脊髓损伤动物模型的制备与评价

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急性脊髓损伤动物模型制备

急性脊髓损伤动物模型制备材料与方法1.实验仪器及试剂1.1实验仪器及耗材：BL－420E+生物机能实验系统成都泰盟科技有限公司生物信号导联电极（三向）成都泰盟科技有限公司CZF/BZF SZC/SZB型非接触式电涡流传感器杭州华瑞仪器有限公司信号采集针<银针>ATZ-4,8型弹簧度盘秤永康市华鹰仪器有限公司数字式脊髓损伤动物模型制备仪成都医学院基础医学实验技术中心一次性注射器（1ml, 5ml, 10ml）上海双鸽实业有限公司一次性使用无菌注射器（2ml）浙江欧健医用器材有限公司金属骨针（克式针）上海浦东金环医疗用品有限公司Argox Amigo 系列条形码打印机立象科技股份有限公司常规手术器械上海医疗器械（集团）有限公司手术器械厂缝合用针线上海医用缝合线厂、江苏省淮阴医疗器械厂温度计江苏省无锡县标准计量管理所棉签成都市华辉医疗器械有限公司大鼠营养饲料华西医科大学动物供应中心1.2 试剂酒精 75%：自行配制生理盐水：四川科伦药业股份有限公司产品批号：C070311 G1碘伏：四川华天科技实业有限公司产品批号：20070202阿司匹林肠溶片：南京白敬宇制药有限公司产品批号：061006注射用青霉素钠80万单位：哈药集团制药总厂产品批号：A06086310 葡萄糖氯化钠：成都军区总医院产品批号：070207081.5%戊巴比妥钠：自行配制1.3 主要试剂的配制1.3.1 75% 酒精：1.3.2 阿司匹林溶液：选取14片阿司匹林片剂，碾磨1.3.3 青霉素溶液 8U/ml：用针筒量取10ml生理盐水，溶解80万单位1.3.4 1.5%戊巴比妥钠溶液的配制：2. 实验方法2.1 实验大鼠的选取及麻醉标准该动物模型制备实验对大鼠有严格的限定，选取Spargue-Drawly 大鼠，年龄为77±1d，体重为260 ± g。

麻醉标准为雄性65mg/kg, 雌性40mg/kg。

新型小鼠急性脊髓损伤模型的建立与评价

学评分在脊髓损伤程度上有统计学差异（ｐ＜Ｏ．０５）。结论：成功建立稳定性好、重复性强且具有治疗意
义的小鼠脊髓钳夹损伤模型；（钳夹５秒组）具备较好的实验价Ｎ－。
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＤａｖｉｄＧｅｆｆｅｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＬｏｓＡｎｇｅｌｅｓ，ＬｏｓＡｎｇｅｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ９００９５— —１７６３；
组，ｎ一９）和钳夹损伤５ｓ组（Ｂ组，ｎ一９），钳夹损伤
１Ｏｓ组（Ｃ组，ｎ一９）。术前每３只一笼饲养，环境温
度２Ｏ ℃ ～２３ ℃ ，湿度５Ｏ～６Ｏ，自由饮食、水。钳
术前先定位Ｔ１０水平，术区碘酒消毒３遍（Ｔ１０为中心，Ｃ７一Ｌ５范围），再酒精消毒３遍。调节气体麻醉机气体流量，使最小气体流量以保持小鼠麻醉状态。调整显微镜视野，自Ｔ２一Ｔ１２尖刀切开背部皮肤，避免损伤皮下脂肪垫，用５＃镊子小心分离皮下筋膜组织，显露肌肉组织，可见浅层椎旁腱膜终止
ＢＭＳ评３４法、Ｒｏｔｏｒｏｄ法和Ｇｒｉｄｗａｌｋ法于损（０）ｄ、损伤后３ｄ、７ｄ、１４ｄ、２８ｄ分别对各实验组进行后肢运动功能评估；同时用ＧＦＡＰ组织学法于７ｄ、１４ｄ、２８ｄ观察各组脊髓组织切片的组

大鼠脊髓损伤模型建立及评价

大鼠脊髓损伤模型建立及评价[摘要] 脊髓损伤的治疗作为临床上的一大难题,建立良好的动物模型对于该项疾病的研究至关重要。

脊髓损伤的修复与再生成为研究重点,只有建立标准的、可重复性高的动物模型才能进行治疗方面的进一步研究。

本文旨在介绍大鼠脊髓损伤模型建立的方法,并对常用方法进行评价。

[关键词] 脊髓损伤模型建立引言脊髓损伤是目前临床上多发且致残率较高疾病,给患者家庭、社会带来沉重负担。

脊髓损伤患者生活质量明显低于正常人群[1]。

脊髓作为人体低级反射中枢,其损伤直接影响到人体各器官、组织的正常生理功能。

为此许多学者投入到了关于脊髓损伤的研究中,研究发现中枢神经损伤后仍具备一定的再生能力。

为了找寻更好的治疗方法,标准的、可重复性高的动物模型建立尤为重要。

近年来在脊髓损伤模型建立方面已有很大进展,在此回顾常用的脊髓损伤模型建立方法并进行相应评价。

Allen’s造模法早在1911年,Allen应用重物下落敲击的方法制备出脊髓损伤动物模型[2]。

实验过程中,可分别通过对重物重量、重物下落高度及损伤截断的调整而制作出不同程度、不同类型的损伤模型,由于该种方法具有最大限度的模拟现实损伤情况,不破坏硬脊膜以防止外源性物质进入脊髓内部形成干扰,避免手术过程中脊髓外露和脑脊液渗出等诸多优点[3],一直被沿用至今,但因该方法对于损伤程度、损伤位置等具有不定性,脊髓模型的严格标准性无法达到而存在着相应的不足。

随着研究的推进,相继出现了一些Allen’s造模法的改良方法。

1 将打击头置于硬膜上,打击头与重物连接,并用重锤线调节引导玻管后进行敲击[4]。

敲击过程中,由于引导玻管及重锤线的调节大大增加了中午落下时位置的准确度。

但是也有其不足之处。

首先打击头提前置于硬膜上,会造成脊髓实验预想之外的充血损伤;再者,打击头与重物相连接,之间的连接线会影响重物落于打击头的位置,从而出现偏差,易造成不同角度偏瘫;除此之外,此装置在敲击完成时不易做到迅速挪走重物,从而造成脊髓的进一步压迫性损伤。

脊髓损伤动物模型研究现状

研究ＳＩ基本的条件是建立标准、想的ＳＩ型。Ｃ最理Ｃ模客观化、想化的ＳＩ型应具备四方面的条件：床相似理Ｃ模临
性、调控性、可可操作性与可重复性。目前，验中最常用的实
击，而复制出不同程度、同类型的ＳＩ型。同时，法从不Ｃ模该
保持了硬脊膜完整，有效防止外源性成分侵入ＳＩ可Ｃ区域，并
防止脊髓外露与脑脊液外漏。这种模型较接近人类脊髓损伤的病理生理特点及变化规律，研究脊髓损伤后神经元、经对神
胶质细胞的病理变化、生规律和相互作用、索神经保护策再探略等有较大帮助。 ‘
件和受伤机制，型制作的关键是控制牵拉比率的精确性。模
２神经功能的评价标准及方法

动物脊髓损伤后的神经功能评定主要有神经电生理评
接。２００４年Ｓｅｇ等＿制备了微创的鼠ＳＩ型，过调节ｈｎ６ＪＣ模通
压迫时的压力大小及时间长短而得到不同程度的ＳＩ型，Ｃ模该法能保持硬脊膜的完整并具有很好的可重复性。１４光化学诱导型ＳＩ型静脉注射光增敏剂二碘曙红．Ｃ模（加拉玫红）四碘荧光素二钠（红Ｂ，后分别以氩离孟或藻）然子灯或氙弧灯产生的５４５ｎ激光或５０ｍ绿光照射拟损１．ｍ６ｎ伤的脊髓部位，即与光增敏剂发生反应使局部氧自由基大光量堆积，伤脊髓血管内皮细胞，而引发血栓，致缺血性损进导损伤和水肿，此而制得光化学诱导型脊髓损伤模型［］由。该法能保持硬脊膜的完整性，至不必切开皮肤，为激光足甚因

浅析脊髓损伤动物模型的运动功能评价方法

浅析脊髓损伤动物模型的运动功能评价方法不同的脊髓损伤动物模型复制出不同类型的解剖结构损伤以及相应的行为学改变。

损伤后的运动功能评价既可直接衡量脊髓的再生、修复和神经功能的重建，也是开展神经保护药物药效学试验不可或缺的环节。

该文就国内外已经建立的评价方法作系统综述，同时列举其在实验治疗学上的应用，指导研究者选用合适的评价方法。

脊髓损伤( spinal cord injury，SCI) 是由于椎体的移位或碎骨片突出于椎管内造成脊髓或马尾神经不同程度的损伤，出现与损伤节段相应的各种运动、感觉和括约肌功能障碍、肌张力异常以及病理反射等改变。

国内外已经建立了脊髓挫伤、压迫损伤、横断损伤、缺血损伤、牵张损伤和化学损伤等多种SCI 动物模型，并且开展了部分神经保护药物的药效学筛选。

但在实际研究中发现，动物模型与临床SCI 仍有很大区别，需要建立一套完整的、客观的运动功能评价系统，这对进一步探讨SCI 发生发展机制和损伤后的修复治疗显得尤为重要。

现有的SCI 动物模型的运动功能评价方法可大致分为开放场地试验( open field test) ，非开放性场地试验( non-open field test) 和联合行为学评分法( combined be- havioral score) 3 类。

本文就各种SCI动物模型的运动功能评价方法及其优缺点作系统综述，方便研究者根据实验治疗学的需要选用合适的模型及其评价方法。

1、Tarlov 法(Tarlov test)1953年Tarlov 等首次描述开放场地试验，并应用于动物脊髓压迫损伤后的运动功能评价，内容有关节活动度，能否行走、跑步等。

其特点是对灵长类动物较为可靠，且与脊髓损伤程度、神经功能恢复及轴突残存数量等的相关性较好，但对啮齿类动物一致性较差。

由于观察者存在主观随意性，在不同实验环境下重复性不高。

随后许多学者对Tar- lov 法进行了诸多改良，并将此法应用于大鼠后肢功能评价。

脊髓损伤动物模型造模设备的制作技术

本技术涉及一种脊髓损伤动物模型造模装置，包括传送与控制装置、加热装置、排水装置组成，所述传送与控制装置由电脑、压力传感器、脊柱固定夹、电动钳夹器、调节旋钮、手术台、底座、电动机、滑轨、传动齿条、夹钳组成；所述排水装置由排水槽、排水孔组成；手术台底部安装了内置温控器的加热装置，加热装置一端连接有插头。

其优点表现在：(1)将钳夹损伤所有过程机械化控制，摆脱手持操作的误差；(2)精确控制所有致伤因素，使造模过程更可控、稳定；(3)对造模过程有反馈数据，使模型均一性更具有说服力。

技术要求1.一种脊髓损伤动物模型造模装置，包括传送与控制装置、加热装置(14)、排水装置，其特征在于，所述传送与控制装置含有电脑(1)、压力传感器(2)、脊柱固定夹(3)、电动钳夹器(4)，电脑(1)通过数据线(9)与电动钳夹器(4)相连接，所述电动钳夹器(4)内含有传动齿条(12)、滑轨(10)和双向电动机(11)；传动齿条(12)上端与双向电动机(11)衔接；滑轨(10)贯穿于两列传动齿条(12)之间；滑轨(10)下端连接有两个夹钳(13)；夹钳(13)内侧含有压力传感器(2)，电动钳夹器(4)上端有垂直位置调节旋钮(5)；支架将电动钳夹器(4)与手术台(7)连接起来；手术台(7)台面放置有脊柱固定夹(3)，手术台(7)两侧有水平位置调节旋钮(6)；手术台(7)下端有底座(8)；所述加热装置(14)是内置温控器的加热装置，温控器可在37℃-40℃内调节温度，加热装置(14)位于手术台(7)操作区域正下方，加热装置(14)一端连接有插头(15)；所述排水装置是由排水孔(16)、排水槽(17)组成，排水孔(16)位于手术台一侧，排水槽(17)位于手术台(7)上表面。

2.根据权利要求1所述脊髓损伤动物模型造模装置，其特征在于，所述电动钳夹器(4)共有两个，一个上端与数据线(9)连接，另一个上端与垂直位置调节旋钮(5)连接。

3.根据权利要求1所述脊髓损伤动物模型造模装置，其特征在于，所述脊柱固定夹(3)共有3-6个。

大鼠急性脊髓损伤动物模型的建立及影像学分析

脊髓损伤所致的劳动力丧失、生活不能自理及其
［员］
诸多严重并发症等问题日益困扰着整个社会
立标准、可重复性好的杂悦陨动物模型是对杂悦陨深入研测方法才能为进一步研究杂悦陨机制奠定坚实的实验基猿援员摇动物模型的选择摇脊髓损伤模型种类繁多，各有其优缺点，在应用时应根据具体实验研究目的和条件作出科学的选择
砸葬凿蚤燥造燥早赠蚤皂葬早藻藻增葬造怎葬贼蚤燥灶蚤灶皂燥怎泽藻皂燥凿藻造燥枣葬糟怎贼藻泽责蚤灶葬造糟燥则凿蚤灶躁怎则赠援摇糟葬造悦燥造造藻早藻，郧怎葬灶早扎澡燥怎缘员园圆远园，悦澡蚤灶葬
在澡怎葬灶早原憎藻灶，在匀粤韵再怎，栽粤晕蕴蚤原造蚤葬灶援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣韵则贼澡燥责葬藻凿蚤糟泽，栽澡藻杂藻糟燥灶凿匀燥泽责蚤贼葬造粤枣枣蚤造蚤葬贼藻凿燥枣郧怎葬灶早扎澡燥怎酝藻凿蚤鄄憎藻则藻葬灶葬造赠扎藻凿枣燥则藻增葬造怎葬贼蚤燥灶燥枣凿蚤葬早灶燥泽贼蚤糟泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻援酝藻贼澡燥凿泽摇
员援猿援圆摇悦栽检查摇使用西门子孕造怎泽原责燥憎藻则型螺旋悦栽机，病灶先采用猿耀缘皂皂层厚，员郾缘螺距以病灶为中心描至圆源园泽，层厚圆皂皂，螺距为员。行悦栽平扫，确定手术部位最大中心层。各扫描一次扫员援猿援猿摇载原砸粤再原阅砸成像检查摇采用西门子的平板探测器技术原粤载陨韵酝粤则蚤泽贼燥泽灾载孕造怎泽。粤载陨韵酝粤则蚤泽贼燥泽
员援猿援员摇酝砸陨检查摇手术后员澡进行酝砸陨检查。采用郧耘园郾圆栽永磁型磁共振扫描机和郧耘员郾缘栽超导型磁共序列获取栽圆宰陨及梯度回波（郧砸耘），常规扫描获取轴位图像，部分大鼠另行矢状位和（或）冠状位扫描；扫描层厚圆耀猿皂皂，间隔员耀圆皂皂。振扫描机；选用头线圈，采用杂耘序列获取栽员宰陨、云杂耘

脊髓损伤动物模型制备的研究进展

广
西
医
科
大
学
学
报
２０１３Ａｐｒ；３０（２）
－
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＡＮＧＸＩＭＥＤＩＣＡＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
脊髓损伤动物模型制备的研究进展
周红海秦明芳
南宁
曹明亮
５３０００１）
坏死，随后阶段性部分修复、组织重建，最后过渡到特征性的慢性坏死囊腔形成、实质细胞萎缩、胶质瘢痕形成。该模型
对研究神经元、胶质细胞的病理变化及再生规律和相互作用，探索神经保护策略有历史性的帮助。其缺点是当重物下落撞击时，不能及时移开而压迫脊髓造成新的损伤；同时，重物打击时脊柱脊髓的偏移常造成致伤结果的不一致。Ｋｈａｎ等根据Ａｌｌｅｎ法的技术要领，设计出新的ＷＤ仪，即将重物、垫片、换能器、动物夹等各种物件均附着于可移动的磁性底座上，使动物的固定与调节及ＳＣＩ操作更方便、灵活。Ｙｅｏ等改良撞击损伤模型，将撞击速度和频率设为变量，并进行动物ＳＣＩ后功能评定，证明随着撞击速度和频率的增加，脊髓挫伤程度随之增加。Ｆａｌｃｏｎｅｒ等将大鼠四肢固定，以前体定位仪固定头部，从而可上、下、左、右灵活移动以调节脊髓位置。研究中证明，冲力、脊髓压缩程度和速度、传递的能量等因素可以通过与传感器相连的反馈调节回路进行精确调节，能够在最大程度上减少致伤装置系统内的变异因

挫伤型脊髓损伤动物模型制作方法研究进展

第38卷第2期2021年4月实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCEVol.38 No.2April 20214研究进展4挫伤型脊髓损伤动物模型制作方法研究进展姬笑颜1李含笑1刘西纺〃(丨.陕西中医药大学研究生院，咸阳7丨2046)(2.两安夂通大学附K红会医院神经脊柱康a病区，西安710054)摘要：脊髓损伤目前尚无有效的治疗方法，因此建立一个理想的动物模型对于确定脊髓损伤机制和开发脊髓损伤患者的治疗方法具有重要意义。

本文系统地冋顾和分析了挫伤型脊髓损伤造模装置的研究进展，并对其优缺点进行了评价，以供进一步研究。

关键词：拌伤；脊髓损伤；动物模型中图分类号：Q95-336 文献标识码：A文章编号：1006-6179(2021)02-0070-04DOI：10. 3969/j.issn. 1006-6179. 2021.02. 013脊髓损伤是一种导致死亡率和伤残率较高的疾病，能够导致不同程度的肢体瘫痪、感觉丧失、膀胱功能障碍等一系列的并发症。

脊髓损伤不仅影响个人的生活健康，而且给家庭和整个社会带来巨大的经济负担:1:脊髓损伤的生理病理机制非常复杂，目前尚未完全破解，建立可靠的动物模型可用来积累经验，从而提高和完善脊髓损伤的生理病理知识，降低脊髓损伤患者的发病率和死亡率挫伤型脊髓损伤是一种急性的脊髓损伤、损伤时间短暂、损伤的外力与脊髓接触的时间较短。

挫伤型脊髓损伤动物模型是最接近人类脊髓损伤的病理生理特点及变化规律的模型，具有较高的临床科研价值。

1挫伤型脊髓损伤实验动物的选择和制作要求1.1动物的选择目前，很多动物可以用于制作脊髓损伤动物模型，如啮齿类的小鼠、大鼠，灵长类的狨猴、猕猴、大猩猩以及猪、狗、羊等2:。

其中，灵长类的猕猴和大惺猩因其与人类的解剖、生理、病理、基因等有较高的同源性最为理想，但因模型不稳定、术中猝死率高及其成本较高且涉及动物保护和伦理问题未能普遍应用'3。

大鼠牵张性脊髓损伤动物模型的建立和评价

Key words：spinaI cord injury；corticaI somatosensory evoked potentia（I CSEP）；rats
牵张性脊髓损伤是脊柱矫形手术的常见并发症之一。随着 CD、TSRH 等三维矫形器械及诱发电位术中监护的相继应用［1，2］，手术适应证不断扩大，脊柱畸形矫正的效果越来越好。但随之而来的医源性牵张性神经损伤仍然是个严重的问题［3］。而目前对脊髓损伤的治疗效果不佳，预后难以预料，主要是因脊髓损伤后的病理生理机制非常复杂，人们对此认
部位为中心取长约 1 . 5cm 的脊髓，用 4% 多聚甲醛固定 24 小时，常规石蜡包埋，连续切片，片厚 5!m，备用。对照组取相应部位脊髓。
6 组织形态学检查从每只大鼠的切片中随机抽取分别做 hE、尼氏
体染色、光镜观察、神经元计数；每张切片随机选择
5 个视野，采用美国产 Nikon & Spot 图像分析仪测神经元截面积和尼氏体密度。
脊髓神经元间隙稍增大尼氏体略减少神经元截面积及尼氏体密度稍下降脊髓功能出现轻微障碍说明csep波幅下降不超过30时其改变是可逆的这也与以往作者的报道相一致组则随撑开距离增大波幅有缓慢下降趋势脊髓功能明显损害脊髓灰质内可见大片出血灶神经细胞固缩坏死神经纤维排列紊乱呈脱髓鞘改变尼氏体明显减少
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Abstract： Objective To estabIish animaI modeIs of tractive spinaI cord injury in rats and investigate its pathophysioIogicaI changes and cIinicaI significance. Methods T12 - L3 spines were tracted IongitudinaIIy with a speciaI spinaI retractor that was put on proccessus transverses of T12 - L3 vertebrae of rat after exposing T13 - L2 spinaI cord via duaI Iaminectomy，at the same time，spinaI cord function was monitored by corticaI somatosensory evoked potentia（I CSEP）. Rats were randomIy divided into the controI group（group A）and experimentaI group（s B，C，D groups）according to the ampIitude of CSEP P1 - N1 wave. The amount of decrease of the P1 - N1 wave was 30% in group B、50% in group C and 70% in gropu D respectiveIy. After traction，changes of function of neuraI behavior in rats were observed and morphoIogicaI structure of spinaI cord was anaIyzed guantitativeIy with image anaIysis system of computer. Results With traction of spine，compared with the group A，the group B had no marked difference in CBS score，neuron count，section area of neuron and nissI body density，but the there was a marked difference between C and D group（s P 0 . 01）. Light microscope showed that neuron voIume was sIightIy smaIIer and nissI body was reduced IightIy in group B，neuron space was enIarged and neuron was degenerated，reduced，dissoIved or necrotic，nissI body was obviousIy dissoIved，and spinaI cord structure was destroyed in the groups of C and D. Conclusion The animaI modeI of tractive spinaI cord injury in rats is a reproducibIe，graded and it mimics cIinicaI picture. The modeI referred in this articIe provides a vaIuabIe assistance in further understanding etiopathoIogy and screening effective measures of therapy and prophyIaxis of this type of injury.

大鼠脊髓打击器研制及其制备的脊髓损伤模型稳定性评价

大鼠脊髓打击器研制及其制备的脊髓损伤模型稳定性评价陈霄雷;林雷雷;邵璐斐;丁惠强;杜金龙;张佳林;锁志刚【摘要】目的设计制造一种简易、稳定的Allen's大鼠脊髓打击器,并评估其制作大鼠脊髓损伤模型的参数和稳定性,为脊髓损伤的研究提供基础.方法取体重220～250g的雄性SD大鼠48只,根据打击冲量(冲量=高度×主动撞针质量)的不同分为A、B、C、D组,坠落距离分为3、6、9、12cm组,0cm组为E组(对照组),仅打开椎板,每组6只或12只.打击后通过行为学评分和病理切片HE染色确定出能够造成较明显脊髓不完全损伤的高度,重复可造成较明显脊髓不完全损伤实验,进行稳定性及效果评估.结果对照组大鼠与手术前正常大鼠打击后24h的BBB评分相同,HE 染色见对照组脊髓无可见损伤.脊髓损伤各打击冲量组术后BBB评分较术前有不同程度降低(P＜0.05),HE染色可见灰、白质组织结构不完整,损伤区可见坏死灶、细胞肿胀及红细胞聚集.大鼠脊髓最大受损面积比在42g· cm冲量组和63g·cm冲量组(6cm和9cm)组内差异较小(CV＜10％)、组间差异有统计学意义(P＜0.05),脊髓最大受损面积比与BBB评分呈负相关关系(r=-0.851,P=0.000).结论本研究研制的大鼠脊髓打击器可成功建立不同损伤程度的稳定性高、重复性好的大鼠急性脊髓挫伤模型,可为后续大鼠脊髓损伤的研究提供有效的支持.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2014(036)007【总页数】6页(P716-719,724,封2)【关键词】脊髓损伤;动物模型;致伤装置;BBB评分;显微镜检查【作者】陈霄雷;林雷雷;邵璐斐;丁惠强;杜金龙;张佳林;锁志刚【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院,银川750004;宁夏医科大学总医院,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R318.6;R683.2世界卫生组织2013报告每年全球有50万人发生脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)[1]。

脊髓继发性损伤大鼠动物模型的制作

脊髓继发性损伤大鼠动物模型的制作【摘要】目的观察继发性脊髓损伤大鼠。

方法用组织化学和电子显微镜投射方法观察大鼠脊髓前角运动神经原细胞的变化。

结果继发性脊髓损伤大鼠脊髓前角运动神经细胞化学组织染色的改变。

结论组织化学染色反应物减少及电子显微镜的超微改变证明脊髓继发损伤动物模型制作成功。

【关键词】继发性脊髓损伤；化学组织染色；大鼠急性脊髓损伤后开始时常为不完全性，最后结果常为两种损害机制引起：原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤(SSCI)。

继发性脊髓损伤为伤后几小时至几天发生的一系列损伤激活的自身破坏过程，使最初病灶周围原来完整的组织发生自身破坏性病变，周围神经功能损害逐渐发展。

所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤[1]。

1 材料与方法1.1 实验材料雄性SPF大鼠60只，电子显微镜，化学试剂。

1.2 实验动物分组本实验选用雄性健康SPF大鼠60只，体重260～300 g，正常对照组：20只。

动物模型组的组织化学染色：20只。

动物模型组的电子显微镜组：20只。

1.3 实验方法1.3.1 继发性脊髓损伤大鼠模型制备1%戊巴比妥钠腹腔麻醉动物(30 mg/kg)，俯卧位固定于立体定位仪上。

以T10为中心暴露上下位锥板，咬除椎板，保持硬脊膜完整。

在T10阶段节段脊髓表面垫一曲度与脊髓表面一致的3 mm×8 mm塑料片，用30 g重物垂直压迫T10节段脊髓10 min，逐层缝合肌肉皮肤。

符合以下条件的大鼠归入损伤组：压迫时身体痉挛性颤动、尾巴痉挛性摆动、双下肢及躯体回缩样扑动；压迫后硬脊膜内充血或水肿，双下肢呈迟缓性瘫痪，斜板实验测定最大角度＜30°。

对照组大鼠只暴露脊髓。

术后不同时间点处死动物，4％多聚甲醛灌注固定，无菌条件下取损伤节段脊髓组织约1.0 cm，液氮保存或石蜡包埋。

1.3.2 组织染色标本的取材对实验动物用1％戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min滴入1％肝素钠的生理盐水500 ml，同时剪开右心耳。

大鼠脊髓损伤BBB评分中文版

Western blot 试验操作步骤一、蛋白样品制备1 用细胞刮刀将细胞刮下（不要将培养基倒掉），用吸管将其吸至离心管中2 用4℃预冷的PBS 1ml冲洗培养瓶2次收集入上述离心管中3 1000rpm，离心10min4 倒掉上清，沉淀用1ml PBS 重悬，转入EP管中，再加1ml PBS冲洗离心管壁上残留的细胞转入EP管中5 4℃，4000rpm，离心5min6 倒掉上清液（用抢把残余上清吸干净）7 配制裂解液，计算所需用量，每个EP管中加入100ul裂解液(10mg组织/100ul)若有4管（4组），配制400ul裂解液：PMSF储备液浓度100mM，用RIPA稀释至1Mm. 【单去污剂裂解液（PMSF）：1mol/L Tris·HCl（pH8.0）2.5ml; NaCl 0.438gTritonX-100 0.5ml ;蒸馏水至50ml; 混匀后4℃保存】8 4℃裂解30-45min，每5min振荡一次9 4℃ 14000g 离心5min，取上清（移入1.5ml的EP管中）。

10 蛋白定量（常用BCA法，参见蛋白定量试剂盒使用说明）每管蛋白一致，分装约20ul/管左右（加入5×buffer并用RIPA稀释成1×）11 将蛋白样100℃，变性5min，，-80℃（or -20℃）保存。

二、SDS-PAGE的配制：1 试剂及配制：（1）30%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g，N,N-亚甲基双丙烯酰胺1g，去离子水至100ml，过滤，避光，4℃贮存。

（2）1. 5mmol/L Tris溶液（PH8.8）：称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解，用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8，加超纯水定容至100 ml，室温储存。

（3）1.0mmol/LTris溶液（pH6.8）：称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解，用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8，加超纯水定容至100 ml，室温储存。

脊髓缺血损伤动物模型的建立

脊髓缺血损伤动物模型的建立作者：管玉龙，刘锋，董培青，万彩红，杨璟【摘要】目的本研究拟建立胸降主动脉手术脊髓缺血动物模型，为脊髓保护策略和药物干预研究提供基础。

方法实验中采用6只北京农大小型猪。

经左侧第五肋间开胸，常温条件下在锁骨下动脉以远阻断降主动脉，30min后阻断开放。

动物复苏后，对其下肢行为学临床评分每日进行观察。

7日后处死动物取材，进行损伤区域脊髓超微结构观察。

结果术中血液动力学平稳。

血气结果均维持在正常范围。

复苏后1只动物术后每天肌力均为IV 级，7天后处死时肌力IV～V级；其余5只动物术后下肢肌力0 ～I级。

电子显微镜超微结构观察显示脊髓较严重的损伤性改变。

结论应用小型猪为动物模型，在常温条件下胸降主动脉阻断30min，可以建立急性脊髓缺血术后截瘫模型。

【关键词】脊髓；缺血；胸主动脉The Establishment of Porcine Model of Spinal Cord Ischemic InjuryAbstract: OBJECTIVE This study was designed to establish a porcine model of spinal cord ischemic injury produced by descending thoracic aorta occlusion and provide basis for strategy of spinal protection and pharmaceutical intervention. METHODSSix piglets were used in the experiments supplied by the Beijing College of Agriculture. A standard left thoracotomy was made through the fifth intercostal's space. Thedescending aorta was clamped distal to left subclavian artery at normothermia. Thirty minutes later, the clamps were released. The trachea was extubated once the animals recovered breathing spontaneously. The animals were evaluated daily according to a quantitative behavioral score. On postoperative seventh day the animals were sacrificed and histological analysis for the injury of spinal cord was made. RESULTSHemodynamic data showed all animals were stable before, during and after the procedure. The results of behavioral scoring for each animal demonstrated one animal with paraparesis and other 5 animals with paraplegia. The injury of spinal cord was also demonstrated by ultrastructural measurement.CONCLUSIONA porcine model of spinal cord ischemic injury can be established by descending thoracic aortic clamping thirty minutes at normothermia.Key words：Spinal cord；Ischemia；Thoracic aorta胸主动脉疾病实施外科治疗期间，围术期多种因素可能引起脊髓缺血，术后脊髓并发症一旦发生，直接影响手术效果和患者的生存质量。

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脊髓损伤动物模型的制备与评价【摘要】脊髓损伤(SCI)的修复是医学界面临的一大难题，虽然现在还没有理想的治疗方法，但是世界各地的许多学者已对脊髓损伤的病理机制和再生修复进行了深入的研究。

脊髓损伤动物模型的制备和评价方法对脊髓损伤相关研究具有很重要的意义,本文将回顾目前常用的脊髓损伤模型制备和评价的方法。

【关键词】脊髓损伤；动物模型；评价
【Abstract】Objective restore the neural function after spinal cord injury is a hard work.Though there are no promising therapies,the scientists all over the world have made great effort in studying the pathological meschasim ofspinal cord injury and spinal cord regenerate.The establishment of animal model and evaluating methods are playing an important role in these researches.This article will review applications about how to make and evluate animal models of spinal cord injury.
Key words:spinal cord injury,animal model,evaluation
1 脊髓损伤动物模型的制备
1.1 脊髓撞击损伤模型
Allen［1］建立了重物坠落致脊髓损伤的方法。

即用一定重量的重锤沿一套管垂直落下、精确打击特定脊髓节段而致伤。

这种模型比较接近人类脊髓损伤的病理生理特点及变化规律，对研究脊髓损伤后神经元、神经胶质细胞的病理变化、再生规律和相互作用，探索神经保护策略有很大帮助。

1.2 脊髓压迫损伤模型
包括腹侧和背侧脊髓压迫模型，根据压迫方式和持续时间区别分为许多种类。

Tralov［2］于1953年首先报道了脊髓压迫损伤的动物模型，用一小气囊连接导气管置于椎管内，然后向气囊内充气造成脊髓压迫损伤。

后来还有人采用水囊压迫制备脊髓损伤模型。

由于气囊或水囊在椎管内滚动,这两种方法对动物脊髓造成的压迫程度不均匀。

Von-Buler等用动脉瘤夹夹持脊髓，以夹持力和钳夹时间区别脊髓损伤轻重。

夹持压迫的特点在于可以模拟脊柱移位造成的脊髓损伤，且能保持硬脊膜结构完整，揭示神经功能损伤与压迫时间的关系，寻求最佳的解压迫时机，通过控制夹持力的大小和持续时间可得到不同损伤程度的模型。

但此模型的制作要求夹持及解除夹持脊髓要迅速，而且对夹持力的判定不如重物坠落法直接。

1.3 脊髓缺血及再灌注损伤模型
该模型对研究脊髓的缺血及再灌注有重要的意义。

具体的模型制作方法有血管结扎、灼闭、夹闭、栓塞等不同的方式。

兔脊髓血管呈明显节段性分布，侧枝循环较差，易致缺血，且缺血后病理变化较一致，重复性好，并发症较少。

Chavlco［3］在兔肾动脉上方夹闭腹主动脉造成脊髓缺血及再灌注损伤，观察结果显示运动障碍以前角运动神经元损伤为主。

有学者应用明胶海绵或碘油栓塞双侧供应胸椎的肋间动脉，造成了神经变性、坏死、液化，但此模型一致性较差。

Bungle ［4］利用孟加拉玫瑰红激光束直接照射脊髓，造成脊髓缺血损伤，光镜和电镜观察显示组织细胞病变与缺血病变有较好的相关性。

此外,还有人直接灼闭脊髓动脉，造成局部缺血。

1.4 切割和吸除型脊髓损伤模型
切割型脊髓损伤模型［5,6］,即使用虹膜刀片或显微剪横断或半横断脊髓。

吸除型脊髓损伤模型,是直接切除一段脊髓、或切开后用玻璃针吸出已损毁的脊髓组织，或负压吸除部分脊髓，造成脊髓完全或非完全的横断性缺损。

该法操作方便、出血少、继发反应轻，适用于放置移植物或药物等进行再生性实验研究，国内学者多采用此法。

但此法所获得的模型与临床相关性差，重复性低，难以保证模型动物的一致性，由于硬脊膜的破裂，大量外来成分进入脊髓损伤部位，破坏。