标准蛋白质溶液(BSA,100mgml)

bsa标准溶液
BSA标准溶液是一种浓度已知的蛋白质溶液，常用于实验室中蛋白质浓度的标定、校准和比较分析。

BSA是指牛血清白蛋白，是一种常见的蛋白质，其分子量为约66,000道尔顿，具有良好的稳定性和可溶性。

制备BSA标准溶液的方法很简单，一般是将已知浓度的BSA 溶解在适当的缓冲液中，经过混合、搅拌、过滤等步骤制成。

使用BSA标准溶液时，可以通过光度计测量其吸光度值，进而计算出蛋白质的浓度。

需要注意的是，不同的标准溶液可能存在差异，因此在实验中应选择适合自己研究对象的BSA标准溶液。

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北京雷根生物技术有限公司
标准蛋白质溶液(BSA,100mg/ml)
简介：
标准蛋白质溶液(BSA,100mg/ml)是用于BCA 法蛋白定量试剂盒和Bradford 法蛋白定量试剂盒的试剂，亦可作为其它方法进行蛋白浓度测定时的蛋白标准。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。

2、 一般应做多个稀释度，以便做出标准曲线。

注意事项：
1、 避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：
编号 名称 OR0119 Storage 标准蛋白质溶液(BSA,100mg/ml) 1ml -20℃ 使用说明书 1份 编号 名称
PT0001 BCA 法蛋白定量试剂盒
PT0002 Bradford 法蛋白定量试剂盒
PT0004
双缩脲法蛋白定量试剂盒 OR0002
pH 标准缓冲溶液(pH=6.86) OR0011
标准蛋白质溶液(BSA,1mg/ml) PE0018
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)。

蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法[实验目的]学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法[实验原理]（蓝色）变为氨基酸芳香族碱性染料考马斯亮蓝磷酸nm G 595250max λ−−→−+-[器材与试剂]器材722型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管16支 试剂1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA ），配制成1.00mg/ml 。

2.考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg 考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。

[实验方法]标准方法1.取10支试管，分别编号后按 表1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。

每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。

2.加完染料20min 后，使用722分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。

3.用标准蛋白浓度（mg/ml ）为横坐标，用A 595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。

根据测得的未知样品的A 595，代入公式即可求得未知样品的蛋白质含量。

根据所测样品的吸光度,在标准曲线上查得相应的蛋白质含量,按下式计算: 样品蛋白质含量(μg/g 鲜重) =）测定时提取液体积（）样品重（）提取液总体积（）查得的蛋白质（ml g ml g g ⨯⨯/μSDS 干扰实验1.取5支试管，分别编号后按表2剂量依次加入标准蛋白、SDS 、去离子水和考马斯亮蓝染料。

每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。

2.加完染料20min 后，使用753分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。

[实验数据与结果分析]（一）标准方法的数据和图表1 考马斯亮蓝标准法实验表格根据表1，以A595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg）为横坐标，作图1。

图1 考马斯亮蓝标准法根据线性拟合公式y=a x+b计算所测溶液的蛋白质的含量。

（二）SDS干扰数据和图表2 考马斯亮蓝SDS干扰实验表格根据表2，以A595为纵坐标，SDS浓度为横坐标，作图2。

说明书Pierce®BCA Protein Assay Kit（Pierce® BCA 蛋白定量分析试剂盒）NCI3225CH NCI3227CH2436.0目录号描述NCI3225CH Pierce BCA Protein Assay Kit（Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒），试剂可用于500 次试管或5000 次微孔板分析NCI3227CH Pierce BCA Protein Assay Kit（Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒），试剂可用于250 次试管或2500 次微孔板分析试剂盒组分：BCA 试剂A，1000mL（产品目录号NCI3225CH）或500mL（产品目录号NCI3225CH)。

含有溶解于0.1M 氢氧化钠中的碳酸钠、碳酸氢钠、二喹啉甲酸（BCA）以及酒石酸钠。

BCA 试剂B，25mL，含有4%的硫酸铜白蛋白标准品，2mg/mL，10 1mL 安瓿，包含浓度为2mg/mL 的牛血清白蛋白（BSA）和0.05%的叠氮化钠，溶解于0.9%生理盐水中。

储存：在收到试剂盒后将其储存于室温。

常温运输。

注：如果在寒冷天气进行运输，或在保存期间，试剂A 或试剂B 发生沉淀，可通过对溶液进行温和加热和搅拌，将沉淀溶解。

当试剂盒发生变色，或证明有微生物污染时，请将试剂丢弃。

目录产品简介 (2)标准品和工作液的制备（两种检测方案均适用） (3)试管检测方案（样品与工作液的比例=1:20） (4)微孔板检测方案（样品与工作液的比例=1:8） (6)常见问题及解决方案 (7)Thermo Scientific 相关产品 (8)附加信息 (9)参考文献 (11)产品简介Thermo Scientific Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒是一种基于二喹啉甲酸（BCA），利用比色法测定总蛋白浓度的蛋白定量试剂盒，可与去污剂兼容。

本方法将双缩脲反应和显色反应结合在一起：前者为在碱性介质中，蛋白质可将Cu2+还原成Cu1+ 的反应，后者为使用含有二喹啉甲酸（BCA）1 的独特试剂，利用比色法检测Cu1+，具有高灵敏度和高选择性的特点。

几种测蛋白含量方法的比较-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1蛋白质含量测定方法的比较及肽含量的测定（一）蛋白质测定方法的比较（原理、优缺点）蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。

其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。

定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。

在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。

蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。

其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。

定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。

在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。

1 微量凯氏定氮法（GB ）原理样品与浓硫酸共热。

含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。

经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

操作方法样品经前处理、炭化、消化、蒸馏、滴定等主要步骤特点准确度较高，适用于~ 氮，误差为 ±2％；操作复杂费时，整个过程需要耗时8~10h，试剂消耗量大。

，测得结果为总氮含量，包括蛋白氮和非蛋白氮含量；适用范围广，几乎所有样品均可用此方法。

2 双缩脲比色法原理双缩脲法是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法。

因蛋白质含有两个以上的肽键，所以有双缩脲反应。

在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540~560nm测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。

蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法[实验目的]学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质含量的方法[实验原理]（蓝色）变为氨基酸芳香族碱性染料考马斯亮蓝磷酸nm G 595250m ax λ−−→−+-[器材与试剂]器材722型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管16支 试剂1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA ），配制成1.00mg/ml 。

2.考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg 考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。

[实验方法]标准方法1.取10支试管，分别编号后按 表1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。

每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。

2.加完染料20min 后，使用722分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。

3.用标准蛋白浓度（mg/ml ）为横坐标，用A 595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。

根据测得的未知样品的A 595，代入公式即可求得未知样品的蛋白质含量。

根据所测样品的吸光度,在标准曲线上查得相应的蛋白质含量,按下式计算: 样品蛋白质含量(μg/g 鲜重)=）测定时提取液体积（）样品重（）提取液总体积（）查得的蛋白质（ml g ml g g ⨯⨯/μ以蛋白标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

计算出回归方程。

如Y=aX+b让后把待测样品的吸光值代入回归方程，算出待测样品浓度 SDS 干扰实验1.取5支试管，分别编号后按表2剂量依次加入标准蛋白、SDS 、去离子水和考马斯亮蓝染料。

每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。

2.加完染料20min 后，使用753分光光度计，塑料比色皿，在595nm 处测量吸光度A 595。

[实验数据与结果分析]（一）标准方法的数据和图表1 考马斯亮蓝标准法实验表格根据表1，以A595为纵坐标，标准蛋白质量/（μg）为横坐标，作图1。

蛋白质含量测定方法的比较及肽含量的测定（一）蛋白质测定方法的比较（原理、优缺点）蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。

其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。

定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。

在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。

蛋白质含量测定法，目前包括定氮法、双缩脲法、福林酚法（Lowry法）和紫外吸收法、考马斯亮蓝法。

其中考马斯亮蓝和福林酚法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比双缩脲法灵敏100倍以上。

定氮法较复杂，但准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。

在选择方法时应该考虑：（1）实验测定要求的灵敏度和精确度；（2）蛋白质的性质；（3）溶液中存在的干扰物质；（4）测定花费时间。

1微量凯氏定氮法（GB 5009.5-2010）1.1原理样品与浓硫酸共热。

含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。

经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

1.2操作方法样品经前处理、炭化、消化、蒸馏、滴定等主要步骤1.3特点准确度较高，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％；操作复杂费时，整个过程需要耗时8~10h，试剂消耗量大。

，测得结果为总氮含量，包括蛋白氮和非蛋白氮含量；适用范围广，几乎所有样品均可用此方法。

2 双缩脲比色法2.1原理双缩脲法是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法。

因蛋白质含有两个以上的肽键，所以有双缩脲反应。

在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，在一定的实验条件下，未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540~560nm测定，即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。

北京雷根生物技术有限公司
标准蛋白质溶液(BSA,5mg/ml)
简介：
标准蛋白质溶液(BSA,5mg/ml)是用于BCA 法蛋白定量试剂盒和Bradford 法蛋白定量试剂盒的试剂，亦可作为其它方法进行蛋白浓度测定时的蛋白标准。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。

2、 一般应做多个稀释度，以便做出标准曲线。

注意事项：
1、 避免反复冻融。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：
编号 名称 OR0115 Storage 标准蛋白质溶液(BSA,5mg/ml) 1ml -20℃ 使用说明书 1份 编号 名称
PT0001 BCA 蛋白定量试剂盒
OR0002 pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)
OR0011 标准蛋白质溶液(BSA,1mg/ml)
PE0018 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
PE0080 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8)
PT0013 考马斯亮蓝快速染色液
TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)。

双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。

在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。

凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。

测定范围为1~10mg蛋白质。

干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。

主要的缺点是灵敏度差。

因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

（二）试剂与器材1.试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。

如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。

牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。

（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4•5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。

此试剂可长期保存。

若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

2.器材：可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。

（三）操作方法1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。

充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。

用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。