且这种损害过程进行性加重,在复氧后这种损害仍继续进展。
复氧24h 后,神经元损伤程度较急性缺氧神经元更加严重,存活率明显下降。
二、ATP对原代培养神经元缺氧损害的保护作用ATP为一种价格低廉、毒副作用少、安全性高的传统能量物质,对神经系统的作用已经引起了国内外学者们的重视。
它与神经细胞、轴突的运输有关,是神经细胞功能所必需的。
