二氯乙酸钠对氧糖剥夺损伤的BV2细胞的保护作用及其机制研究

大麻素2型受体拮抗剂对激活态BV2小胶质细胞的免疫调节作用李琳;楼之茵;程洁;赵忠新【摘要】目的观察大麻素2型受体(cannabinoid 2 receptor,CB2R)拮抗剂对BV2小胶质细胞免疫调节功能的影响.方法使用适量浓度的IFN-γ刺激激活BV2小胶质细胞,建立模拟EAE炎性环境的细胞模型,比较静息态BV2细胞组、激活态BV2细胞组和大麻素2型受体拮抗剂SR144528A(SR2)干预组CB2R mRNA和蛋白的表达情况,用ELISA方法检测细胞因子和趋化因子的浓度,MTT法检测细胞增殖率.结果 IFN-γ激活的BV2小胶质细胞CB2RmRNA和蛋白的表达均高于静息组(P ＜0.05);使用SR2干预激活的BV2小胶质细胞,可降低其CB2R mRNA和蛋白的表达(P＜0.05);SR2可显著上调激活态BV2细胞致炎因子IFN-y、IL-17、IL-6和TNF-α的水平,促进BV2小胶质细胞增殖和NO的释放(P＜0.05),同时显著下调IL-4和MCP-1的浓度,对IL-1β、IL-10、CX3CL1无调节作用.结论 CB2R参与了小胶质细胞介导的炎症反应,CB2R在调节Th1/Th17/Th2细胞因子网络平衡中发挥了一定的作用.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】6页(P14-18,23)【关键词】大麻素2型受体;小胶质细胞;细胞因子;趋化因子【作者】李琳;楼之茵;程洁;赵忠新【作者单位】上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;第二军医大学附属长征医院神经内科,上海200003【正文语种】中文【中图分类】R744.5小胶质细胞是中枢神经系统内最主要的炎症效应细胞，在神经免疫性疾病的发生发展中起重要作用。

没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的 BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制陈洁;陈科;孟宪丽;王小博;陈小睿【期刊名称】《成都中医药大学学报》【年(卷),期】2024(47)2【摘要】目的:建立BV2细胞缺氧损伤模型,研究没食子酸通过NF-κB通路对缺氧诱导的BV2小胶质细胞损伤的保护作用机制。

方法:取BV2小胶质细胞分为空白组、模型组、低剂量、中剂量及高剂量组,通过三气培养箱建立BV2小胶质细胞缺氧损伤模型,低剂量、中剂量及高剂量组分别给予1.7 g/mL、3.4 g/mL、8.5g/mL没食子酸进行干预。

采用CCK-8法检测没食子酸对缺氧的BV2细胞的保护作用,使用试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量,ELISA检测上清中炎症因子表达水平(TNF-α、IL-1β、IL-6),Western blot检测BV2细胞内p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和pNF-κBp65/NF-κB p65蛋白的表达水平以及NF-κB p65的核位移。

结果:与空白对照组相比,缺氧可造成BV2细胞培养基上清液LDH的活力增加和炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的释放,细胞中SOD活力降低,MDA和ROS的水平升高,NF-κB通路(p-IKK/IKK、p-IκB/IκB和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白的表达水平)的激活以及NF-κB p65的核位移。

没食子酸能通过降低LDH的活力,抑制氧化应激(提高SOD 的活力,下调MDA和ROS水平)、抑制炎症因子的释放、抑制NF-κB通路相关蛋白的激活以及NF-κB p65的核位移改善缺氧引起的BV2细胞损伤。

结论:没食子酸对缺氧诱导的BV2细胞炎症具有保护作用。

【总页数】7页(P11-17)【作者】陈洁;陈科;孟宪丽;王小博;陈小睿【作者单位】成都中医药大学药学院;成都中医药大学创新研究院/交叉学科研究院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.枸杞多糖对LPS诱导BV2小胶质细胞的抗炎活性及NF-κB信号通路的调控作用2.乙酰水杨酸姜黄素酯通过TLR4/NF-κB通路拮抗LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症损伤3.丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应4.丁酸钠通过TLR4/NF-κB信号通路调控脂多糖诱导的BV2小胶质细胞表型极化5.2-Hydroxycircumdatin C通过抑制TLR4/NF-κB/MAPK和JAK2/STAT3通路对脂多糖诱导BV2小胶质细胞发挥抗炎作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

网络出版时间：２０２３－１２－０１１６：００：４６　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３１１３０．１３２２．０４０氧化苦参碱对氧糖剥夺／复糖复氧损伤星形胶质细胞ＡＭＰＫ／ｍＴＯＲ途径及自噬的影响崔明宇，卢金莹，于　露，王宇彤，边　疆，王　高，杨新霞，杨　菁（锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，辽宁锦州　１２１００１）收稿日期：２０２３－０６－１４，修回日期：２０２３－０８－２０基金项目：辽宁省教育厅面上项目（Ｎｏ２０２１ＬＪＫＺ０８２３）；锦州医科大学一流学科建设项目（Ｎｏ２０２２０３Ｌ２０７）作者简介：崔明宇（１９７１－），男，学士，高级实验师，研究方向：神经药理学，Ｅ ｍａｉｌ：１５４３８９７５７４＠ｑｑ．ｃｏｍ；杨　菁（１９６７－），男，博士，教授，研究方向：神经药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｙａｎｇｊｉｎｇ＠ｊｚｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０６０３９文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）１２－２３３１－０８中国图书分类号：Ｒ２８４ １；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３２９ ２４；Ｒ３９２；Ｒ８５２ １５摘要：目的　探讨ＡＭＰＫ／ｍＴＯＲ通路调节的自噬在氧化苦参碱（ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ，ＯＭＴ）抑制氧糖剥夺／复糖复氧（ｏｘｙｇｅｎ－ｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ＯＧＤ／Ｒ）对星形胶质细胞（ａｓｔｒｏｃｙｔｅ，ＡＳ）损伤中的作用。

方法　将分离纯化ＡＳ随机分为对照组（ＣＯＮ组）、模型组（ＯＧＤ／Ｒ组）和ＯＧＤ／Ｒ＋ＯＭＴ组（０ １、０ ２、０ ４ｍｍｏｌ·Ｌ－１）。

ＭＴＴ法检测细胞存活率；Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２和ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ法检测细胞凋亡；流式细胞仪检测细胞活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）含量；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ｐ ＡＭＰＫ、ＡＭＰＫ、ｐ ｍＴＯＲ、ｍＴＯＲ、Ｂｅ ｃｌｉｎ１、ＬＣ３Ｂ、ｐ６２和β ａｃｔｉｎ的表达。

氯乙酸盐----------开发中的新药美国弗罗里达大学医学院医学系严子梦博士综述二氯乙酸盐是一种处于研究阶段的候选新药，同时它亦是一些氯代有机物(如三氯乙烷、三氯乙酸)和药物(如氯霉素、水合氯醛)的代谢产物，以及自来水氯化处理的副产物之一。

近年来此药受到美国、加拿大、瑞士、奥地利、加纳、英国及日本等国的关注，并对其在多种疾病中的治疗意义和毒副作用进行了实验研究与临床评价。

目前已知此药主要对心血管及代谢性疾病，如心肌或脑缺血、糖尿病、先天性或代偿性乳酸酸中毒等具有治疗作用，而对其毒理的研究则主要从环保卫生的角度出发，评价其对人体健康的影响。

有关此药80年代以前的研究情况已由Stacpoole进行综述。

本文主要介绍90年代以来有关此药的研究进展。

1、理活性与临床应用在体内葡萄糖氧化产生乙酰辅酶A过程中，丙酮酸是连接乳酸和丙氨酸代谢的重要中间体。

丙酮酸脱氢酶复合物是葡萄糖和丙酮酸氧化过程中的限速酶，它催化丙酮酸氧化脱羧，产生乙酰辅酶A。

这一过程是葡萄糖氧化进入三羧酸循环以及调节乳酸和丙氨酸代谢的重要步骤，如图1所示。

丙酮酸脱氢酶的调节是通过底物(丙酮酸、ADP)激活、终产物(乙酰辅酶A、NADH)抑制和可逆磷酸化，即磷酸化抑制、去磷酸化激活。

镁和钙离子可激动丙酮酸脱氢酶磷酸酶，使丙酮酸脱氢酶处于去磷酸化(活性)状态。

丙酮酸脱氢酶激酶则被乙酰辅酶A、NADH和激酶激动蛋白激活，而被辅酶A、NAD、ADP、丙酮酸和二氯乙酸抑制[1-3]。

二氯乙酸是丙酮酸脱氢酶复合物的激动剂，它通过抑制丙酮酸脱氢酶激酶来激活丙酮酸脱氢酶复合物。

在正常生理情况下，乳酸、丙氨酸与丙酮酸之间处于平衡状态。

在组织缺氧情况下，如激烈运动造成的组织缺氧及高乳酸水平，二氯乙酸盐可通过增加氧摄取、激动丙酮酸脱氢酶复合物，促进乳酸氧化，补充能量供应，从而改善缺氧组织的能量代谢状况[4-5]；而对心肌或脑缺血，在葡萄糖氧化供能不足情况下，改善能量供应，即可缓解心肌或脑缺血的症状。

· 论著 ·乌帕替尼对氧糖剥夺/复氧后BV2细胞极化的影响宋志兵1,4，张　倩1,4，章越凡2，邱　彦3，李铁军1,4（1. 安徽中医药大学药学院，安徽合肥 230012；2. 海军军医大学药学院药理学教研室，上海 200433；3. 上海市浦东新区人民医院，上海 201200；4. 上海市浦东新区浦南医院药剂科，上海200125）［摘要］　目的　研究乌帕替尼对氧糖剥夺再复氧（OGD/R）后BV2小胶质细胞极化及炎症的影响，并探讨其作用机制。

方法　实验分对照组、OGD组和乌帕替尼组3组。

BV2细胞经OGD/R处理后，噻唑蓝试剂(MTT)检测细胞生存率，划痕实验观察细胞迁移能力，实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测BV2细胞M1型极化标志物（CD11b、CD32、iNOS）和M2型极化标志物（Arg-1、IL-10、CD206）的mRNA水平，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α含量，蛋白质印迹法(Western Blot)检测JAK1/STAT6通路相关蛋白表达水平。

结果　乌帕替尼能增加OGD/R后BV2细胞的生存率（P<0.05），能减少BV2细胞向M1型极化（P<0.05）。

乌帕替尼可明显降低OGD/R诱导的BV2细胞的迁移能力（P<0.05），减少OGD/R诱导BV2细胞分泌的炎症因子：IL-1β、IL-6、TNF-α（P<0.05）。

乌帕替尼提高共培养PC12细胞的生存率（P<0.05）。

乌帕替尼可显著抑制由OGD/R诱导激活BV2细胞p-JAK1和p-STAT6蛋白的表达水平（P<0.05）。

结论　乌帕替尼可减少OGD/R诱导BV2细胞向M1型极化和减少炎症反应，与JAK1/STAT6通路有关。

［关键词］　乌帕替尼；氧剥夺/复氧；极化，炎症，酪氨酸激酶/信号传导及转录激活因子［中图分类号］　R965 ［文献标志码］　A ［文章编号］　1006-0111（2021）02-0112-06［DOI］　10.12206/j.issn.1006-0111.202012006Effects of upadacitinib on BV2 cells after oxygen–glucose deprivation/recovery SONG Zhibing1,4，ZHANG Qian1,4，ZHANG Yuefan2，Qiu Yan3，LI Tiejun1,4（1. School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230012, China; 2. Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Naval Medical University, Shanghai 200433, China; 3. People′s Hospital of Pudong New Area, Shanghai 201200, China; 4. Department of Pharmacy, Punan Hospital of Pudong New Area, Shanghai 200125, China）［Abstract］　Objective　To investigate the effects of upadacitinib on the polarization and inflammation of BV2 microglia after oxygen glucose deprivation/recovery (OGD/R) and to explore its mechanism of action. Methods　The experiment was divided into 3 groups: control group, OGD group and upadacitinib treatment group. After BV2 cells were treated with OGD/R, MTT was used to detect cell survival rate. Wound scratch assay was used to detect the cell migration ability. qPCR was used to detect mRNA levels of M1-type polarization markers (CD11b, CD32, iNOS) and M2-type polarization markers (Arg-1, IL-10, CD206) of BV2 cells. ELISA was used to detect the levels of IL-1β, IL-6, and TNF-α in the culture medium. Western blot was used to detect the expression levels of JAK1/STAT6 pathway-related proteins. Results　Upadacitinib increased the survival of BV2 cells after OGD/R (P<0.05), reduced the polarization of BV2 cells to M1 type (P<0.05). Upadacitinib significantly decreased the migration ability of BV2 cells induced by OGD/R (P<0.05), reduced the inflammatory factors secreted by BV2 cells induced by OGD/R: IL-1β, IL-6, TNF-α (P<0.05). Upadacitinib increased the survival rate of co-cultured PC12 cells (P<0.05). Upadacitinib significantly inhibited the expression levels of p-JAK1 and p-STAT6 proteins in BV2 cells activated by OGD/R induction (P<0.05). Conclusion　Upadacitinib decreases polarization of BV2 induced by OGD/R to M1 type and reduces inflammation, which is related to JAK1/STAT6 pathway.［Key words］　upadacitinib；OGD/R；polarization, inflammation, JAK/STAT［基金项目］ 浦东新区卫生系统学科建设项目（新兴、交叉学科-精准临床药学，PWXx2020-03）；浦东新区卫生和计划生育委员会学科建设项目（重要薄弱学科-临床药学，PWZbr2017-16）；上海市健康医学院协同创新重大专项（SPCI-18-13-001）［作者简介］ 宋志兵，硕士研究生，Email：************************［通信作者］ 李铁军，博士，副教授，研究方向：心脑血管药理学，Email：**************小胶质细胞是参与防御脑缺血再灌注损伤的主要免疫细胞，在中枢神经系统修复和神经发生中发挥重要作用。

二氯乙酸钠对氧糖剥夺损伤的BV2细胞的保护作用及其机制研究赵辉;章越凡;李铁军【摘要】目的研究二氯乙酸钠(dichloroacetate,DCA)对氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤模型中小鼠小胶质细胞(BV2细胞)的保护作用,并探讨其作用机制.方法将BV2细胞分为3组:对照组、OGD组、DCA治疗组,通过OGD 4 h建立损伤模型.CCK-8和流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS和NO的表达,Western blot检测NF-κB通路相关蛋白表达水平.结果 CCK-8及流式细胞检测结果表明,DCA可显著降低OGD诱导的BV2细胞凋亡,并且减少OGD后细胞中活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的表达(P<0.05).Western blot结果显示,DCA可显著影响OGD损伤介导的BV2细胞JNK、I-κB和NF-κB蛋白表达水平(P<0.05).结论 DCA对OGD损伤的BV2细胞具有保护作用,其机制与抗凋亡、抗氧化和抗炎作用有关.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2019(037)002【总页数】5页(P146-150)【关键词】二氯乙酸钠;氧糖剥夺;ROS;NF-κB【作者】赵辉;章越凡;李铁军【作者单位】安徽中医药大学药学院 ,安徽合肥 230012;海军军医大学药学院药理学教研室,上海200433;安徽中医药大学药学院 ,安徽合肥 230012;上海市浦东新区浦南医院药剂科,上海 200125【正文语种】中文【中图分类】R966缺血性卒中是一种常见的神经系统性疾病，是导致死亡的主要原因[1]。

胶质细胞是脑内的天然免疫效应细胞，参与一系列神经退行性病变[2]。

活化的小胶质细胞释放促炎因子以及细胞毒性因子(如NO和ROS)，导致神经元损伤[3]。

研究表明，小胶质细胞激活诱发的炎症反应参与了脑卒中的损伤过程[4]。

二氯乙酸钠(DCA)是一种可口服吸收的小分子化合物，临床上可用于治疗线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)综合征、先天性乳酸性酸中毒和其他疾病的儿童[5]。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910265486.4(22)申请日 2019.04.03(71)申请人 上海市浦东新区浦南医院地址 200125 上海市浦东新区临沂路219号(72)发明人 李铁军　刘卫东　谢和辉　章越凡　李莉　赵辉　袁媛　冯晶晶　毛峻琴　李骏驰　(74)专利代理机构 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219代理人 许亦琳　余明伟(51)Int.Cl.A61K 31/19(2006.01)A61K 45/06(2006.01)A61P 25/28(2006.01)(54)发明名称二氯乙酸钠在制备治疗血管性痴呆药物中的用途(57)摘要本发明提供了二氯乙酸钠在制备治疗血管性痴呆药物中的用途。

本发明通过实验发现，二氯乙酸钠可通过改善血管性痴呆大鼠的血管新生进而改善其认知功能达到治疗血管性痴呆的作用。

二氯乙酸钠保护作用强，而且由于分子量小，具有显著的脑通透性优势。

因此，本发明提供的二氯乙酸钠具有在制备防治血管性痴呆药物中良好的应用前景。

权利要求书1页 说明书5页 附图3页CN 111773204 A 2020.10.16C N 111773204A1.二氯乙酸钠，或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防血管性痴呆药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物在改善血管性痴呆的认知功能药物中的用途。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物对血管性痴呆认知功能降低的预防或者治疗是通过以下方式中的至少一种实现：(1)改善海马CA1区的损伤；(2)促进脑血管新生。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的盐是指二氯乙酸钠与酸结合形成的盐，所述酸选自盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸天冬氨酸、谷氨酸中的至少一种。

血塞通注射液对体外OGD／R损伤的BV2细胞炎症反应的影响该研究通过对小鼠神经小胶质细胞（BV2）体外模拟脑缺血再灌注（oxygen and glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）损伤探讨血塞通注射液（XST）抗炎症反应的作用及可能的作用机制。

BV2细胞OGD损伤4 h后，通过测定细胞存活率（MTS法）确定复氧时间及血塞通给药浓度，采用ELISA法检测细胞上清中炎症因子TNFα，IL1β，IL6及IL10的分泌水平，蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测细胞中pERK，pJNK，pp38蛋白表达水平的变化，免疫荧光法检测NFκB p65的核转位水平。

结果显示XST 25 mg·L-1可显著提高OGD 4 h/R 6 h 引起的细胞活力的下降，并抑制TNFα，IL1β，IL6及IL10的分泌水平的增高，同时XST能下调OGD/R诱导的pJNK，pp38蛋白表达的升高，并逆转NFκB p65的核转位。

以上研究结果表明XST对OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应具有显著的抑制作用，其作用机制可能与抑制前炎症因子的分泌，调节MAPK信号通路及核转录因子NFκB p65有关。

标签：血塞通注射液；体外模拟脑缺血再灌注；炎症因子；MAPK；NFκB p65缺血性脑卒中是常见多发的神经系统性疾病，约占脑卒中的60%～80%[1]，是世界范围内危害人类健康的重要疾病之一。

已有研究表明，小胶质细胞激活后的炎症反应和免疫应答参与介导缺血性脑卒中的脑损伤过程[2]。

小胶质细胞是中枢神经系统（central nervous system，CNS）中参与免疫应答的主要细胞类型，约占所有神经胶质细胞的5%～20%[3]。

激活的小胶质细胞通过分泌释放TNFα，IL1β，IL6，IL10等促炎因子以及NO，ROS等细胞毒性因子造成CNS神经元损伤[4]。

血塞通注射液（Xuesaitong injection，XST）含三七总皂苷，三七长于止血、活血、消肿止痛，药理研究表明，三七有增加冠状动脉血流量、扩张血管、降低动脉血压、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降低血黏度等作用。