高效液相色谱仪过滤操纵要点

高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
 高效液相色谱仪操作步骤（原文摘录自网络）：
 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

 7)．设计走样方法。

点击file，选取se-lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；
b.基线归零；
c.进样阀的loading-inject转换；
d.走样时间，随不同的样品而不同。

 8)．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均。

高效液相色谱仪操作一、简介高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，主要用于分离、定量和检测样品中的化合物。

它具有分离效率高、分离时间短、操作方便等优点，广泛应用于制药、化妆品、食品、环境监测等领域。

本文将为您介绍高效液相色谱仪的操作步骤和注意事项。

二、操作步骤1.准备工作在使用高效液相色谱仪之前，需要确保仪器和所需材料的准备工作已完成。

包括以下几个方面： - 选用合适的色谱柱：根据样品的特性和分离要求，选择相应的色谱柱类型和规格。

- 准备好流动相：根据试验要求和分析方法，配置好正确的流动相，确保其符合实验要求。

- 检查仪器状态：检查仪器的电源是否正常，色谱柱是否安装正确，流速控制装置是否工作正常等。

2.样品准备•将待分析样品溶解或稀释到合适的浓度。

•过滤样品以去除杂质，确保样品的纯度和稳定性。

•如果需要，可以对样品进行衍生化处理，以提高分离效果。

3.仪器设置•打开操作软件，确保仪器和计算机正常连接。

•根据分析要求设置进样体积、流速、检测器参数等。

•在进样器中加入样品，设置为自动进样或手动进样。

4.开始分离•启动色谱泵，使流动相从色谱柱中流动，建立起足够的流速。

•启动检测器，选择适当的检测模式和波长。

根据样品特性选择合适的检测器类型，如紫外/可见光检测器、荧光检测器等。

•开始记录数据，在色谱软件上观察色谱图的变化，根据需要进行峰的识别和峰面积的积分计算。

5.数据分析•根据分析要求，对色谱图进行峰的分析和峰面积的计算。

•根据标准曲线或对照品，进行定量分析。

三、注意事项1.安全操作：使用高效液相色谱仪时，应注意仪器操作安全，避免发生意外事故。

如注意电源和高压电缆的连接是否牢固，避免漏电和触电危险。

2.样品准备：样品准备过程中，应避免受到外界污染和杂质的干扰，保证样品的纯度和稳定性。

3.色谱柱的选择：根据样品的性质和分离要求，选用合适的色谱柱。

高效液相色谱操作知识（一）高压恒流泵的维护注意事项泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。

应采取下列措施以延长使用寿命：绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。

每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。

长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。

要用HPLC级试剂输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。

要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。

压力下限应设置在0.5~1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨有柱后清洗功能的高压恒流泵还要注意保持清洗液，否则将失去柱后清洗效果。

(二)流动相使用的注意事项必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45?m薄膜过滤。

过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。

几种脱气方法比较：1、氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。

2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。

3、抽真空脱气法：易抽走有机相4、超声脱气法：一种较为常见的脱气法。

流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10~15 分钟，此法效果并不太好但操作简单。

如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相：浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。

此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用5：95的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。

此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。

为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。

本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。

一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。

其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。

最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。

2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。

开机前，需要检查电源和其他外部连接。

按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。

关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。

3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。

样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。

进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。

4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。

仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。

5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。

根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。

在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。

6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。

首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。

然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。

定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。

二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。

溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。

超声脱气30分钟以上。

2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。

7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 设计走样方法。

9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。

高效液相色谱仪操作技巧及操作规程高效液相色谱仪操作技巧任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住，最后的结果是将柱子堵塞，表现出的特征是系统压力加添并使色谱峰变形。

因此，要实行各种防备措施，包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计，努力防止或削减颗粒物进进高效液相色谱仪中，从而延长仪器和色谱柱的使用寿命，并进步数据的牢靠性。

在高效液相色谱仪中，颗粒物的紧要来源有三个途径：活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。

1、被测样品使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品，总会或多或少的丢失。

丢失来自这样几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。

2、活动相无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在试验室使用超纯水净化系统制备的水，最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。

任何一种缓冲液中加进了固体物，必定活动相过滤将。

少量杂质颗粒存在于活动相中必定成为残渣。

解决方法：2.1.活动相制备仅接受HPLC级液体时不需要过滤，反之全部活动相构成在使用前必需过滤。

2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口接受下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很紧要的。

这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质，所以它不能取代活动相过滤步骤，但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的牢靠性。

2.3.推举在HPLC系统中接受一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器，接在自动进样器和柱子之间，即使已使用了保护柱。

这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板，而且如接受一个玻璃砂芯滤板，既便宜，更换又便利（几分钟就可更换）。

若接受在线过滤，高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值，当压力上升确定值，例如25%或加添500psi，应当更换玻璃砂芯滤板了，更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。

3、仪器系统部件的磨损物最后，在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个紧要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。

安捷伦高效液相色谱仪操纵说明之答禄夫天创作一、校枪及样品处理1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步调：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。

将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。

（如枪使用过久或气密性欠好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。

）注意慢吸慢放，不要挂珠。

2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。

然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。

混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。

准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。

按顺序放到自动进样盘中。

二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。

打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。

化学工作站自动与1200LC通讯。

流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操纵至所需管路均无气泡。

在“控制”选项中选“关闭”，关闭泵，关闭冲洗阀。

单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

每次四元泵开始前，要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟，使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出，以免隔夜的流动相损伤色谱柱。

每次进样检测前，要用流动相冲洗色谱柱30分钟，达到柱温前20min流速设为0.2ml/min，达柱温后再改为0.6ml/min。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。

为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。

b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。

c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。

2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。

b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。

3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。

b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。

4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。

b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。

5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。

b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。

6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。

b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。

7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。

b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。

8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。

b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。

总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。

遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。

本文由北京SEO整理发布高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。

2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)．设计走样方法。

点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10)．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者：dujinx正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种对样品进行分离、检测的仪器。

对于化学、生物等领域的研究者来说，熟练掌握HPLC 的操作规程非常重要。

本文将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

设备准备在操作HPLC仪器之前，需要先对设备进行准备。

首先，需要检查仪器周围的环境是否清洁整洁。

注意检查废液罐、洗涤液罐的液位，以免在后续的使用中发生意外。

其次，需要准备好各种试剂和标准品，确保它们的适用性和相应的浓度范围。

需要使用高纯度的溶剂，在使用之前应先过滤，去除其中的杂质，保证后续操作的准确性和稳定性。

最后，对仪器进行预热操作。

通常情况下，需要对色谱柱和检测器进行预热，保证它们的温度稳定。

样品的制备样品的制备是至关重要的一步。

通常情况下，为了提高样品的净化程度和浓度，需要使用不同的制备方法，如提取、稀释、过滤等。

在进行样品制备时，需要注意以下几点：1.确认样品是否熔点低于所用的溶剂的沸点；2.确认样品是否需要进行提取或加强洗涤效果；3.对于样品的稀释和过滤操作，需要注意其可能带来的影响。

色谱柱的选择选择合适的色谱柱对于操作效果的影响很大，需要充分考虑实验的目的和测试要求进行选择。

选择色谱柱时，应注意以下几点：1.选择合适的材料和孔径；2.确认所选柱是否能够满足测量要求；3.确认所选柱的分离效应是否满足实验要求。

操作流程1.开机操作：根据仪器所得操作指南进行开机操作。

2.准备工作：将所需样品移至自动进样器，调整电量，并确认流速和溶剂比例是否正确。

3.洗涤操作：洗涤色谱柱，将废液排出废液罐中。

4.样品进样：按照操作指南将样品注入样品进样器中。

5.柱温控制：调节色谱柱的温度以控制柱的温度稳定。

6.流速控制：根据样品要求调节流速。

7.数据收集操作：实时收集并记录数据，如果需要，可以修改柱温、流速等操作参数。

8.数据处理：对数据进行处理和分析。