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阶段质量检测（二）微生物的培养与应用(时间：60分钟；满分：100分)一、选择题(每小题2.5分，共50分)1．下列常用的无菌操作中错误的是()A．用酒精擦拭双手B．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行D．用氯气消毒水源解析：选B双手可用酒精擦拭来进行消毒；玻璃器皿(吸管、培养皿)需要进行灭菌处理，一般采用干热灭菌法；实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以防止空气中的杂菌污染；水源可用氯气进行消毒。
2．牛奶、吸管、接种环、培养基、空气消毒和灭菌的方式依次是()①灼烧灭菌②巴氏消毒法③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌A．②③①⑤④B．②⑤③①④C．②①③⑤④D．⑤①③②④解析：选A对于不耐高温的液体消毒用巴氏消毒法，如牛奶；吸管为耐高温又要保持干燥的玻璃器皿，采用干热灭菌法；接种环往往采用灼烧灭菌法；培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌比较彻底；空气灭菌常用紫外线照射法。
3．(2018·苏州调研)关于实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是()A．配制培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行B．倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C．划线接种时，灼烧接种环后立即进行再次划线D．划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养解析：选D配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行，倒平板和接种需要在火焰旁进行；倒平板时，应立即盖上培养皿的皿盖；划线接种时，灼烧接种环冷却后进行再次划线。
4．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是()A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者解析：选C划线时要避免最后一区的划线与第一区的划线相连。
5．用稀释涂布平板法统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。
2020届高考生物难点及易错题精讲精练专题12 微生物的培养和应用【难点精讲】一、微生物的实验室培养和无菌技术例题：(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具___________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_______________________。
在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。
【答案】(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽【解析】(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃条件下加热1～2 h。
耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。
(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃条件下煮30 min或在80 ℃条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。
(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。
在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。
专题二学业质量标准检测本试卷分第Ⅰ卷(选择题)和第Ⅱ卷(非选择题)两部分。
满分100分，考试时间90分钟。
第Ⅰ卷(选择题共50分)一、选择题(共25小题，每小题2分，共50分，在每小题给出的4个选项中，只有1项是符合题目要求的)1．下列关于微生物营养的说法正确的是( D )A．同一种物质不可能既做碳源又做氮源B．凡是碳源都能提供能量C．除水以外的无机物仅提供无机盐D．无机氮源也提供能量[解析] 同一种物质可以即作碳源又作氮源，如牛肉膏，A错误；自养微生物利用的无机物碳源不提供能量，如蓝藻，B错误；无机物也可提供碳源和氮源，如碳酸盐和硝酸盐，C错误；自然界中一些微生物如硝化细菌，可以以无机氮源氨合成细胞物质，同时通过氨氧化释放的能量获得生长所需能量，D正确。
2．培养基为微生物的生长繁殖提供( D )A．水B．碳源C．氮源D．水、碳源、氮源和无机盐等[解析] 培养基含有的成分有水、碳源、氮源和无机盐。
3．将配制好的培养基进行灭菌应用( B )A．灼烧灭菌B．高压蒸汽灭菌C．干热灭菌D．煮沸灭菌[解析] 培养基常采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。
4．下列几项需要用到灭菌的是( C )A．实验操作的空间B．操作者的衣着和手C．培养基D．牛奶[解析] 选项中A、B、D需要消毒，C项需要灭菌。
5．判断以下部位不含有微生物的是( D )A．洗干净的脸上B．洗完澡后的皮肤C．刷完牙后的口腔D．灼烧之后的灭菌环[解析] 灼烧是灭菌的一种手段。
经过灼烧后，所有的微生物均被消灭。
6．为了保证结果准确，一般选择菌落数在何种范围的平板进行计数( C )A．30～100 B．30～200C．30～300 D．30～600[解析] 平板计数时选择的菌落数为30～300。
7．在三个培养皿中各加入等量但不同种的大肠杆菌培养基，在培养皿中培养36小时后计算细菌的克隆数(如表)。
下列培养皿的结果中，能说明大肠杆菌生长需要碳源的是( C ) 在不同条件下大肠杆菌的生长量AC．培养皿Ⅱ和ⅢD．培养皿Ⅲ[解析] 由表中数据可知，该实验共有两组对照实验：培养皿Ⅰ和Ⅱ、培养皿Ⅱ和Ⅲ。
专题测试卷(二) 微生物的培养与应用(时间：60分钟满分：100分)一、选择题(共15小题，1～10小题每小题3分，11～15小题每小题5分，共55分。
每小题只有一个选项符合题意。
)1．下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是( )A．微生物培养前，需对培养基进行消毒B．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌；为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌；尿素分解菌中的脲酶能将尿素分解为氨，筛选分离时必须以尿素为唯一碳源。
答案：A2．微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质，并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。
下列有关微生物营养的说法，正确的是( )A．纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．在纤维素分解菌生长的培养基中只需碳源、氮源、水、无机盐即可正常生长C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利D．生长因子是微生物生长必需的，而微生物本身合成这些物质的能力往往不足解析：纤维素分解菌是异养型微生物，其碳源为有机物，如纤维素等。
硝化细菌是自养型微生物，其碳源物质为CO2，因此A错误；纤维素分解菌的培养基中需加入维生素做生长因子，才能正常生长，因此B错误；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从培养基中吸水，将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利，因此C错误。
答案：D3．有关培养基配制原则表述正确的是( )A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到温度、pH、氧、渗透压等的影响D．营养物质的浓度越高越好解析：培养基中碳源和氮源必须具有一定比例，但含量最多的元素不应是碳元素，而是氧元素。
《微生物的培养和应用》真题研悟一、微生物是实验室培养【教材清单】1.各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2.消毒是指是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物；灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
倒平板要待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
4.微生物接种最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，其结果是在培养基上得到单个菌落。
【名师点读】平板划线法与稀释涂布平板法的比较：【真题精练】1.（2018·全国卷Ⅱ）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能，在照射前，适量喷洒，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是。
1.（1）可以（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少（3）破坏DNA结构（4）消毒液（5）氯气未将锅内冷空气排尽【解题指导】理清实验室和日常生产、生活中常用的消毒和灭菌方法是解答此题的关键。
【解析】（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）煮沸消毒法所用温度高且时间长，易破坏牛奶中的营养物质；巴氏消毒法使用的温度较低，高温瞬时消毒法的温度虽然高，但时间非常短，可杀死大部分微生物，但营养物质不会被破坏。
2018-2019学年陕西省高三（下）第二次质检生物试卷一、单选题（本大题共6小题，共36.0分）1.下列分析正确的是（）A. 该图为光学显微镜下所观察到的动物细胞结构图B. 外界溶液浓度大于③内液体浓度时，可发生质壁分离现象C. 该细胞中能产生ATP的部位是⑤、⑥、⑨和⑩D. 该细胞可能取自茎尖分生区或根尖成熟区2.关于酶和ATP的叙述，错误的是（）A. 同一种酶可存在于分化程度不同的活细胞中B. 酶即可作为催化剂，也可以作为另一个反应的底物C. ATP可为物质跨膜运输提供能量D. ATP合成酶都存在于线粒体中3.如图表示反射弧和神经纤维局部放大的示意图，正确的是（）A. 在A图中，反射弧中包含三个、两种神经元和两个突触B. B图表示神经纤维受刺激的瞬间膜内外电荷的分布情况，a、c为兴奋部位C. 兴奋在③处和⑥处传导时，信号变化和速度均不同D. 电刺激⑤处，测量③处的电位变化，可验证兴奋在神经元间的传递是单向的4.某同学绘制了如图所示的能量流动图解（其中W1为生产者固定的太阳能），下列叙述中不正确的是（）A. 生产者固定的总能量可表示为（A1+B1+C1+A2+B2+C2+D2）B. 由第一营养级到第二营养级的能量传递效率为D1W 1C. 流入初级消费者的能量为（A2+B2+C2）D. 图解表明能量流动的特点是单向流动、逐级递减5.如图为人体内基因对性状的控制过程，据图分析正确的是（）A. 人体成熟的红细胞中只进行①②过程而不进行③④过程B. X1与X2的区别主要是脱氧核苷酸排列顺序的不同C. 人体衰老引起白发的原因是③④过程不能完成D. 上图反映了基因通过控制蛋白质的结构及酶的合成来控制生物体的性状6.科学的研究方法是取得成功的关键，下列实验研究方法正确的是（）A. 将质壁分离复原的细胞用龙胆紫染色，可以观察染色体的形态变化B. 将天竺葵置于黑暗中一段时间，可用来探究光合作用所需的条件C. 先将淀粉、淀粉酶混合再置于不同温度条件下，可探究温度对酶活性的影响D. 在糖尿病病人的尿液中加入斐林试剂，呈现砖红色沉淀二、探究题（本大题共6小题，共59.0分）7.某科研小组给实验小鼠接种致病菌E建立了细菌性腹泻病模型，并用某复方草药对其进行药效试验。
专题二学业质量标准检测本试卷分第Ⅰ卷(选择题)和第Ⅱ卷(非选择题)两部分。
满分100分，考试时间90分钟。
第Ⅰ卷(选择题共50分)一、选择题(共25小题，每小题2分，共50分，在每小题给出的4个选项中，只有1项是符合题目要求的)1．下列关于微生物营养的说法正确的是( D )A．同一种物质不可能既做碳源又做氮源B．凡是碳源都能提供能量C．除水以外的无机物仅提供无机盐D．无机氮源也提供能量[解析] 同一种物质可以即作碳源又作氮源，如牛肉膏，A错误；自养微生物利用的无机物碳源不提供能量，如蓝藻，B错误；无机物也可提供碳源和氮源，如碳酸盐和硝酸盐，C错误；自然界中一些微生物如硝化细菌，可以以无机氮源氨合成细胞物质，同时通过氨氧化释放的能量获得生长所需能量，D正确。
2．选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物，通过不含有机物的培养基、缺氮培养基、含尿素(不含其他氮源)的培养基，可从土壤中分离出的微生物依次是( D ) A．硝化细菌、放线菌、根瘤菌B．根瘤菌、青霉菌、固氮菌C．异养型细菌、放线菌、硝化细菌D．自养型细菌、固氮菌、分解尿素的细菌[解析] 选择培养基可以根据不同微生物的代谢特点，通过改变培养基的成分，以达到选择某种微生物的目的。
不含有机物的培养基可以分离出自养型微生物；缺少氮元素的培养基可以培养固氮微生物；含尿素(不含其他氮源)的培养基可以分离出能分解尿素的微生物，D 正确。
3．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( D )A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上[解析] 高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；倒平板过程中培养皿的皿盖打开一个稍大于瓶口的缝隙即可，B错误；接种环在火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。
第二章微生物的培养与应用一、单选题1.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是（）A.细菌形态B.菌落C.细菌大小D.细菌结构2.下列关于分离技术或方法的叙述，错误的是（）A. 将细胞匀浆放入离心管中进行差速离心可分离各种细胞器B. 用含有刚果红的培养基可分离出能分解尿素的微生物C. 利用DNA和其它杂质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同的特性分离出DNAD. 使用凝胶色谱法可以分离不同相对分子质量的蛋白质3.为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）．下列关于培养基甲和乙是否能用于分离和鉴别纤维素分解菌说法正确的是（）注：“+”表示有，“-”表示无．A. 培养基甲能，培养基乙不能B. 培养基甲不能，培养基乙能C. 培养基甲和乙都能D. 培养基甲和乙都不能4.在“分离土壤中分解尿素的细菌”实验中，为判断是否起到了分离效果，提高实验结果的可信度，需要精心设置对照．对照组的设置方式为（）A. 牛肉膏蛋白胨培养基上接种相同土壤样液B. 牛肉膏蛋白胨培养基上接种无菌水C. 筛选分解尿素细菌的选择培养基不接种D. 筛选分解尿素细菌的选择培养基上接种无菌水5.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（）[注]“+”表示加入，“-”表示不加。
A.AB.BC.CD.D6.下列关于植物组织培养中灭菌操作的叙述中，错误的是（）A. 外植体用酒精消毒B. 镊子等器械需用酒精灭菌C. 操作者双手用酒精消毒D. 培养基需高压蒸汽灭菌7.下列关于微生物的培养和应用的叙述，错误的是（）A. 通过消毒不能杀死物体内所有的微生物B. 利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目C. 平板划线法和稀释涂布法常用于微生物的接种D. 微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同8.关于微生物培养基的说法正确的是（）A. 牛肉膏不能提供碳源B. 培养硝化细菌不加有机碳C. 刚果红使纤维二糖染色D. 酵母菌酿酒时需持续供氧9.下列关于细菌的叙述，正确的是（）A.不同的细菌所需要的碳源是相同的B.常用固体培养基分离获得细菌单菌落C.培养乳酸杆菌时需要将培养基的pH调至酸性D.不同微生物表现出稳定的相同的菌落特征10.下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是（）A. 微生物培养前，需对培养基进行消毒B. 分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C. 测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法D. 分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源11.某实验小组欲从被石油污染过的土壤中筛选出能分解石油的细菌，下列操作中错误的是A. 利用平板划线法可对细菌进行计数B. 以石油为唯一碳源的培养基可用于筛选C. 目的菌不能利用无机碳源合成有机物D. 稀释土壤时需在火焰旁的目的是防杂菌污染12.要从多种细菌中分离出某种细菌，培养基要用（）A. 加入青霉素的培养基B. 固体培养基C. 加入高浓度食盐的培养基D. 液体培养基二、填空题13.为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌（目的菌）．有人做了如图实验：A、B、C培养基中________ 是唯一氮源，若三次试验结果记录到的菌落数分别为55、56、57，则1ml 土壤浸出液样中含目的菌数为________ 个．14.将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产．请分析回答下列问题：（1）对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过________ 酶连接形成重组质粒．为获得耐酸的醋酸菌，用________ 法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选．将筛选________ 纯化的菌种用的方法长期保存．（2）图1表示温度尧乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响．①醋酸菌能将乙醇转变为________ ，再将其转变为醋酸．②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为________ ℃，如温度过高，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是________③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到________ 左右，才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是________ ．（3）为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1mL稀释菌液均匀涂布在4个平板上曰经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为________ 个/mL．15.微生物及其培养：重金属嗜好性细菌在饮用水微污染和应急突发事件中能够用于水污染控制处理．获得高纯度、安全、高嗜好重金属的细菌，需要进行系列获取样本及其相关培养的实验．实验室选用铅、汞作为重金属实验剂．（1）为了较快取得高嗜好重金属的细菌样本，一般选择________ 的土壤浸出液．要提纯理想的菌种样本，研究小组将实验分两步，第一步是培养与提纯高嗜好重金属的细菌；由于这种细菌是用于饮用水的抗重金属污染，因此，第二步必须进行抗生素敏感性检测．完成下列有关“培养、获取高纯度、高嗜好重金属细菌”的实验设计思路：Ⅰ配制培养基：（2）分别配制含________ 不同浓度系列的________ 态培养基．Ⅱ灭菌：（3）采用高温、高压灭菌．高温高压灭菌有利于杀死________Ⅲ制备培养平板（培养皿中的培养基）；Ⅳ菌种分离与培养：（4）接种：________ 然后在适宜的环境中培养．Ⅴ菌种选择：（5）选取________ 菌种备用．选取安全性菌种的实验，一般采取抗生素敏感性实验法：（6）对抗生素敏感性越强的细菌安全性越高，其判断理由是________ ．（7）用添加抗生素来筛选对抗生素高敏感的细菌，会由于这些细菌死亡而无法得到，试验时为准确定位和获取对抗生素高敏感的细菌，必须配制________ 培养基，在实验操作上，可采取先________ ，然后通过“印章”法来接种到添加抗生素的培养基中培养，以准确定位和获得理想的菌群．三、解答题16.（2017•新课标Ⅰ）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用．回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________．能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________．但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________（答出两点即可）．（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________．（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________（答出两点即可）．四、综合题17.某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能髙效降解脂肪的菌株，请回答：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲，该培养基属于________培养基。
秘密★启用前2018－2019学年度第二学期高二期中测评考试试题生物参考答案及评分参考必修部分第Ⅰ卷必修部分一、选择题1~5CCBDA6~10CDABD11~12BA二、非选择题13.（除标注外每空1分，共9分）（1）CO2Ⅵ（2）类囊体薄膜上④（3）减弱（4）CO2浓度、温度、光照强度（至少填两项，其余合理答案给分）（5）发生酒精和CO2（2分）14.（除标注外每空1分，共9分）（1）常隐（2）AA或Aa1/3（2分）（3）Ⅱ-3Ⅱ-4Ⅲ-4（2分）15.（每空1分，共8分）（1）幼嫩的芽幼嫩的叶发育中的种子（任意两项即可，其余合理答案给分）（2）植物激素的类别和时间豌豆黄化苗茎切段的长度（3）促进（茎）伸长植物生命活动是由多种激素相互作用、共同调节的（其余合理答案给分）（4）缺少（空白）对照增设一组既不加生长素也不加赤霉素处理的实验（其余合理答案给分）第Ⅱ卷选修部分选修一【生物技术实践】一、选择题16~20CDBCA21~25DCCAB二、非选择题26.%（除标注外每空1分，共15分）（1）被地沟油污染（2）碳源氮源（前两空顺序可换）琼脂（3）地沟油苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ出现透明圈（4）（一系列）梯度稀释（2分）涂布器少两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（2分）实验组中非测试因素对实验结果的影响（2分，其余合理答案给分）27.%（除标注外每空1分，共15分）（1）70%的酒精未体现（2）提高萃取效率（2分）防止青蒿素分解（2分）（3）水浴加热有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸（2分）瓶口安装回流冷凝装置（2分）（4）除去萃取液中的不溶物（2分）（5）水蒸气蒸馏法适合提取挥发性较强的物质，青蒿素是非挥发性物质（2分）选修三【现代生物科技专题】一、选择题16~20BDCAA21~25CBACD二、非选择题26.%（除标注外每空1分，共15分）（1）目的基因基因表达载体（2）引物使DNA变性（双链DNA解聚为单链）延伸（3）使目的基因在受体细胞中稳定存在、表达并遗传给下一代（2分）限制性核酸内切酶、DNA连接酶（2分）（4）启动子标记基因（前两空顺序可换）标记基因（5）抗枯萎病蛋白质（2分）抗原—抗体杂交技术27.%（除标注外每空1分，共15分）（1）细胞增殖（2）犬细小病毒细胞①不能无限增殖（2分）（3）筛选出杂交瘤细胞专一抗体检测既能无限增殖又能合成分泌专一性抗体（4）对培养液和所有培养用具进行无菌处理在细胞培养液中添加一定量的抗生素定期更换培养液（任意两点均可得分）95%空气和5%CO2的混合气体（每空2分）（5）产量低、浓度低、特异性差（2分）。
第2讲微生物的培养和应用一、单项选择题（每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求)1．下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是（C）A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的菌落数B．当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大,则应以它们的平均值作为统计结果[解析]当两个或多个活菌连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
一般选择菌落数在30~300的平板计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性.至少涂布3个平板,作为重复组，取其平均值计数能增强实验的说服力和准确性。
2．下列是从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是（C）①土壤取样②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0。
1 mL进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①→②→③→④ B.①→③→②→④C．①→②→④→③ D.①→④→②→③[解析］在分离土壤中某细菌时，应先选取土样（10 g),然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数.3．（2019·甘肃武威十八中高三月考)关于培养基的配制说法不正确的是（B）A．在配制培养乳酸杆菌的培养基时，需加入维生素B．微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pHC．虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐D．配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例[解析］培养基除需要满足碳源、氮源、水和无机盐几种营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求，如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，A 正确；B错误；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，C正确;不同微生物的生长对各种营养物质的需求不同，配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例，D正确.4．（2020·北京高三期末)下列有关微生物培养的叙述正确的是(D）A．通常使用液体培养基分离获得细菌单菌落B．若培养基需要调节pH,应该在灭菌后进行C．用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量D．倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染[解析］常用固体或半固体培养基分离获得细菌单菌落，液体培养基无法分离，A错误；若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行,B错误；显微镜直接计数法是测定培养液中微生物数量的方法，固体培养基上用稀释涂布法直接计数单个菌落数，C错误；平板倒置是避免冷凝的液体掉到培养基上，污染培养基，D正确.5．(2018·上海高三）下表是培养某种细菌的培养基。
微生物的培养与应用（时间：45分钟满分：100分）一、选择题(每小题4分，共48分)1．下列关于配制培养基的叙述，正确的是( )A．配制固体培养基必须加入琼脂B．pH调至6.5～7.5的培养基可培养放线菌C．培养自生固氮菌的培养基中不需添加氮源D．发酵工程一般用半固体培养基或液体培养基解析：选C 在配制固体培养基时，可加入琼脂作为凝固剂，但琼脂并不是唯一的凝固剂；放线菌生长适宜的pH为7.5～8.5，细菌生长适宜的pH为6.5～7.5；发酵工程应用于生产实践一般用液体发酵，可以连续培养，提高产量；自生固氮菌能够将空气中的N2还原为NH3，因此培养基中不需加氮源。
2．某同学用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌纯化培养，下列说法错误的是( ) A．蛋白胨可为大肠杆菌的生长提供氮源和维生素等营养B．牛肉膏蛋白胨培养基需经高压蒸汽灭菌后调节pHC．倒平板操作中，待平板冷却凝固后将平板倒过来放置D．大肠杆菌纯化培养可以采用平板划线法或稀释涂布平板法解析：选B 培养基应先调节pH后灭菌，若先灭菌后调节pH，调节pH时会污染培养基。
3．微生物培养是微生物工程中的基础技术，下列相关叙述正确的是( )A．病毒和细菌的培养基成分相同B．平板划线法中的“线”是连续的、不分区域的C．微生物培养基中并不是都必须添加碳源或氮源D．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒解析：选C 病毒必须寄生在活细胞内才能进行生命活动，如可用活鸡胚培养病毒；平板划线法每次划线前都要灼烧接种环，划线是分区域的；微生物种类不同，对营养物质的需求不同，应根据所培养微生物的需要确定培养基的成分；对培养基和培养皿要进行灭菌，而不是消毒。
4．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。
下列相关叙述错误的是( )A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D．对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理解析：选C 只有菌液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可能会出现两个或两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。
5．某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌的数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。
下列操作错误的是( )A．利用平板划线法对细菌进行计数B．用以石油为唯一碳源的培养基筛选C．采用稀释涂布平板法分离菌种D．称取和稀释土壤样品时应在酒精灯火焰旁解析：选A 分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，但平板划线法不能对细菌进行计数；筛选能分解石油的细菌，要以石油作为培养基中唯一的碳源；筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行，所以称取、稀释土壤样品应在酒精灯火焰旁进行。
6．下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( )A.B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培养基缺少提供生长因子的物质D．该培养基调节合适的pH后就可以用于接种菌种解析：选B 此培养基中没有琼脂等凝固剂，因此为液体培养基；伊红、美蓝能对大肠杆菌起鉴别作用。
糖类(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，也提供生长因子，或作为异养型微生物的碳源。
该培养基调节pH并灭菌后才能接种使用。
7．下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是( )A．利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散获得单个菌落C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D．选择培养基作用的原理是显现某微生物的特征，以区别于其他微生物解析：选D 稀释涂布平板法能分离纯化微生物也能对微生物进行计数；连续划线是将聚集的菌种逐步分散，以获得单菌落；尿素分解菌的分离可以选用以尿素为唯一氮源，且含酚红的培养基；选择培养基是在培养基中加入某一化学物质或改变某一理化性质，使某一微生物正常生长，而其他微生物则被杀灭或生长受到抑制，从而选出所需要的微生物。
8．下列有关分解纤维素的微生物分离的叙述，错误的是( )A．在加入刚果红的培养基中，当纤维素被纤维素分解菌释放的纤维素酶分解后会出现透明圈B．在用刚果红染色时只能先培养微生物再加入刚果红，不能在倒平板时加入C．纤维素酶的发酵方法有液体发酵法和固体发酵法D．纤维素酶的测定方法，一般是对所产生的葡萄糖进行定量的测定解析：选B 刚果红染色有两种方法，一种是先培养微生物再加入刚果红，另一种是在倒平板时就将刚果红染液加入培养基中，然后再培养微生物，两种方法各有优缺点，但都可以应用。
9．微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。
下列有关微生物营养的说法，正确的是( )A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足解析：选D 微生物的营养物质包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。
乳酸菌的碳源是有机物，而硝化细菌可以利用无机物作为碳源；生长因子是微生物体内不能合成的，需要量很小的一些有机物；培养基中营养物质浓度过高会造成微生物细胞失水，不利于微生物的生长、繁殖。
10．农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( )①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦37 ℃恒温箱培养⑧28～30 ℃温度下培养A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．②④⑤⑧ D．①④⑥⑦解析：选C 自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源；自生固氮菌能利用空气中的氮气，培养基中不需要加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖；自生固氮菌生长繁殖的最适温度是28～30 ℃；自生固氮菌对抗生素敏感，培养基中不能加抗生素，所以从土壤浸出液中分离出自生固氮菌对培养基的要求是②不加抗生素、④不加氮素、⑤加葡萄糖、⑧28～30 ℃温度下培养。
11．下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况(A、B、C、H、I、J、K、M为培养基的成分，“＋”表示生长，“－”表示不生长)，请分析细菌不能合成下列哪种物质( )A．H B．I C．K D．M解析：选C 凡添加了物质K的培养基，细菌都能生长，反之则不能生长，说明物质K是细菌不能合成的。
12．现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，你认为它们适于分离( )B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C．甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌D．甲培养基适于分离自养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌解析：选B 固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，需和其他生物结合在一起才能生存的是共生固氮菌，甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌；乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。
二、非选择题(共52分)13．(17分)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________________________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为________个。
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是________________________________________________________________________。
(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：振荡培养能提高培养液中____________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。
解析：(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。
0.1 mL稀释液中平均有(39＋38＋37)/3＝38(个)活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1＝380(个)，则稀释前每毫升水样中活菌数目为380×100＝3.8×104(个)，则每升水样中活菌数目为3.8×104×1 000＝3.8×107(个)。
(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。
在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。
(3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线形，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
(4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
答案：(除标明外，每空2分，共17分)(1)检测培养基平板灭菌是否合格(3分) 3.8×107(3分) (2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3分)(3)B (4)溶解氧营养物质14．(17分)类胡萝卜素中的胡萝卜素是一种常用的色泽鲜艳、对人体有益的天然色素类食品添加剂，且类胡萝卜素可从微生物体中获取。
下图为筛选获得高产红酵母菌菌种的过程，下表为筛选培养过程中获得的部分数据(表中细胞生物量是指培养期间单位体积内所含的生物个体总量)。
请分析回答下列问题：红酵母菌在不同的培养基中类胡萝卜素产量(1)“细胞壁”)。
(2)图中过程①的目的是____________________。
为获得单菌落，可采用____________________法，通过接种环将初筛菌液接种在固体培养基上，后连续划线培养，接种时需要先进行的操作是____________________________________。
(3)表中显示的培养基成分是为红酵母菌生长提供的____________________，图中过程③的目的是__________________________________。
