沙门氏菌的免疫学检测
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沙门氏菌的检验原理沙门氏菌是一类常见的细菌,广泛存在于自然界中的土壤、水体和动物体内。
它们可以引起人类和动物的食物中毒和感染性疾病,给人们的生活和健康带来了威胁。
为了及时发现和控制沙门氏菌的感染,科学家们开发了许多检验方法,其中最常用的是PCR技术和血清学检测。
PCR(聚合酶链反应)是一种基于DNA复制的技术,可以在短时间内扩增目标DNA片段。
沙门氏菌的PCR检测主要是通过检测其特异性基因进行的。
科学家们根据沙门氏菌特异性基因的序列设计引物,然后将引物与待检样品中的DNA反应,通过一系列的温度变化,使DNA在体系中进行复制。
经过多轮的复制过程,待检样品中的沙门氏菌特异性基因片段会被扩增成大量的复制产物。
最后,通过电泳分析,可以确定待检样品中是否存在沙门氏菌。
PCR技术具有灵敏度高、特异性强、快速等优点,但是需要实验室设备和专业技能的支持。
为了方便大规模的沙门氏菌检测,科学家们还开发了一种基于血清学的检测方法。
这种方法主要是通过检测人体或动物体内产生的特异性抗体来判断是否感染了沙门氏菌。
血清学检测主要分为血清凝集试验和酶联免疫吸附检测。
血清凝集试验通过将待检血清与沙门氏菌的抗原混合,观察是否产生凝集反应来判断是否感染了沙门氏菌。
酶联免疫吸附检测则是将待检血清与沙门氏菌的抗原结合,然后通过添加特异性酶标记的抗体来检测是否有免疫反应发生。
这两种方法都可以通过观察结果的变化来判断是否感染了沙门氏菌。
沙门氏菌的检验原理主要是通过检测沙门氏菌特异性基因或特异性抗体来判断是否感染了沙门氏菌。
这些检验方法具有高灵敏度、高特异性和快速的优点,可以有效地帮助人们及时发现和控制沙门氏菌的感染。
但是需要实验室设备和专业技能的支持,所以在进行沙门氏菌检测时,应该选择合适的方法,并且由专业人员进行操作,以确保结果的准确性和可靠性。
通过科学家们的不断努力和创新,相信在未来,我们将能够更加有效地预防和控制沙门氏菌感染,保障人们的生活和健康。
沙门氏菌基本知识及检测方法沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的致病菌,属于革兰氏阴性杆菌。
它可以引起人体和动物的沙门氏菌食物中毒,病症包括腹泻、发热、呕吐等。
沙门氏菌广泛分布于自然环境和动物体内,可以通过感染食物、水源、环境污染等多种途径传播。
为了保障食品安全,及早发现和控制沙门氏菌污染,需要采用一系列有效的检测方法。
1. 分类:沙门氏菌属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)中的一种细菌。
根据沙门氏菌的表面抗原和酵素特性,可以将其分为超过2500种不同的血清型。
2.形态特征:沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌,菌体呈杆状,大小约为0.7-1.5微米。
在染色过程中,菌体呈现出粗糙的外表。
沙门氏菌有时可以长出长鞭毛,使其具有活跃的运动能力。
3.生长特性:沙门氏菌是嗜好性厌氧菌,但也可以在氧气存在的条件下生长。
最适生长温度为37℃,但也可以在20-45℃范围内生长。
沙门氏菌可以在多种细菌培养基上繁殖。
它主要利用碳源进行代谢,产生酸和气体。
5.病症:沙门氏菌感染引起的病症包括腹泻、发热、恶心、呕吐等。
在部分情况下,沙门氏菌可以引发严重的感染,包括败血症、心内膜炎和肾脏感染等。
沙门氏菌的检测方法:1.传统培养法:传统培养法是检测沙门氏菌的常用方法。
该方法需要将样品接种到富含营养成分的培养基上,进行孵育。
菌落形成后,可以通过形态、生理和生化特性进行初步鉴定。
然后,通过血清试验、生化特性测试等进行进一步的确认和鉴定。
2.分子生物学方法:分子生物学方法在沙门氏菌检测中得到广泛应用。
其中,PCR(聚合酶链式反应)技术是最常用的方法之一、PCR可以对沙门氏菌的特异基因序列进行扩增,从而快速而准确地检测沙门氏菌。
另外,核酸杂交和DNA序列分析等技术也可以用来进行沙门氏菌的检测和鉴定。
3.免疫学方法:免疫学方法是一种基于抗原-抗体反应的检测方法。
通过检测沙门氏菌的抗原或抗体,可以快速确定样品中是否存在沙门氏菌。
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
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沙门氏菌免疫学检测方法
沙门氏菌的免疫学检测方法为酶联免疫法,利用抗原-抗体之间的特异性结合反应为基础,用免疫力放大技术来鉴定病原菌。
灵敏度和特异性比较高,在增菌以后可以在短时间内检测出来。
酶联免疫法全称为酶联免疫法吸附测定法,英文缩写为ELISA,是一种酶标记测定方法,可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,是一种敏感性高、特异性强、重复性好的定量的实验诊断方法。
酶联免疫法原理是已经被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗体与
过量待检测的抗体或抗原反应,一部分结合形成固相抗原抗体复合物,另一部为多余的游离抗体或抗原,通过洗板,保留固相抗原抗体复合物,洗去多余游离抗体或抗原,再加入酶标记的抗体,形成固相抗原抗体酶标记抗体复合物,洗去多余酶标抗体,加入底物,此时酶催化底物显色,颜色的深浅与待测的抗体或抗原含量成正比或反比。
酶联免疫法现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病,寄生虫病及非传染病等各方面的免疫诊断,也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,如检测结核抗体、EB病毒抗体、HIV抗体、乙肝病毒抗原、破伤风抗毒素、流感病毒的抗原、梅毒抗体等。
酶联免疫法虽然应用广泛,但也存在一定的局限性,手工操作步骤繁琐,而且影响因素多,易出现假阳性结果等,因此有很多项目被兴起的化学发光法所取代。
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌,其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。
下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 培养分离沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。
常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。
将待检样品接种于选择性培养基上,并采用适当的温度和培养时间进行培养。
沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落,可以通过形态特征进行初步判断。
2. 生化检测生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。
常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。
气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。
亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。
尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。
3. 血清学检测血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。
常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。
在这些方法中,沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合,形成可见的凝集物或荧光产物,从而判断是否感染沙门氏菌。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应(PCR)、核酸杂交和基因测序等。
PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏菌基因的特定片段,从而进行检测。
核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合,形成杂交信号来进行检测。
基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列,确定其身份。
总结:沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。
这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在,可以提供准确鉴定和检测结果。
在实际应用中,结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。
沙门氏菌的检测方法及其原理
沙门氏菌的检测方法主要有传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
以下将分别介绍每种方法的原理。
1. 传统培养法:这是一种常用的检测沙门氏菌的方法。
原理是将样本(如食物、病人体液等)接种在含有适宜营养物质的培养基上,利用沙门氏菌的生长特性进行培养。
经过一定时间的孵育,形成典型的沙门氏菌菌落后,可以通过形态特征和生理生化试验进行鉴定。
2. 分子生物学方法:分子生物学方法主要是利用沙门氏菌特异性的基因或DNA序列来检测其存在。
最常用的方法是聚合酶链反应(PCR),其中利用特异性引物扩增含有沙门氏菌特定序列的DNA片段。
扩增后的产品可以通过凝胶电泳进行检测与鉴定。
此外,还有核酸杂交、测序和引物探针技术等方法也可以用于沙门氏菌的检测。
3. 免疫学方法:免疫学方法利用沙门氏菌的抗原与抗体之间特异性反应进行检测。
其中最常用的方法是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
ELISA基于固相试剂酶标板,将沙门氏菌的抗原固定在试剂酶标板上,然后加入特异性抗沙门氏菌的抗体。
经过洗涤步骤,再加入辅助抗体结合酶标记物。
最后加入底物,沙门氏菌存在时可通过颜色变化来判断阳性反应。
这些方法在实验室或食品安全监测中广泛应用,能够高效、准确地检测沙门氏菌的存在。
微生物沙门菌检测方法
沙门菌是一种常见的细菌,可以引起食物中毒和肠道感染。
常见的微生物沙门菌检测方法包括:
1. 培养方法:将样品(如食物、粪便等)在富含沙门菌生长所需营养物质的培养基上培养,然后观察是否有沙门菌的生长。
这种方法需要一定的时间,通常需要24-48小时。
2. PCR方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术,通过扩增沙门菌的DNA片段来检测沙门菌的存在。
PCR方法可以快速准确地检测沙门菌,通常只需要数小时。
3. 免疫学方法:利用特异性抗体与沙门菌的抗原进行特异性反应,通过观察抗原-抗体的反应形成可见的颜色、荧光或光学信号来检测沙门菌。
常见的免疫学方法包括:
- ELISA(酶联免疫吸附试验):通过固相酶标法来检测沙门菌的抗原或抗体;- 免疫层析试纸法:利用沙门菌抗原或抗体与检测纸片上预先固定的抗体或抗原进行特异性反应,形成可见的颜色提示结果;
- 免疫荧光法:利用沙门菌抗原或抗体与特定荧光染料标记的抗体或抗原进行特异性反应,通过观察荧光信号来检测沙门菌。
以上是常见的微生物沙门菌检测方法,选择适合的方法需要考虑到检测的目的、时间要求和实验条件等因素。
沙门氏菌的检验原理沙门氏菌是一类广泛存在于自然界中的革兰氏阴性杆菌,它是现代医学和食品安全领域中一个备受关注的细菌。
沙门氏菌感染会引起人体的食物中毒和肠道感染等疾病,严重时甚至会危及生命。
因此,沙门氏菌的快速检测和准确诊断显得尤为重要。
沙门氏菌的检验原理主要是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
首先,从样品中分离出可疑的沙门氏菌菌株。
这一步骤通常通过将样品接种在含有沙门氏菌生长所需的富营养培养基上来实现。
沙门氏菌在这种培养基上生长迅速,菌落呈灰白色,有时带有红色或黑色。
接下来,对分离出的沙门氏菌菌株进行鉴定和鉴别。
这一步骤通常使用传统的生化试验和分子生物学技术。
传统的生化试验包括对菌株进行氧化-发酵试验、葡萄糖发酵试验、亚硝酸盐还原试验等。
这些试验通过检测菌株对不同营养物质的利用和代谢产物的生成来确定其是否为沙门氏菌。
分子生物学技术也被广泛应用于沙门氏菌的检验中。
其中最常用的技术是聚合酶链反应(PCR),它可以通过扩增沙门氏菌特异基因片段来识别和检测沙门氏菌。
PCR技术具有高度特异性和敏感性,可以在短时间内检测到沙门氏菌的存在。
除了分离和鉴定菌株外,还可以通过检测沙门氏菌的特异性抗原来进行沙门氏菌的检验。
沙门氏菌的特异性抗原主要包括菌壁脂多糖(LPS)和外膜蛋白等。
通过将样品与特异性抗体结合,然后通过免疫反应来检测是否存在沙门氏菌。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫层析试验(ICA)等。
沙门氏菌的检验原理是基于沙门氏菌的特征和特异性抗原来进行的。
通过分离菌株、鉴定和鉴别以及检测特异性抗原,可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
这对于食品安全和公共卫生至关重要,有助于及时采取措施防止沙门氏菌的传播和感染。
沙门氏菌的检验原理是通过分离菌株和检测其特异性抗原来进行的。
这一检验方法结合了传统的生化试验和分子生物学技术,可以快速准确地诊断沙门氏菌感染,为食品安全和公共卫生提供了重要的支持。
然而,需要注意的是,沙门氏菌的检验方法在实际应用中仍然面临一些挑战,如样品处理和检测灵敏度等方面的问题。
2试述沙门氏杆菌的微生物学诊断内容和步骤。
篇一:沙门氏杆菌是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于自然界中,包括食品和环境中。
沙门氏杆菌食物中毒是一种常见的食源性疾病,主要通过沙门氏杆菌污染食品后,人食用后感染而发病。
因此,对于沙门氏杆菌的诊断至关重要,有助于及早发现和控制疫情。
沙门氏杆菌的微生物学诊断包括以下步骤:1. 培养:将沙门氏杆菌放入含有合适培养基的培养碗中,并将其培养在温度适宜、pH 7.0-8.0 的条件下。
通过观察菌落形态、颜色、培养基成分等特征,可以初步判断沙门氏杆菌的存在。
2. 抗体检测:利用沙门氏杆菌的抗原或抗体,通过免疫学方法进行检测。
常用的沙门氏杆菌抗体包括血清学检测和单克隆抗体检测。
血清学检测是通过采集患者或可疑患者的血清,进行沙门氏杆菌抗体检测。
单克隆抗体检测则是利用沙门氏杆菌的特异性抗体,通过免疫吸附技术或免疫荧光技术进行检测。
3. 分子生物学检测:分子生物学技术可以通过检测沙门氏杆菌的基因组、蛋白质等分子信息,来诊断沙门氏杆菌的存在。
常用的分子生物学检测方法包括基因测序、荧光定量PCR、分子生物学检测等。
4. 血清学检测与单克隆抗体检测的比较:血清学检测和单克隆抗体检测都是沙门氏杆菌微生物学诊断中常用的方法,具有各自的优缺点。
血清学检测能够快速、准确地诊断沙门氏杆菌感染,但是检测成本高、样本采集困难;单克隆抗体检测则具有较高的灵敏度和特异性,但是需要使用复杂的技术进行检测。
因此,在选择检测方法时,需要根据具体情况综合考虑。
总之,沙门氏杆菌的微生物学诊断需要根据患者的症状、病史、实验室检测结果等多个因素进行综合判断,以尽早发现和诊断沙门氏杆菌感染。
随着分子生物学技术的发展,沙门氏杆菌的微生物学诊断将越来越准确和灵敏。
篇二:沙门氏杆菌是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于土壤和水体中,是人和动物肠道中的正常菌群之一。
当沙门氏杆菌感染人类或动物时,可能会引起各种疾病,如食物中毒和肠道感染等。
沙门氏菌菌检测方法沙门氏菌(Salmonella)是一类常见的食源性致病菌,可以引起人类各种疾病,如食物中毒、胃肠炎等。
因此,对食品中的沙门氏菌进行检测是非常重要的。
下面我将详细介绍几种常用的沙门氏菌检测方法。
1. 培养法培养法是最常用的沙门氏菌检测方法之一。
该方法需要将样品(如食品、水)在适当的培养基上进行培养,并观察是否有沙门氏菌的生长。
具体步骤如下:(1)将样品接种于含有选择性成分的培养基上;(2)将接种的培养基培养在适当的温度下,通常为37摄氏度;(3)观察培养基上是否有典型的沙门氏菌的形成,一般表现为黑色斑点;(4)进行进一步的确认试验,如生化试验和血清学试验。
2. PCR法PCR法是一种快速、准确且高度灵敏的沙门氏菌检测方法。
PCR法通过扩增样品中沙门氏菌的特定基因片段来检测其存在。
具体步骤如下:(1)提取样品中的DNA;(2)使用特定引物扩增沙门氏菌的基因片段;(3)通过电泳将扩增产物分离,并观察是否有目标片段的出现。
3. ELISA法ELISA法是一种常用的快速筛查大量样品的沙门氏菌检测方法。
该方法利用特异性抗体与沙门氏菌抗原结合,并通过酶催化反应来检测沙门氏菌的存在。
具体步骤如下:(1)将样品涂覆在固相酶标板上;(2)添加特异性抗体与沙门氏菌抗原结合;(3)洗涤去除非特异性结合的成分;(4)添加辣根过氧化物酶标记的二抗,并形成酶标复合物;(5)通过酶催化反应产生显色物质,观察是否有颜色的出现。
4. 质谱法质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的沙门氏菌检测方法。
该方法通过检测样品中沙门氏菌的特定代谢产物来判断其存在与否。
具体步骤如下:(1)提取样品中的代谢产物;(2)使用质谱仪进行检测,并与数据库中的标准进行比对;(3)根据比对结果判断样品中是否有沙门氏菌的存在。
除了上述常用的沙门氏菌检测方法外,还有一些新兴的检测技术,如纳米技术、免疫传感器等。
这些方法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点,可以用于食品、环境等多种领域的沙门氏菌检测。
沙门氏菌的免疫学检测
抗体检测
利用抗原-抗体反应的显著特异性,来进行细菌的鉴别和血清学定型,已有半个多世纪的历史。
细菌菌体或鞭毛抗原的特异性抗体的存在,使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。
已经建立的沙门氏菌免疫学检测方法有许多种,大致可分为以酶标抗体(ELISA),荧光抗体染色(免疫荧光法),同位素标记抗体(放射免疫试验)为基础的方法及其它多种以抗体为基础,利用乳胶凝集、免疫传感器、免疫扩散及免疫色谱技术的方法。
但常规中最广泛采用的是以双位点ELISA技术即夹心ELISA为基础的方法。
此法改进后用有放射活性的同位素替代标记抗体,概括地说,是指以固定在固体基质上的“捕捉”抗体来捕捉目标抗原,经洗涤除去未结合的成分,加入第二种酶标抗体,此者结合在捕捉到的抗原的不同位点上,第二次洗涤后加入酶作用基质,并令其与颜色成分反应,然后用分光光度法即很容易检测到目标抗原。
采用微量滴定板作为固态基质使反应形式标准化,并促成其自动化。
黎兆滚等人首次在国内口岸系统应用微量板ELISA法(Salmonelletest1)对进出口动物产品(鱼粉、肉骨粉等)进行沙门氏菌检测。
该法采用预先包被了沙门氏菌(A-E群)单克隆抗体的微量板,加入经增菌处理的样品,反应后再加入一定的指示剂,作用毕后用酶标仪测定OD值来判定结果。
食物样品经适当的增菌处理,也可用此法进行沙门氏菌检测。
ELISA法检出沙门氏菌的极限范围在105~106个细胞/ml,因此,要得出可靠的结果,食物样品首先必需进行预增菌、选择性增菌,通常还要在含有D-甘露糖的肉汤(M肉汤)中进行后增菌,以促进鞭毛发育。
总的来说,标准的ELISA法样品的制备,约需要经过40~48h的孵育才能完成。
黎兆滚等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)样品制备过程分三步,共耗时24h:①选用营养肉汤进行预增菌(6h),使“致伤”、冷冻的沙门氏菌复苏。
②使用选择性培养基RV进行增菌(14h),使沙门氏菌大量繁殖,同时抑制其它杂菌生长。
③使用营养肉汤(蛋白胨水)进行后增菌(4h),使沙门氏菌的数量大大增加。
比上述标准的ELISA法样品制备过程缩短了一半的时间。
ELISA方法本身,则仅需要大约2h而已(其中30min是操作时间,90min是孵育时间)。
相比之下,黎兆滚等人的方法可在27h内完成,比上述方法缩短了一半的时间,颇值得推广应用。
最新式的沙门氏菌免疫学检测法,利用经特异性抗体敏化的免疫色谱卡片为基础。
几滴样品加到卡片上,结果可以直接用肉眼读出。
免疫色谱卡片极易操作,且由于无需要特殊设备,很适合小型实验室使用。
尽管卡片检测法与ELISA法一样需要对样品进行增菌处理,但它(卡片法)本身通常需时不超过10min,如果采用黎兆滚等人的样品制备法,则可使操作时间更为缩短。
核酸法
细胞核酸DNA和RNA是唯一一类可以携带信息的大分子。
由于所有的细胞都含有这种分子,可以利用它作为检测的标靶。
标靶通常是一个特异性核酸序列,它可通过以补体核酸分子作为探针来检出。
与免疫学方法相似,探针也需要加附适当的标记,如放射性同位素、酶或发光的标识物。
Fitts等人在食品沙门氏菌检测中引入了第一代DNA—RNA杂交技术,此法应用的探针含有用放射性同位素标记的伤寒沙门氏菌DNA片段,其敏感性高,经大约48h的增菌步骤后,检测极限可达108个细菌/ml,但由于要使用放射性同位素,只能在专门的实验室应用,此方法的优点都被抵消了。
为此,以核酸杂交为基础的第二代技术—比色计已发展起来。
这种方法依赖于沙门氏菌核糖体RNA(rRNA)—核糖体发育过程中储存的核酸成分的检测。
核糖体是细胞蛋白质合成器的一部分,每个细菌细胞中存在5000~20000个复制体,而相比之下染色体DNA复制体仅2~10个。
这种天然富含rRNA 标靶序列的情况使得用无辐射计检测成为可能,同时又保持了与放射性同位素方法相当或更高的敏感性。
其另一
优点是由于rRNA为单链(而DNA为双链),杂交前无需经过变性步骤。
要得到阳性结果,此法需要105个靶细胞/ml,因此对沙门氏菌检测来说,需要进行预增菌和选择性增菌,总共约50h。
rRNA探针法比沙门氏菌ELISA 法(酶联免疫检测法)更耗时,但二者成本相近。
食品细菌检测法的最新进展是在化学扩增体系方面的发展,即聚合酶链反应(PCR),用该体系可对制备好的样品进行细菌DNA扩增,以便更易于用诸如凝胶电泳法或比色型ELISA法检测。
用于检测沙门氏菌和其它以食物为载体的病原的PCR方法业已建立,其中一些方法显示了极好的敏感性。
但该法较难自动化,且必需经选择性增菌以稀释可能干扰检测反应的某些成分。
一个完整的以PCR 为基础的方法,需要2天才能完成,很大程度上抵销了其高敏感性的优点,但这种方法对那些含沙门氏菌较少或沙门氏菌“致伤”严重难以复苏而仍保有沙门氏菌rRNA的样品尤其有效。