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广西养殖拟穴青蟹携带病原体状况的初步调查彭银辉;张琴;郭昱嵩;裴琨;蔡小辉;檀宁;陆志款;宋忠魁;刘旭佳;董兰芳【摘要】采用微生物分离培养技术和巢式PCR技术相结合方法对2011年采自广西北海南万和古城、钦州茅岭和钦州港、防城港企沙和公车的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)携带寄生虫、细菌和病毒状况开展调查.寄生虫检测结果显示,仅钦州茅岭拟穴青蟹鳃组织中发现寄生虫茗荷(儿).细菌性病原体检测结果显示,共有11种病原性细菌存在于健康养殖拟穴青蟹体内,弧菌属细菌性病原出现频率最高,其中副溶血弧菌和溶藻弧菌在调查区域内均有分布,其他菌种则呈现一定的地域特异性.病毒性病原体检测结果显示,白斑综合症病毒仅在钦州茅岭拟穴青蟹检出,阳性率为4.94%；双顺反子病毒于北海古城和钦州茅岭拟穴青蟹检出阳性携带率为3.70%；呼肠孤病毒携带率则较高,北海、防城港以及钦州拟穴青蟹均有检出,阳性率达25.93%.由此可见,10-11月广西区内健康养殖拟穴青蟹携带弧菌和呼肠孤病毒的比例远远高于其他病原体,为拟穴青蟹携带的主要病原体.【期刊名称】《广东海洋大学学报》【年(卷),期】2012(000)004【总页数】6页(P78-83)【关键词】拟穴青蟹;病原体;寄生虫;细菌;病毒;广西【作者】彭银辉;张琴;郭昱嵩;裴琨;蔡小辉;檀宁;陆志款;宋忠魁;刘旭佳;董兰芳【作者单位】广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海 536000;广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海 536000;广东海洋大学,南海水产经济动物增养殖广东普通高校重点实验室,广东湛江524025;防城港市渔业技术推广站,广西防城港 538001;广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海 536000;防城港市渔业技术推广站,广西防城港 538001;湛江市水产研究所,广东湛江 524000;广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海536000;广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海 536000;广西海洋研究所,广西海洋生物技术重点实验室,广西北海 536000【正文语种】中文【中图分类】S947.6养殖或野生水生动物本身是一个生物的集合体，包括大量的寄生虫、细菌和病毒，不仅对自身构成威胁，而且对生活在同一环境的其他生物体生存也存在潜在危害。
高发性拟穴青蟹细菌病的病原分离及鉴定作者：孙丽慧李倩蒋荣响林锋来源：《湖北农业科学》2019年第02期摘要：从患病拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肝胰腺中分离到2种优势菌株，对2种优势菌株进行了鉴定和特性分析。
利用形态学观察、生理生化特性分析和16S rDNA序列测定法对细菌类别进行判定，并采用药敏试验对细菌的耐药性进行分析。
结果表明，这2种细菌分别为弧菌（Vibrio sp.）和希瓦氏菌（Shewanella），利用15種抗生素对2种细菌进行药敏试验分析，发现2种细菌对恩诺沙星、氟苯尼考、强力霉素高度敏感，对其他几种抗生素则有一定的耐受性。
研究进一步证实了海水致病性弧菌是拟穴青蟹细菌性疾病高发的主要原因，也表明希瓦氏菌可能是一种潜在病原菌，与弧菌协同作用，对拟穴青蟹规模化养殖造成危害，同时也为拟穴青蟹养殖过程中细菌性病害的确定和防治提供参考依据。
关键词：拟穴青蟹（Scylla paramamosain）;弧菌（Vibrio sp.）;希瓦氏菌（Shewanella）;16S rDNA;药敏试验中图分类号：S943; ; ; ; ;文献标识码：A文章编号：0439-8114（2019）02-0096-04DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2019.02.021; ; ; ; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）：拟穴青蟹（Scylla paramamosain）俗称青蟹，具有生长快、肉质鲜美、营养价值高等优点，是中国东南沿海重要的经济蟹类之一[1]。
近年来，青蟹养殖规模的逐步扩大，但由于养殖配合饲料相对滞后，冰鲜饵料极易导致水质恶化，从而导致青蟹病害日趋严重[2，3]。
目前，青蟹常见病害主要有病毒病、细菌病和寄生虫病[4]。
其中，已报道的细菌病主要致病菌有非液化摩拉氏菌[5]、辛辛那提弧菌[6]、溶藻弧菌[6]、副溶血性弧菌[6]、嗜水气单胞菌[7]、温和气单胞菌等[8]。
第３０卷第２期２０１２年３月泉州师范学院学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶｏｌ．３０Ｎｏ．２Ｍａｒ．２０１２拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质梁青龙１，苏鑫龙２，戴聪杰２＊（１．泉州医学高等专科学校，福建泉州 ３６２０００；２．泉州师范学院化学与生命科学学院，福建泉州 ３６２０００）摘 要：采用生物化学的方法研究了拟穴青蟹凝集素的部分性质，结果表明：拟穴青蟹血清的凝集素可凝集兔子、鸽子、鸭子、鸡的动物血红细胞，并且对不同的红细胞的凝集效价有所不同，该凝集素的活性受Ｄ－半乳糖、麦芽糖、鼠李糖等３种糖所抑制．在温度为３０～４０℃，ｐＨ为７．０，盐度为２４时，拟穴青蟹血清凝集素活性最高．拟穴青蟹血清样品的凝集素受Ｃａ２＋的依赖性较小．关键词：拟穴青蟹；凝集素；性质①中图分类号：Ｑ９５９．２３３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－８２２４（２０１２）０２－００７２－０４ 拟穴青蟹［Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ（Ｅｓｔａｍｐａｄｏｒ，１９４９）］，属节肢动物门、甲壳纲、十足目、短尾亚目、梭子蟹科、青蟹属，广布于我国东南沿海，属于梭子蟹科（Ｐｏｒｔｕｎｉｄａｅ）暖水广盐性海洋蟹类，具有生长快、个体巨大、适应性强等特点，最大个体体重可达２ｋｇ．其肉味鲜美，营养价值高，是传统的名贵海产品，也是许多国家人工养殖的主要海洋蟹类品种［１－３］．凝集素是一种能与糖蛋白特异性结合的非免疫性蛋白或糖蛋白［４－５］，具有多种功能及化学性质．凝集素是许多无脊椎动物免疫的主要机能，其作为一种非特异性识别因子，识别自身和异己成分，包括外来入侵的病原菌，并可通过凝集、包围、调理、促进吞噬等方式将其排出体外［６－７］．凝集素还具有止血、凝固、物质运输及创伤修复等一系列作用［８］．目前一般认为，凝集素在甲壳动物免疫反应中主要充当识别因子，用于识别侵入机体内的外源异物，并发挥凝集作用．另外，凝集素还具有高度的调理作用，可在吞噬细胞和异物颗粒间形成分子连接，促进吞噬细胞对异物的吞噬作用，而达到免疫防御的目的［９］．本文测定了拟穴青蟹血清凝集素对某些动物红血球的凝集活性，并对其部分性质进行分析，以期为青蟹等甲壳动物的免疫防御机制的研究提供科学依据和基础材料．１ 材料与方法１．１ 材料１．１．１ 实验试剂药品 ＴＢＳ、ＴＢＳ－Ｃａ２＋、抗凝剂、多种糖类、多种金属离子、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ３．０～５．０）柠檬酸－Ｎａ２ＨＰＯ４缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ６．０～８．０）磷酸盐缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ９．０～１０．０）Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ １１．０～１２．０）Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲液、生理盐水等．１．１．２ 实验材料 拟穴青蟹采自泉州新门菜市场，家鸡、番鸭、家鸽、家兔等动物的全血采自泉州市丰泽区东海镇后埔菜市场．１．２ 方法１．２．１ 实验材料的处理 对拟穴青蟹进行剪肢放血，将血淋巴液经４ ５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃沉淀物，即为含有凝集素的血清样品，将该血清样品放置于４℃冰箱中备用．将采集到的鸡、番鸭、鸽子以及兔子全血加入适量抗凝剂，放置于４℃冰箱中备用．①收稿日期：２０１１－０７－２０通信作者：戴聪杰（１９６６—），男，教授，博士，从事生理生化、浮游动物生理生态研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｏｎｇｊｉｅｄａｉ５０１＠１６３．ｃｏｍ．基金项目：福建省高校服务海西建设重点项目（Ａ１０１）；福建省自然科学基金资助项目（２００８Ｊ０４００２）；泉州市科技局技术研究与开发项目（２００８Ｎ４１）；福建省教育厅资助省属高校科研专项（Ｊｋ２０１００５０）１．２．２ 凝血试验 （１）红细胞制备．按抗凝剂与各类血液的体积比１∶９的比例制成抗凝血，２ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ除去血浆，再加１０倍体积的ｐＨ ７．４的ＴＢＳ溶液充分洗涤，１ ０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ弃上清（重复４次），最后用ＴＢＳ－Ｃａ２＋按红细胞积压体积配成体积分数为２％ＴＢＳ－Ｃａ２＋红细胞悬液［１０］．（２）红细胞凝集实验．首先在９６孔Ｖ型血凝板中每孔中加入２５μＬ ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液，并把拟穴青蟹的血清样品加２５μＬ在各行首孔中，将其混匀后，再从第１孔中吸取２５μＬ混合液加入第２孔，以此类推作倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ．然后在每孔中加入２５μＬ ２％ＴＢＳ－Ｃａ２＋红细胞悬液，混匀，并做空白对照，室温放置１～２ｈ后，肉眼观察各组凝集情况．无凝集时，红细胞沉于Ｖ型板孔底部，呈一光滑的小圆点；凝集时，红细胞相互聚集，形成一片絮状物，不下沉．红细胞凝集活力以产生凝集现象时的最大稀释倍数表示，此时，凝集素粗品的浓度为最低凝集浓度［１１］．１．２．３ 糖抑制试验 糖抑制试验糖抑制试验在９６孔Ｖ型微量血凝滴定板中进行．试验用的５种糖为Ｄ－半乳糖（Ｄ－Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｄ－甘露糖（Ｄ－Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｄ－果糖（Ｄ－Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、麦芽糖（Ｍａｌｔｏｓｅ）、鼠李糖（Ｒｈａｍｎｏｓｅ），其浓度均为２００ｍｍｏｌ·Ｌ－１．先往Ｖ型板每孔中加入２５μＬ的拟穴青蟹血清样品，再分别加入２５μＬ糖溶液，再加入ＴＢＳ－Ｃａ２＋鸽红细胞，在３７℃下保温１～２ｈ后，观察凝集情况［１２］．１．２．４ 温度对凝集素活性的影响 先在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ－Ｃａ２＋缓冲液；然后把拟穴青蟹的血清样品分装入１．５ｍＬ离心管中，分别在４、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００℃水浴锅中放置２０ｍｉｎ，按顺序放入，按顺序取出，分别等量加入各行首孔中，并做倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ，再加入２５μＬ等量２％兔红细胞悬液，混匀．室温下放置１～２ｈ后按顺序进行观察．以室温凝集素对兔红细胞的凝集效果做对照［１３］．１．２．５ ｐＨ对凝集素活性的影响 在测定ｐＨ对拟穴青蟹凝集素的凝集活性的影响实验时，使用梯度ｐＨ缓冲液：ｐＨ ７．０～９．０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液；ｐＨ ６．０～８．０Ｎａ２ＨＰＯ４－ＮａＨ２ＰＯ４；ｐＨ ３．０～５．０Ｎａ２ＨＰＯ４－柠檬酸缓冲液；ｐＨ ９．９～１０．８３Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲液．在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ缓冲液．在各行首孔中分别加入等量拟穴青蟹血清样品溶液，并进行倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；再每孔加入等体积的２％的兔红细胞悬液，充分振匀．室温下放置１～２ｈ后观察．血凝活力以凝集素最大稀释倍数（２ｎ）表示，以ＴＢＳ溶液做对照［１４］．１．２．６ Ｃａ２＋对凝集素活性的影响 先在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ缓冲液，再在各行首孔中分别再加入２５μＬ拟穴青蟹血清样品，并做倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；并在每孔中分别加入０．０１、０．０２、０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１的ＥＤＴＡ，用２％兔红细胞测定其凝集活力，对于受ＥＤＴＡ抑制的血清样品重新加入１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液后，观察是否恢复凝集活性．血凝活力以凝集素最大稀释倍数（２ｎ）表示，以ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液做对照［１５］．１．２．７ 盐度对凝集素活性的影响 在９６孔Ｖ型血凝板上每行分别加２５μＬ盐度为６‰、１２‰、１８‰、２４‰、３６‰、４８‰的不同ＮａＣｌ浓度的盐水，并在每行首孔中加入２５μＬ血清样品，进行倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；再加入等量的２％鸽子红细胞悬液，室温下放置１～２ｈ后，检测对鸽子红细胞的凝集活性［１６］．２ 结果与分析２．１ 血红细胞的凝集作用拟穴青蟹的血清样品对兔子红细胞、鸽子血红细胞、鸡血红细胞、鸭血红细胞的凝集效果见表１．结果显示，拟穴青蟹的血清样品对４种红细胞都有凝集作用．其中：对兔红细胞的凝集效价最高，为２９；对鸭红细胞的凝集效价最低，为２３．表１ 拟穴青蟹血清样品对几种红细胞的凝集效价血红细胞类型兔子鸽子鸡鸭凝集效果２９ ２６ ２４ ２３２．２ 糖抑制作用表２是５种糖对拟穴青蟹血清样品凝集素凝集鸽红细胞的影响．结果显示，Ｄ－半乳糖、麦芽糖、鼠李糖３种糖对拟穴青蟹血清样品对鸽红细胞凝集有抑制作用；而Ｄ－甘露糖、果糖则无抑制作用．其他糖类对其是否有抑制作用依然有待研究．３７ 第２期梁青龙，等：拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质 表２ 拟穴青蟹的血清样品凝集素活性的糖抑制糖类Ｄ－半乳糖Ｄ－甘露糖麦芽糖鼠李糖果糖２００ｍｍｏｌ·Ｌ－１糖的抑制结果抑制不抑制抑制抑制不抑制２．３ 热稳定性表３为不同温度下，拟穴青蟹血清样品凝集素凝集兔血红细胞的凝集效价．结果显示，当温度为４℃，凝集效价对比正常温度时有点低，３０～４０℃跟正常温度时的凝集效价一样，超过４０℃后，凝集效价逐渐下降，直至７０℃后，不产生凝集作用．表４ ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响ｐＨ值４．０ ５．０ ６．０ ７．０ ８．０ ９．０ １０．０凝集效价——２６ ２９ ２７ ２６ ２５表３ 拟穴青蟹血清样品不同温度下的凝集效价温度／℃４ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０凝集效价２７ ２９ ２９ ２６ ２３——２．４ ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响表４为不同ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响．结果显示，当ｐＨ为４或者５时，拟穴青蟹血清样品及兔红细胞皆为糊状，已经无法显示其凝集的效价了；当ｐＨ为７时，此时的凝集效价最高，而随着ｐＨ的下降或者升高，凝集效价都呈现下降趋势，至ｐＨ为１０时依然有凝集作用．２．５ Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响表５为Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响．结果显示，拟穴青蟹凝集素在ＥＤＴＡ处理之后仍具有活性，说明其对外源Ｃａ２＋的依赖性较小．表６ 盐度对凝集活性的影响盐度／‰６ １２ １８ ２４ ３６ ４８凝集效价２４ ２５ ２６ ２９ ２５ ２４表５ Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响ＣＥＤＴＡ／ｍｍｏｌ·Ｌ－１对照组１０ ２０ ５０凝集效价２９ ２４ ２３ ２２２．６ 盐度对凝集活性的影响表６为不同盐度时，拟穴青蟹血清样品对鸽红细胞的凝集作用的影响．结果显示，在盐度为６‰～４８‰时，拟穴青蟹血清对鸽红细胞都具有凝集活性，并呈现先高后低的趋势；当盐度在２４‰时，凝集活性最高．３ 讨论凝集素是一类具有独特生理活性的蛋白质或糖蛋白，在拟穴青蟹的免疫过程中发挥着重要的作用．从表１可以看出拟穴青蟹血清样品对不同的红细胞凝集效果呈现不同的效价，这与文［１７－１８］的结果相似，与凝集素的作用机理相关，可能是由于各种红细胞的表面的糖蛋白各异而导致结合效果的差异．锯缘青蟹的血清凝集素可被Ｄ－半乳糖抑制［１９］，表２显示出拟穴青蟹也同样被Ｄ－半乳糖抑制，还同时被麦芽糖、鼠李糖所抑制．能对血清中凝集素产生抑制的糖类一般被认为是其结构互补于凝集素的结合部位，从而可确定出凝集素结合部位对糖的特异性．另一方面，凝集素对动物红细胞的凝集可看作是这些细胞表面的多糖或糖蛋白的识别性结合，这在无脊椎动物的免疫中起重要作用［２０］．糖抑制试验的结果可为分离和纯化拟穴青蟹血清凝集素时亲和层析柱的选择提供基础资料和科学依据［１９］．凝集素的热稳定性主要由凝集素的活性位点的性质所决定的，若活性位点为肽链或蛋白质，则由于肽链或蛋白质受热后其空间构象会发生变化使其失去活性，因而这类凝集素的热稳定性较差；但如果活性位点为糖链，糖链在受热时依然能较好的保持其活性，所以这类凝集素的热稳定性较好．由表３可知，拟穴青蟹血清样品凝集素的耐热性较好，由此可以推断其凝集素的活性位点可能为糖链．曾缓缓等人经研究得出，拟穴青蟹的适宜生存的ｐＨ为７．５～９．０，过高或者过低都会导致其免疫力下降［２１］．本实验拟穴青蟹血清样品凝集素凝集作用效果较好的ｐＨ范围为７．０～９．０，与其所得出的结论相一致，进一步证实了拟穴青蟹生存的最适宜ｐＨ为中性偏碱，即为７．０～９．０．本实验中，拟穴青蟹血清样品的凝集素在６‰～４８‰盐度范围内依然有活性，与其为海产养殖品，并具有广盐性有关［１－３］．陈建明等人研究得出拟穴青蟹大眼幼体适宜盐度为２０．５‰～２６．５‰，幼蟹适宜盐度为１０．５‰～２６．５‰［２２］，本实验的得出的拟穴青蟹血清样品的凝集素凝集效果最佳盐度也在这区间，与其研究相符．不过其所能承受的最高盐度依然有待研究．４７ 泉州师范学院学报２０１２年３月 参考文献：［１］ 林琪，李少菁，黎中宝，等．中国东南沿海青蟹属（Ｓｃｙｌｌａ）的种类组成［Ｊ］．水产学报，２００７，３１（２）：２１１－２１９．［２］ ＫＥＥＮＡＮ Ｃ Ｐ，ＤＡＶＩＥ Ｐ Ｆ Ｊ，ＭＡＮＮ Ｄ Ｌ Ａ．ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ 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３６２０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｌｅｃｔｉｎ ｉｎｓｅｒｕｍ ｏｆ Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎｃａｎａｇｇｌｕｔｉｎａｔｅ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ，ｄｏｖｅ，ｄｕｃｋ，ｃｈｉｃｋｅｎ，ａｎｄ ｈａｄ ａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｃａｎ ｂｅ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｄ－Ｇａｌａｃｔｏｓｅ，Ｍａｌｔｏｓｅ，Ｒｈａｍｎｏｓｅ．Ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｒｏｍ ３０ｔｏ ４０℃，ｐＨ ｉｓ ７．０，ｓａｌｉｎｉｔｙｉｓ ２４．Ａｎｄ ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｉｓ ｌｅｓｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｄ ｏｎ Ｃａ２＋．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ；ｌｅｃｔｉｎ；ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ５７ 第２期梁青龙，等：拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质 。
•病原概述•病原的发现与鉴定•病原的致病机理目录•病原的流行与防控•病原的分子生物学研究•研究展望01病原定义病原分类病原特征病毒在锯缘青蟹体内主要存在于鳃、肝、肌肉等组织中。
01病原的发现病原的分离与鉴定病原的培养特性病原体可在海水、淡水、土壤等多种环境中存活和繁殖。
01基因编码蛋白基因缺失或突变致病相关基因毒素蛋白粘附蛋白致病相关蛋白致病相关代谢产物代谢产物积累病原菌在生长过程中产生的某些代谢产物可能在一定条件下大量积累，这些代谢产物可能对宿主细胞有毒害作用。
代谢产物调节某些代谢产物可能参与了病原菌与宿主之间的相互作用，通过调节宿主免疫反应或代谢过程来影响致病效果。
01流行特点防控策略养殖环境管理合理控制养殖密度，避免过度拥挤。
养殖密度控制饲料管理疾病监测与治疗01020403定期进行疾病监测，发现病蟹及时隔离治疗。
保持养殖水域清洁，定期更换水，减少污染源。
选用优质饲料，避免污染源的引入。
防控效果评估环境改善发病率降低经济效益提升01对病原菌的基因组进行测序，获得基因组序列，为后续研究提供基础数据。
基因组测序对测序得到的基因组进行注释，预测基因的功能和表达。
基因组注释分析病原菌基因组的变异情况，研究病原菌的进化和适应机制。
基因组变异分析基因组学研究蛋白质组学研究蛋白质相互作用研究蛋白质修饰研究蛋白质表达分析比较基因组学研究病原菌比较基因组学分析比较不同病原菌的基因组，寻找与疾病发生相关的共有基因和特性基因。
病原菌进化和系统发育分析通过比较基因组学方法，分析病原菌的进化和系统发育关系，揭示其适应和演化过程。
比较基因组学与流行病学通过比较基因组学方法，研究病原菌的流行病学和传播途径，为疾病防控提供参考。
01030201研究现状与不足锯缘青蟹黄水病是一种严重的病害，目前对于该病的病原和发病机制尚不完全清楚，缺乏有效的防治措施。
现有的研究主要集中在病原的分离和鉴定上，对于病原的生态学、遗传学和流行病学等方面的研究还不够深入。
锯缘青蟹黄水病病原研究及综合防控初报锯缘青蟹简称青蟹，是我国浙江、福建和广东等东南沿海省份的主要养殖品种，因其肉质鲜美，营养丰富，经济价值高而得到持续快速发展，产值达几十亿元。
”黄水病”（亦称白水病、白浆病）是目前青蟹养殖发展中的主要疾病之一，其发病范围广、死亡率高，给养殖青蟹造成重大经济损失，严重制约了青蟹养殖的健康发展。
该病主要表现为病蟹蟹体消瘦，肌肉白浊，打开蟹盖可见到不同程度的土黄色或浊白色牛奶状液体等症状。
自该病发生以来，不少研究者对其发病原因进行研究，但结果各不相同，其病原至今仍有较大的争议，纪荣兴等1998报道非液化摩拉氏菌是”黄水病”的病原，毛之娟等2001曾报道辛辛那提弧菌等是”黄水病”的病原，宋振荣等1998认为病毒是肌肉坏死”黄水病”的病原，而韩新全等则认为环境因素是诱发”黄水病”的根本原因。
笔者通过大量取样发现，所有”黄水病”病蟹的血淋巴和组织中均可发现大量的寄生原虫，经过病原、组织病理、电镜观察以及分子生物学方法研究，确定血卵涡鞭虫Hematodinium.sp 是引起养殖青蟹”黄水病”的重要病原。
现将调查的初步情况报告如下，希望能为该病的诊断和防治提供科学依据。
1、流行情况该病主要发生在南方沿海养殖锯缘青蟹当中，在浙江的象山港、三门湾和乐清湾一带，包括三门、玉环、乐清、宁海、象山等地每年均有不同程度的发生，并往往呈暴发性流行趋势，流行率通常在30%～50%左右，平均死亡率达20%，病情重的围塘，死亡率可达60%～70%以上，个别塘甚至出现绝产，给养殖生产带来极大损失。
该病通常病情发展缓慢，从发病到死亡往往持续较长时间，但具有传染性，发病率和死亡率高。
初步研究发现，其流行与季节、温度、盐度等环境因子、个体大小及性别等可能存在一定的关系。
主要发生在每年的6月份～10月份的夏秋季节，其中以7～9月高水温期为发病流行高峰，尤其是在温盐度环境变化较大的梅雨季节和台风季节，会在短时间内出现死亡高峰。
锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中FSH和LH的免疫识别叶海辉;黄辉洋;李少菁;王桂忠【期刊名称】《自然科学进展》【年(卷),期】2006(016)006【摘要】为研究甲壳动物卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的存在与分布,我们应用免疫细胞化学技术对FSH和LH在锯缘青蟹(Scylla serrata)脑中的分布进行了定位研究.结果显示:在近成熟期雌蟹和精子细胞期雄蟹脑中检测到FSH中等免疫阳性反应和LH弱免疫阳性反应,免疫阳性细胞分布在前脑的前中胞体群和后脑的后侧胞体群.发育早期雌蟹和精原细胞期雄蟹未见FSH和LH免疫阳性反应.研究结果表明:FSH和LH存在于锯缘青蟹脑中并具有发育阶段特异性,可能参与性腺发育及精卵成熟的调节.【总页数】3页(P768-770)【作者】叶海辉;黄辉洋;李少菁;王桂忠【作者单位】厦门大学海洋系,近海海洋环境科学国家重点实验室,厦门,361005;厦门大学海洋系,近海海洋环境科学国家重点实验室,厦门,361005;厦门大学海洋系,近海海洋环境科学国家重点实验室,厦门,361005;厦门大学海洋系,近海海洋环境科学国家重点实验室,厦门,361005【正文语种】中文【中图分类】Q95【相关文献】1.盐度变化对锯缘青蟹Scylla serrata免疫因子的胁迫影响 [J], 马月钗;杨玉娇;王国良2.锯缘青蟹视神经节FSH和LH的免疫识别 [J], 叶海辉;黄辉洋;李少菁;王桂忠3.锯缘青蟹Scylla serrata黄水病血液病理学分析 [J], 丁小丰;王国良4.锯缘青蟹(Scylla serrata)呼肠孤病毒5个结构蛋白互作分析 [J], 熊尚凌;邢峻梁;范东洋;袁洋洋;朱四东;林旦璆;杨季芳;陈吉刚5.换水量与循环水量对锯缘青蟹Scylla serrata (Forsk(a)l)仔、幼蟹生长存活率的影响 [J], 于忠利; 王建刚; 乔振国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
环境因子对拟穴青蟹生理生化影响运用酶学分析方法和组织学技术,研究了水体中不同浓度氨氮、亚硝酸盐、pH和盐度胁迫对拟穴青蟹生理生化以及鳃、肝胰腺显微结构的影响,探讨环境因子胁迫下拟穴青蟹生理生化的响应及免疫防御机制,以期为其健康养殖和水质管理提供理论指导,并为甲壳动物环境生理学研究积累基础资料。
本试验的主要结果和结论如下:1氨氮胁迫对拟穴青蟹生理生化以及鳃、肝胰腺显微结构的影响过滤海水中分别添加氨氮（以氯化铵作为氨氮源）0 mg·L<sup>-1</sup>（对照组）、10mg·L<sup>-1</sup>、20 mg·L<sup>-1</sup>、30 mg·L<sup>-1</sup>、40 mg·L<sup>-1</sup>,胁迫24 h,48 h,72 h,96 h对拟穴青蟹生理生化及组织、器官显微结构影响的结果表明,拟穴青蟹血清PO活性在氨氮胁迫前期（24 h、48 h）随氨氮浓度的升高而增高,而在胁迫后期（72 h、96 h）却无明显规律;各组的拟穴青蟹血清PO活性,胁迫48 h时最高,与其它各组间差异显著（P<0.05）,胁迫72 h时均为最低,这与拟穴青蟹THC变化有些相似,各组拟穴青蟹THC也是在胁迫48 h时最高,但在胁迫96 h时最低。
此外,高浓度胁迫（C30、C40）时,拟穴青蟹THC一直处于较低水平,C40组与其它各组间差异显著（P<0.05）。
拟穴青蟹鳃中SOD活性除C40组外,其余各组在胁迫前期随氨氮浓度的升高而升高,而在胁迫后期则随氨氮浓度的升高而下降,C40组拟穴青蟹鳃中SOD活性随胁迫时间的延长而一直呈下降趋势;血清SOD活性与鳃SOD活性变化趋势相似,但C40组拟穴青蟹血清SOD活性在氨氮胁迫48 h时最大,且与其它各组间差异显著（P<0.05）;各组拟穴青蟹肝胰腺和肌肉的SOD活性变化趋势与鳃SOD活性相同。
大黄多糖对拟穴青蟹免疫相关基因表达的影响文英;曹劲松;张泽蕙;钟名其;陈洁辉;章跃陵【摘要】运用RT-PCR技术探索拟穴青蟹(Scylla paramamosain)注射免疫增强剂——大黄多糖(rhubarb polysaccharide,RP)后11个免疫相关基因的表达变化情况.结果发现,大黄多糖刺激拟穴青蟹4d后,血细胞中4个基因(丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化氢酶、过氧化物还原酶和酚氧化酶原)表达水平分别上调1.1倍、4.1倍、1.3倍和2.1倍,与对照组相比,存在极显著(P＜0.01)或显著性差异(P＜0.05).肝胰腺中5个基因表达变化显著(P＜0.05),其中丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化物还原酶和抗脂多糖因子3个基因表达分别上调2.1倍、4.8倍和1.7倍;过氧化氢酶和溶菌酶仅在实验组中表达,未见其在对照组表达.由此推测,丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化氢酶、过氧化物还原酶、酚氧化酶原、抗脂多糖因子和溶菌酶6个基因可能与拟穴青蟹免疫增强有关.【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2015(022)003【总页数】6页(P387-392)【关键词】拟穴青蟹;大黄多糖;RT-PCR;免疫增强相关基因【作者】文英;曹劲松;张泽蕙;钟名其;陈洁辉;章跃陵【作者单位】汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063;汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063;汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063;汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063;汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063;汕头大学理学院生物学系海洋生物研究所,广东汕头515063【正文语种】中文【中图分类】S917拟穴青蟹（Scylla paramamosain）因具有生长快、适应性强、肉味鲜美、营养价值高等特点，目前已发展成为我国水产养殖的一个重要分支。
