病理组织学诊断检材的制备技术
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组织病理切片制作流程(完整版)组织病理切片是一种常规病理学检查方法,用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。
制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。
组织标本采集组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。
组织标本的质量直接影响到切片的质量。
因此,采集前需要确保标本来源正确,并与患者信息相符。
对于手术标本,需要注意保护血管、神经、肌肉等结构,避免对组织结构造成不必要的损害。
对于活检标本,需要选择有代表性的组织,避免损伤重要结构和血管。
组织处理组织标本采集后,需要进行组织处理。
对于手术标本,可以直接收取。
对于活检标本,需要迅速固定,避免组织发生变性和坏死。
常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等,选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。
样本包裹固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。
包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料,包裹材料必须能够完全包裹组织标本,并保证固定。
切片制备组织标本包裹后,需要进行切片制备。
切片机是用于切割病理标本的设备,其切割面的厚度一般在4-6μm之间。
在切片制备中,需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。
切片后,标本必须尽快贴在玻片上进行染色。
组织染色组织染色是组织病理学检测的重要环节。
目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。
苏木素-伊红染色是一种常规染色方法,可以显示出组织的基本结构和染色体。
免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。
组织标签和包装染色后的组织切片需要进行标签和包装。
标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。
组织切片还需要包装防止刮损和振动。
结果解释组织病理切片制备完成后,需要进行结果解释。
结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行,一般是通过显微镜进行观察和诊断。
有时候,还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。
总结组织病理切片制备流程需要严格按照一定的步骤来进行,包括组织标本采集、组织处理、样本包裹、切片制备、组织染色、组织标签和包装以及结果解释。
病理切片制备
病理切片的制备主要包括以下步骤:
1. 取材:取材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅速固定,以保证原有的形态学结构。
2. 固定:固定分为小块组织固定法、注射灌注固定法、蒸汽固定法。
3. 脱水:用梯度酒精将组织块内的水分置换出来,可以用脱水机自动完成。
4. 包埋和切片:脱水以后进入石蜡包埋,石蜡凝固后,组织就被包在其中,制成蜡块。
然后将蜡块放在切片机上切成4-6微米薄片展开放在玻片上。
5. 染色封固:石蜡切片要经过苏木素-伊红染色,最后切片封固。
此外,在制片过程中,需要注意规范取材部位,准确地按解剖部位取材;选好组织块的切面,根据各器官的组织结构,决定其切面的走向;规范取材使用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动;夹取组织时切勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形;选好组织块的切面;规范取材使用的刀剪要锋利等。
以上信息仅供参考,具体步骤和注意事项可能根据不同的制作设备和材料有所差异。
如需了解更多信息,建议咨询病理科医生或查阅专业书籍。
病理组织学检测收集检测病料,各种典型病变的组织器官,用10%福尔马林溶液固定,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察。
具体操作步骤如下:(1)取材:选择刚死的新鲜的组织;采取样品的时候要注意,将动物剖检之后,要尽快的的采取相关组织的材料;采样的刀片一定要锋利,切取组织块时避免前后过度的拉动或用力挤压,以防止造成组织结构变形或人为损伤。
(2)固定:将采集好组织样品固定于10%的中性福尔马林溶液中,过夜固定或者至少固定24h。
(市场技术人员只需采集病料,并用10%的中性福尔马林固定后,室温存放,直接送检。
注:用封闭好的瓶子存放样品,防止福尔马林外流。
)(3)组织修块及水冲:将福尔马林溶液固定好的组织进行修整,选好病变部位组织的切面,尽量修的薄一些,将修整好的组织块放在流动的自来水下冲洗10-16h,以便去掉组织中的甲醛。
(4)脱水:将修好的组织块依次放入70%、80%、85%、90%、95%以及100%(一和二)梯度酒精中进行脱水处理。
脱水的具体程序及时间为:70%酒精2h→80%酒精2h→85%酒精2h→90%酒精1h→95%酒精30min→无水乙醇(100%)I 45min→无水乙醇(100%)II 45min。
(5)透明及浸蜡:组织块完全脱水后,将其分别浸入二甲苯中进行透明,具体透明时间因组织块厚薄而异。
将透明好的组织块,放在55℃左右的恒温箱中,进行浸蜡2-4h。
(6)包埋:将70℃融过的石蜡倒入铁制的包埋框内,整齐的摆放组织块,一段时间后再进行修切。
(7)切片:先将切片机调至3mm厚度,开始切片。
(8)展片及粘片:将切好的组织片取下放到40℃的温水中,利用酒精将之展开。
(9)烤片:将捞出的组织切片放于37℃培养箱中烤片2h或者过夜。
(10)HE染色:按照下面的时间及顺序进行。
首先二甲苯Ⅰ15min→二甲苯Ⅱ10-15min→酒精/二甲苯3-5min→无水乙醇3-5min→95%酒精3-5min→85%酒精3-5min→75%酒精3-5min→蒸馏水4-6min→苏木素染色液3-5min→自来水冲洗约1min→1%盐酸酒精4~5s→流动的自来水冲洗10-15min→90%酒精2-4s →1%伊红染色液3-6s→95%酒精Ⅰ3s→95%酒精Ⅱ1-2min→无水乙醇Ⅰ2-4min→无水乙醇Ⅱ5min→二甲苯Ⅰ20-30min。
------------------------------------------ 最新资料推荐------------------------------------病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法,冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表,切片的基本制作过程是:组织取材固定冲洗脱水透明浸蜡组织包埋组织切片展片附贴切片脱蜡染色脱水染片透明封固。
以上基本过程是互相联系的,任何一环节出现问题,都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责,并事先做好计划安排。
一、取材采取病料,要刀剪锐利,剪切时不可挤压,扯拉病料,以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好,一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取,切取时要由表及里,有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状,囊状和皮肤组织应注意垂直切取(横切)。
带有薄膜的组织,要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小,以1.51.50.3厘米为宜,最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑,另一面可不平整,以便包埋时辨认。
切取后,放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中,并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死,使细胞中的蛋白质,糖,脂肪等凝固,从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后,应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时,固定液渗入组织液的深度只达2至IJ 3厘米。
因此,可以放置冰箱内固定,使组织内酶失去作用,细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液:使用时,用40%的甲醛饱和水溶液10毫升,加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块,应将固定液洗去。
一般均用流水(自来水)冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用,防止固定过度,有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗,也可用较大容器盛装水浸洗,每隔相当时间换水一次。
组织病理切片制备流程组织病理切片制备流程是临床病理诊断的基础。
下面将详细介绍组织病理切片制备流程。
1. 采集组织样本首先需要采集病人的组织样本。
组织样本可以来自手术标本、活检标本或尸检标本等来源。
在采集样本时,需要严格遵守无菌操作的原则,以避免样本受到外部污染。
2. 固定组织样本采集的组织样本需进行一定的处理,以保持其组织结构和形态不变。
常用的固定剂有福尔马林、甲醛、丙酮等。
其中福尔马林是最常用的固定剂,能够快速稳定组织,但是对人体危害较大,需要注意安全操作。
3. 制备组织样本固定后的组织样本需要进行切片处理。
首先,需要将组织样本浸泡在甲醛液中,并使用匀浆器进行均匀处理。
接着,将固定后的样本打蜡,然后使用切片机将样本切成薄片。
在切片的过程中,需要注意操作方法,以保持切片的质量。
4. 染色处理切片后需要进行染色处理,使细胞结构更加清晰明了。
常用的染色方法有血液学染色、肿瘤学染色、免疫组化染色等。
其中,免疫组化染色方法能够更明确地确定病理诊断。
5. 镜检染色后的切片需要进行镜检。
首先,需要将切片放在显微镜下观察,并进行病理学分析。
医生需要根据组织的形态、排列方式和染色效果等来进行分析和诊断。
6. 诊断报告根据镜检结果,医生需要撰写诊断报告。
诊断报告应准确地描述组织病变的程度、性质和位置等信息,并建议相应的治疗方案。
通过上述组织病理切片制备流程的介绍,可以看出,组织病理切片制备是一项复杂而严谨的工作。
医生和技术人员需要严格遵守操作规程,从而确保切片质量和诊断准确性。
组织病理切片制备
组织病理切片的制作,首先医生取下组织病理标本,放在10%的中性福尔马林里进行固定,固定完之后标本送到病理科。
小标本需要固定4-6个小时,大标本需要固定6-12个小时,固定完之后由病理医生进行取材。
所谓的取材指把标本取出放在标本盒里,置于全自动脱水机中脱水16个小时处理标本。
处理过程包括组织进行固定、透明、脱水、浸蜡,处理完16个小时之后,病理技师把标本拿到包埋机上进行包埋,把病变组织放在蜡里,包埋成病理蜡块。
蜡块包埋完之后,病理技师把蜡块放在切片机上进行切片,切片大约需要切3-4μm的切片。
切完片子需要捞在病理玻片上,玻片再进行脱蜡,放在二甲苯中需要透明,之后放在全自动染色机中进行染色,再放在封片机里进行封片,这样才能制成病理切片,这个过程一般需要2-3天的时间。
可吸收医疗器械植入后组织病理学样本制备与评价方法医疗器械的植入术是一种常见的治疗方法,然而,在植入后的组织病理学研究中,需要对植入物进行制备和评价。
本文将介绍可吸收医疗器械植入后组织病理学样本的制备方法和评价方法。
在制备可吸收医疗器械植入后的组织病理学样本时,首先需要获取植入部位的组织。
可以通过切取组织标本或者使用穿刺针进行组织采集。
然后,将组织标本置于甲醛中固定,常规的组织学处理步骤包括脱水、清洗和包埋。
脱水是将组织样本从水溶液中逐渐置换为亲脂性的清洗剂,然后经过组织包埋以蜡或树脂,最后切片制备。
在制备可吸收医疗器械植入后的组织病理学样本时,需要注意以下几点。
首先,保证组织标本的完整性,如果组织标本太小或者不完整,可能会影响到结果的准确性。
其次,避免组织标本受到细菌或其他污染物的污染,对于可吸收医疗器械植入后的组织标本,可能存在异物反应或感染等问题,因此需要做好组织标本的消毒处理。
在评价可吸收医疗器械植入后的组织病理学样本时,可以从多个方面进行评价。
首先,观察组织病理学的基本形态学变化,包括组织结构的改变、细胞变性、坏死和炎症反应等。
其次,通过免疫组化染色来评价细胞增生和神经元损伤等。
最后,可以进行分子生物学研究,包括检测特定基因的表达和蛋白质的变化等。
在评价可吸收医疗器械植入后的组织病理学样本时,需要考虑以下几个因素。
首先,要注意组织病理学的变化是否和可吸收医疗器械的特性相符,例如,可吸收医疗器械是否会引起炎症反应或组织损伤等。
其次,可以和正常组织进行对比,通过比较组织病理学变化的差异来评价可吸收医疗器械对组织的影响。
最后,应该进行定量的评价,通过计算相关指标的数值来客观评估可吸收医疗器械的效果。
综上所述,可吸收医疗器械植入后的组织病理学样本的制备和评价方法是一个重要的研究领域。
通过适当的标本制备和评价方法,可以更好地了解可吸收医疗器械对组织的影响,为临床治疗提供更好的参考依据。
《临床技术操作规范_病理学分册》医院用第1章总则一、为提升病理学诊断质量,促进临床工作,依据《中华人民共和国执业医师法》精神,结合医院病理科工作的特点,制定本规范。
二、医院病理科和承担医院病理科任务的医学院校病理教研室的要紧临床任务是通过活体组织病理学检查(简称活检)、细胞病理学检查(简称细胞学检查)和尸体剖检(简称尸检)等作出疾病的病理学诊断(或称病理诊断)。
具有一定规模的病理科,应主动开展教学、培训病理医师和科学研究等项工作。
三、病理学诊断是病理医师应用病理学知识、有关技术和个人专业实践体会,对送检的患者标本(或称检材,包括活体组织、细胞和尸体等)进行病理学检查,结合有关临床资料,通过分析、综合后,作出的关于该标本病理变化性质的判定和具体疾病的诊断。
病理学诊断为临床医师确定疾病诊断、制定治疗方案、评估疾病预后和总结诊治疾病体会等提供重要的、有时是决定性的依据,并在疾病预防,专门是传染病预防中发挥重要作用。
四、病理学诊断报告书(或称病理诊断报告)是关于疾病诊断的重要医学文书。
当涉及医、患间医疗争议时,有关的病理学诊断报告书具有法律意义。
病理学诊断报告书应由具有执业资格的注册主治医师以上(含主治医师)的病理医师签发。
各医院可酌情准予条件适宜的高年资病理科住院医师试行签署病理学诊断报告书。
低年资病理科住院医师、病理科进修医师和非病理学专业的医师不得签署病理学诊断报告书。
五、病理学检查是临床医师与病理医师为确立疾病诊断而进行的合作行为,是有关临床科室与病理科之间专门形式的会诊。
临床医师和病理医师双方皆应认真履行各自的义务和承担相应的责任。
六、病理学检查申请单是临床医师向病理医师发出的会诊邀请单。
病理学检查申请单的作用是:临床医师向病理医师传递关于患者的要紧临床信息(包括症状、体征、各种辅助检查结果和手术所见等)、诊断意向和就具体病例对病理学检查提出的某些专门要求,为进行病理学检查和病理学诊断提供重要的参考资料或依据。
精良病理切片的制作方法标签:病理組织;切片标本;切片制作;方法组织病理学检查是临床进行病情确诊的重要手段之一,然而检查结果的真实性受到诸多因素的影响,其中病理切片技术是中重要的影响因素之一。
病理切片技术属于包括多方面的步骤,例如:固定、切片、染色、封片等,以上基本过程都是相互联系的,任何一个环节出现问题,都将使整个制片失败。
因此应细致、耐心、认真、负责的操作每一个环节,使片子质量达到最佳。
1 固定和取材1.1 固定:固定是病理切片的重要步骤,主要是通过对组织病理行固定处理,促使细胞内的糖分、蛋白质等处于凝固状态,从而保证组织内的细胞处于稳定的状态,由此可见,病理切片的质量直接影响着预后检查的质量。
临床研究表明,若组织切片固定不达标,可能导致其内部细胞出现破坏的现象,进行后期分析期间,很容易出现误诊的现象。
因此,从人体中取下病理组织后,应在短时间内将其固定,固定液量应为病理组织块的5倍。
可以放置冰箱内固定使组织内酶失去作用,细菌也能停止滋生。
取病理组织标本期间,必须保证其质量,即根据患者的临床疾病、病变位置等决定取材的大小,该方式一定程度上能够提高切片的固定质量。
1.2 脱水:脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其它溶剂置换出来,脱水的质量受到多方面因素的影响,例如:脱水的时间、脱水后处理情况、脱水试剂的质量等,这些因素均可能导致切片在脱水期间出现损坏的现象,一定程度上会其后期染色的质量造成影响。
脱水必须充分,否则会给浸蜡造成困难,脱水应该从低浓度逐渐到高浓度,蜡块中央出现凹陷,若脱水时较差,则可能造成组织内的水分含量过低,从而会增加组织的脆性。
造成切片时出现邹褶,不易展开。
故应及时固定组织,更换试剂,掌握好脱水时间,做到彻底脱水,控制组织浸蜡温度。
1.3 透明:该程序主要是在矿物油的辅助下,将组织内蕴含的酒精予以置换,从而提高切片组织对石蜡的敏感度。
一般情况下,切片透明时间≤30分钟,若组织长时间留置与透明剂中,可能使其出现收缩过度的现象,造成其出现透明度不达标的现象。
法医病理学检材的提取、固定、包装、送检方法【1996-7-25批准】说明本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。
本标准由河南省公安厅刑科所、河南医科大学起草。
本标准起草人:高金才、王乃斌、李力宏、闫红涛、李家陶。
1 范围本标准规定了法医病理学检验检材的剖验提取、固定、固定液选择及配制以及检材的包装、送检的方法和步骤。
本标准适用于各级公、检、法、司及院校系统进行司法解剖的病理学检验。
2 总则在法医病理学组织细胞检验、组织化学检验、免疫荧光及超微结构等项检验中,检材的提取、固定、送检正确与否,直接关系到鉴定结论的准确性和正确性。
本标准的制定是为了法医病理学检材的提取、固定、送检有一个统一的方法及步骤,为今后复核和法医病理学的发展及国际交流奠定基础。
3 法医病理学检材的提取要求、方法和步骤3.1 法医病理检材提取前要求详细了解记录:死者姓名、性别、年龄、民族、住址、工作单位、职业、生前健康状况、详细案情及死亡过程和症状,提取住院病历或门诊治疗情况和详细的现场勘验情况。
3.2 为了保证法医病理检验鉴定结论的准确性,要求:组织细胞学检验鉴定检材的提取应在死亡后48h内进行,特殊情况下冬季不超过72h,春秋季不超过48h,夏季不超过24h。
存放在冷箱内的尸体不超过72h,冰柜内保存结冰的尸体96h,最长时间不过一周。
免疫组织化学、电镜等项检验鉴定检材的提取应在12~24h以内进行。
3.3 剖验时要详细检查、记录拍照尸表损伤病变和剖验脏器的表面、切面的损伤和病变,记录损伤和病变的部位、数量、形态、大小、范围、色泽、硬度等情况(大小以厘米表示)。
脏器剖验检查的原则是:实质性脏器主要注意检查表面和切面损伤和病变;空腔性脏器主要注意检查浆膜和粘膜有无损伤和病变、管壁有无增厚及狭窄等。
3.4 尸表损伤和病变检材提取的方法和要求3.4.1 颈部损伤检材提取的方法:经详细的检验记录拍照后“T”字形切开胸腹腔,按照尸体解剖规定的方法开颅。
法医学在法医学临床病理学中的病理标本切片制作与病变分析病理标本切片制作是法医学临床病理学中至关重要的环节。
通过对病理标本的制作与病变分析,可以帮助法医学家准确判断死因和疾病类型,为司法调查和法律诉讼提供科学依据。
一、病理标本切片制作病理标本切片制作是将新鲜组织固定、脱水、包埋、切片、染色等一系列工艺处理,以获取清晰的组织切片。
病理标本切片制作的过程中,需要严格操作,确保标本完整且不变形。
下面将详细介绍病理标本切片制作的步骤:1. 新鲜组织固定:法医学家通常会对尸体进行解剖,提取有关疾病和死因的组织标本。
这些组织标本需要在尽可能短的时间内进行固定,以避免组织的腐败和破坏。
2. 组织脱水:固定后的组织需要经过一系列酒精梯度脱水处理,以去除其中的水分并增加稳定性。
3. 组织包埋:脱水后的组织标本需要嵌入石蜡中进行包埋,以增强切片的硬度和稳定性。
4. 组织切片:包埋后的组织标本通过旋转切片机进行切片,切得薄且均匀,通常为3-5微米。
5. 组织染色:切片后的组织需要通过染色技术,如血液学染色或组织学染色,使细胞和组织结构更为清晰可见。
二、病变分析病变分析是通过观察和研究组织切片中的异常变化,帮助法医学家诊断疾病或确定死因。
下面将介绍病变分析的一些常见方法:1. 组织学观察:通过显微镜观察组织切片中细胞和组织结构的异常变化,如细胞增生、坏死、炎症等,以判断是否存在疾病。
2. 免疫组化染色:利用特定的抗体标记,可以在组织切片中检测特定蛋白的表达情况,以帮助确定病变性质和类型。
3. 分子生物学分析:通过提取组织切片中的核酸或蛋白质,进行PCR、DNA测序、免疫印迹等技术,以检测基因突变和表达水平,进一步揭示疾病的发病机制。
4. 影像学分析:将组织切片放入显微镜下进行摄影或数字化扫描,通过计算机软件进行图像分析,帮助法医学家量化病变程度和区域分布。
通过病理标本切片制作与病变分析,法医学家可以获得大量的病理信息,为法律诉讼和司法调查提供科学依据。
组织病理切片制作步骤
本文档将介绍组织病理切片制作的完整步骤。
1. 标本收集和处理
1.1 收集患者的组织标本,并确保其完整性和准确标记。
1.2 将组织标本置于合适的中,用适当的缓冲液或固定剂进行
处理,以保持其形态结构并防止腐败。
2. 标本处理和包埋
2.1 用合适的方法将标本固定在组织处理机中,例如将其浸泡
在缓冲液中或使用组织处理机进行自动处理。
2.2 将处理后的标本转移到合适的包埋中,通常使用蜡或树脂
作为包埋材料。
3. 切片制作
3.1 使用专业的旋转切片机将包埋的组织标本切割成薄片,通
常为4-5微米。
3.2 切割后的切片应浸泡在水中,以去除任何残留的包埋材料。
3.3 将切片转移到玻片上,并确保它们平整地展开。
4. 染色
4.1 选择适当的染色方法,如常规组织染色法(H&E染色),以突出组织的形态结构。
4.2 将切片浸泡在染色液中,按照染色方法的要求进行染色处理。
4.3 染色后,通过洗涤和脱水步骤去除多余的染色剂。
5. 盖片和封口
5.1 在切片干燥后,将一小滴透明胶液滴在切片上。
5.2 轻轻放置盖片在切片上,确保无气泡和皱纹。
5.3 用封口剂封住盖片和玻片的边缘,以保护切片并防止其损坏。
6. 观察和存储
6.1 使用显微镜观察切片,检查组织的结构和病理变化。
6.2 将切片存储在干燥、阴凉和避光的地方,以确保其长期保存和保持质量。
以上是组织病理切片制作的完整步骤。
每个步骤都需要仔细操作和适当的设备来确保切片的质量和准确性。
病理切片制备流程总结病理切片是病理诊断中非常重要的一环,它能够帮助病理医生在显微镜下观察组织细胞的形态结构,从而对疾病做出准确的诊断。
下面将详细介绍病理切片的制备流程。
一、取材取材是病理切片制备的第一步,也是至关重要的一步。
在取材时,需要根据送检标本的情况和诊断的需要,选择具有代表性的病变部位。
对于手术切除的标本,要观察其大体形态,测量大小、颜色、质地等,并做好记录。
然后,使用锋利的刀具,切取适当大小的组织块,通常为 15cm×15cm×03cm 左右。
取材时要注意避免挤压、牵拉组织,以免造成人为的损伤和变形。
对于小活检标本,如胃镜、肠镜活检组织,要小心地用镊子将其取出,放在滤纸上吸干水分。
如果是穿刺组织,要将穿刺针内的组织推出,放入固定液中。
二、固定固定的目的是保持组织细胞的形态结构,防止其自溶和腐败。
常用的固定液有甲醛溶液(福尔马林)、乙醇等。
将取材后的组织块迅速放入固定液中,固定液的量一般应为组织体积的 10 倍以上。
固定的时间根据组织的大小和类型而定,一般为 6 24 小时。
在固定过程中,固定液要充分渗透到组织内部,以确保固定效果。
固定后的组织质地变硬,颜色变深,便于后续的处理。
三、脱水脱水是为了去除组织中的水分,以便后续的透明和浸蜡。
将固定好的组织依次放入浓度逐渐升高的乙醇溶液中进行脱水,通常从 70%乙醇开始,依次经过 80%、90%、95%乙醇,最后用无水乙醇。
每个浓度的乙醇浸泡时间一般为 1 2 小时。
脱水完成后,将组织放入二甲苯中进行透明处理,使组织变得透明,便于浸蜡。
透明时间一般为 30 分钟左右。
四、浸蜡浸蜡是将透明后的组织放入熔化的石蜡中,使石蜡渗透到组织内部,以支持和保护组织。
浸蜡通常在恒温箱中进行,温度一般控制在 58 60℃。
先将组织放入低熔点的石蜡中浸泡 1 2 小时,然后再放入高熔点的石蜡中浸泡 1 2 小时。
浸蜡完成后,将组织取出,放入预先准备好的模具中,迅速倒入熔化的石蜡,使其凝固成蜡块。
病理组织学诊断检材的制备技术一、组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本(器官或组织),于离体(活体或尸体)后,应尽快置放(浸泡)于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定,应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后,应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛(10%中性福尔马林),应预先多量配制贮存,以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时,大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等)的需要,应选用其他适宜的固定液进行固定[参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”]。
㈣器官、组织固定的基本方法1.食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官:依规范方法剪开后,按其自然状态平铺于硬纸板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处),并用大头针将标本边缘处固定于纸板上,然后放入4%中性甲醛中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面,并覆盖薄层脱脂棉)。
2.肝、脾:由器官背面,沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开,切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中,容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3.肺叶:放入固定液中的肺叶漂浮于液面,需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4.肾:沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面(深达于肾盏),再行固定。
5.淋巴结:先用4%中性甲醛固定1小时后,再沿其长轴切成数片(厚 2 ~3mm),继续固定。
6.骨组织:先锯成小片(若是长骨应作横向锯片),在4%中性甲醛中固定24小时后,再进行脱钙。
7.微小组织或液体沉淀物:先用拭纸或滤纸妥为包裹(需用大头针扎牢),然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定,以防检材遗失。
8.凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号(病理号)。
㈤多数固定液对人体有害,需要防护,必须在封闭的通风条件下进行操作。
㈥组织块的切取和固定:①由较大标本切取用于制作切片的组织块(取材)时,应与标本的断面平行,组织块厚度一般为0.3 cm(不应>0.5cm),面积一般在1~1.5×1~1.5以内。
②切取组织块的形状,在充分包括肉眼病变的前提下尽量规则些(例如方形、矩形、三角形等);由一个标本切取的多块组织的形状有所不同,便于蜡块与其相应切片的核对。
③固定组织块的固定液量,一般应为组织块总体积的5~10倍以上。
④室内常温(25℃左右)下的固定时间为3~24小时;低温(4℃)下的固定时间应延长。
⑤固定组织块的容器要大一些。
⑥组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。
㈦常用固定液1.4%中性甲醛(10%中性福尔马林)固定液甲醛(40%) 100 ml无水磷酸氢二钠 6.5g磷酸二氢钠 4.0g蒸馏水 900ml2.乙醇-甲醛(酒精-福尔马林,AF)固定液甲醛(40%) 100ml95%乙醇 900ml[说明]一般组织块经乙醇-甲醛固定1~2小时后,即可移入95%乙醇内脱水。
3.Carnoy固定液无水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml[说明]组织化学染色的常用固定液,组织经Carnoy液固定1~2小时后,即可移入无水乙醇中脱水。
4.Zenker固定液升汞 5.0g重铬酸钾 2.5g硫酸钠 1.0g蒸馏水(加至) 100ml[说明]配制本液时,先将升汞溶于蒸馏水中、加温至40~50℃溶解后,再加入重铬酸钾,最后加入硫酸钠,贮存待用。
使用前加入5ml冰醋酸,混合。
组织块需固定12~24小时。
切片染色前,需进行脱汞沉淀处理。
5.Bouin固定液饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75ml甲醛(40%) 25ml冰醋酸 5ml[说明]本液临用时配制。
组织块置于Bouin液固定12~24小时即可(小块组织只需固定数小时)。
经Bouin液固定的组织被苦味酸染成黄色,可用水洗涤12小时后进入乙醇脱水(兼脱色)。
不必将组织中的黄色除净(残存于组织中的苦味酸无碍染色)6.过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液(PLP)A液:赖氨酸 1.827g蒸馏水 50ml0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4) 50mlB液:8%多聚甲醛水溶液 100ml[说明]本液临用时配制:取A液3份、B液1份,混合后,加入过碘酸钠,使液体终浓度为2%。
组织块在4℃下固定36~54小时。
本液对细胞结构和抗原性保存较好。
7.B5(醋酸钠-升汞-甲醛)固定液无水醋酸钠 1.25g升汞 6.0g蒸馏水 90ml[说明]将以上物质混合、溶解,使用前加入甲醛10ml。
本液多用于固定淋巴组织。
染色前应进行脱汞沉淀处理。
如不加甲醛称为B4固定液(蒸馏水为100 ml)。
8.丙酮固定液冷丙酮(4℃)固定液用于酶组织化学染色。
细胞标本的免疫组化染色也常用冷丙酮固定10分钟。
二、常规石蜡包埋组织切片(常规切片)的制备㈠组织块依序进行:①水洗,②脱水,③透明,④浸蜡,⑤包埋和⑥切片。
㈡组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物,必须专人管理,2m以内不得有明火,局部环境应有良好的通风和消防设施。
㈢常规切片的手工操作(步骤次序和各步骤的持续时间)1.水洗:用流水冲洗已经固定的组织块30min。
2.脱水(常温下)(1)乙醇-甲醛(AF)液固定 60~120min(2)80%乙醇 60~120min(3)95%乙醇Ⅰ 60~120min(4)95%乙醇Ⅱ 60~120min(5)无水乙醇Ⅰ 60~120min(6)无水乙醇Ⅱ 60~120min(7)无水乙醇Ⅲ 60min[注意事项]①未经充分固定的组织不得进入脱水程序。
②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5~10倍以上。
③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。
④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个组织块脱水;加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时,提示需要更换)。
⑤较大组织块的脱水时间长于较小者,应将两者分开进行脱水。
⑥组织置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)。
⑦丙酮脱水性能强,会使组织块过缩、硬脆,不宜用以替代无水乙醇。
3.透明(1)二甲苯Ⅰ 20min(2)二甲苯Ⅱ 20min(3)二甲苯Ⅲ 20min[注意事项]①二甲苯的容积应为组织块总体积的5~10倍以上。
②组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长(以防组织硬、脆),并依不同种类组织及其大小而异;组织呈现棕黄或暗红色透明即可。
③二甲苯应及时过滤、更换。
④组织经二甲苯适度处理后不显透明时,常提示该组织的固定或脱水不充分,应查找原因并妥善处理。
4.浸蜡(1)石蜡Ⅰ(45~50℃) 60min(2)石蜡Ⅱ(56~58℃) 60min(3)石蜡Ⅲ(56~58℃) 60min[注意事项]①熔化石蜡必须有专人负责,必须在熔蜡箱内或水浴中(70 ℃)进行,不得用明火加温。
②熔蜡的容积应为组织块总体积的5~10倍以上。
③组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程,应尽可能减少将透明后组织块表面的二甲苯带入熔蜡中。
④浸蜡时间适宜,过短时浸蜡不充分(组织过软),过长时组织硬脆。
⑤熔蜡应及时过滤、更换。
5.包埋(1)先将熔化的石蜡倾入包埋模具中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块,使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向下埋入熔蜡中;应将组织块平正地置放于包埋模具底面的中央处;包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上;腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋(立埋)。
(2)将与组织块相关的病理号小条置入包埋模具内熔蜡的一侧。
(3)待包埋模具内的熔蜡表面凝固后,即将模具移入冷水中加速凝固。
(4)从包埋模具中取出凝固的包埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除组织块周围的过多石蜡(组织块周围保留1~2mm石蜡为宜)。
将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。
(5)将病理号小条牢固地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。
(6)把修整好的蜡块烙贴在支持器上,以备切片。
(7)使用包埋机的方法按有关厂商的说明书操作。
(8)注意事项①应将组织块严格分件包埋。
包埋时一定要首先认真核对组织块的病理号(包括亚号)、块数和取材医师对包埋面的要求,准确地包入相应的病理号小条。
发生包埋差错时,必须立即与取材医师和病理科当班负责人取得联系,及时处置。
②必须严防各种异物污染,勿将无关组织(包括缝线、纸屑或其他异物(尤其是硬质异物)埋入蜡块内。
③包埋过程要操作迅速,以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。
④包埋用的熔蜡应纯净,熔点适宜。
浸蜡Ⅰ用软蜡(熔点为45~50℃),浸蜡Ⅱ、Ⅲ和包埋用蜡均用硬蜡(熔点为56~58℃)。
⑤包埋用熔蜡使用前应将先静置沉淀、过滤。
⑥熔蜡时不得使用明火,以防燃烧。
包埋用熔蜡的温度应<65℃;包埋用的镊子不可加温过高,以免烫伤组织。
6.切片(1)切片刀或一次性切片刀片必须锋利。
使用切片刀时,必须精心磨备(在低倍显微镜下确认刀刃无缺口);使用一次性切片刀片时,应及时更新。
(2)载玻片必须洁净、光亮。
(3)将切片刀或刀片安装在持刀座上(以15°为宜)。
(4)将蜡块固定于持支持器上,并调整蜡块和刀刃至适当位置(刀刃与蜡块表面呈5°夹角)。
(5)细心移动刀座或蜡块支持器,使蜡块与刀刃接触,旋紧刀座和蜡块支持器。
(6)修块(粗切):用右手匀速旋转切片机轮,修切蜡块表面至包埋其中的组织块完整地全部切到。
修块粗切片的厚度为15~20μm。
[注意:对于医嘱再次深切片(特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片),应尽量少修块,以尽量好地获得有关病变的连续性。
](7)调节切片厚度调节器(一般为4~6μm),进行切片,切出的蜡片应连续成带,完整无缺,厚度适宜(3~5μm)、均匀,无刀痕、颤痕、皱折、开裂、缺损、松解等。
(8)以专用小镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀的蜡片,放入伸展器的温水中(45℃左右),使切片全面展开。
[注意:必须水温适宜、洁净(尤其是水面);每切完一个蜡块后,必须认真清理水面,不得遗留其它病例的组织碎片,以免污染。
](9)将蜡片附贴于涂有蛋白甘油或经3-氨丙基-三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxy silane,APES)处理过的载玻片上(HE染色时酌情使用,可省略,必要时)。
蜡片应置放在载玻片右(或左)2/3处的中央,留出载玻片左(或右)1/3的位置用于贴附标签。
蜡片与载玻片之间无气泡。
(10)必须立即在置放了蜡片的载玻片一端(待贴标签的一端),用优质记号笔或刻号笔准确、清楚标记其相应的病理号(包括亚号)。