1、胰岛自身抗体检测技术新进展
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血清C肽及胰岛自身抗体联合检测的临床应用摘要目的:探讨联合检测抗胰岛细胞抗体(ICA)、抗胰岛素抗体(IAA)和抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)对于从临床上诊断为2型糖尿病(T2DM)的患者中发现成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的意义。
方法:选择从2008年6月至2008年9月间来吉林大学第二医院内分泌科住院的临床诊断为T2DM 的患者100例,正常对照组50例,采用酶联免疫法(ELISA)分别检测ICA、IAA、GADA。
采用放射免疫法(RIA)分别检测空腹和餐后2小时的血清C肽水平。
结果:在100例T2DM中,43%胰岛自身抗体阳性,57%胰岛自身抗体阴性,胰岛自身抗体阳性组血清C肽水平:空腹为576.5±227.2pmol/L,餐后2小时为1186.7±489.6 pmol/L,明显低于胰岛自身抗体阴性组血清C肽水平:空腹为823.8±411.6pmol/L,餐后2小时为2017.9±672.3pmol/L,经统计学处理,两者有非常显著性差异(P3讨论从表1联合检测结果可以看出:在正常对照组只检出2例(4%)ICA阳性和1例(2%)GADA阳性,IAA均为阴性。
而在T2DM患者中ICA阳性率为35%(35/100);IAA阳性率为12%(12/100);GADA阳性率为32%(32/100)。
与相应的正常对照组比较,经统计学分析均有非常显著性差异(P<0.01)。
在T2DM的患者中胰岛自身抗体总阳性率(三种胰岛自身抗体中有一种或一种以上阳性即为阳性)为43%(43/100)。
从表2结果来看:胰岛自身抗体阳性组的患者无论空腹还是餐后2小时的血清C肽水平与胰岛自身抗体阴性组比较,结果均显著降低,经统计学处理,两组间有非常显著性差异(P<0.01)。
自身免疫介导的β细胞破坏是T1DM的发病基础。
由于破坏程度、速度的不同以及残存β细胞数量的差异,临床表现有以酮症方式起病的速发型和缓慢型,后者又称为成人隐匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diaetes of adults,LADA),此类患者的特点为成年发病,病情进展缓慢,早期可表现为非胰岛素依赖,胰岛β细胞存在自身免疫损伤,最终发展为胰岛素依赖。
胰岛素自身免疫综合征的诊断标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述胰岛素自身免疫综合征是一种自身免疫性疾病,主要特征是机体对自身产生的胰岛素产生免疫反应,导致胰岛素的分泌受到抑制或破坏。
这种免疫反应主要通过自身产生的抗胰岛素抗体介导,进而引发胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗,从而导致血糖水平失控,引发糖尿病等相关疾病。
胰岛素自身免疫综合征的诊断标准是为了准确识别患者是否患有此病,并且能够及早采取相应的治疗措施。
这些标准主要包括临床表现、实验室检查以及特定的生物标志物等方面的指标。
通过综合评价这些指标可以确定病情的严重程度以及判断胰岛素自身免疫综合征的诊断。
然而,胰岛素自身免疫综合征的诊断并非一件简单的工作,因为其临床表现和病因复杂多样,同时存在与其他疾病的重叠,容易产生误诊。
因此,诊断标准的制定旨在提高诊断的准确性和一致性,以避免漏诊和误诊的问题。
本文将对胰岛素自身免疫综合征的诊断标准进行详细讨论,并探讨其应用与限制。
此外,还将展望未来在此领域的研究与发展方向,旨在进一步提高对胰岛素自身免疫综合征的理解和诊断水平,为其治疗提供更有效的方案。
1.2 文章结构部分内容可以按照以下方式编写:在本文中,将按照以下结构来探讨胰岛素自身免疫综合征的诊断标准:第二部分是正文部分,主要包括胰岛素自身免疫综合征的定义、病因和临床表现三个方面的内容。
在定义部分,将介绍胰岛素自身免疫综合征的概念和基本特征。
在病因部分,将探讨导致胰岛素自身免疫综合征发生的各种原因和机制。
在临床表现部分,将详细描述由于胰岛素自身免疫综合征引起的不同症状和体征,以及可能的并发症。
第三部分是结论部分,主要总结胰岛素自身免疫综合征的诊断标准。
在总结部分,将对已有的诊断标准进行梳理,阐述其主要内容和应用范围。
此外,还将讨论诊断标准的一些限制和问题,并探讨未来发展方向,以期更准确、科学地诊断胰岛素自身免疫综合征。
通过以上结构的安排,本文将全面、系统地介绍胰岛素自身免疫综合征的诊断标准,为相关领域的研究和临床工作提供参考和指导。
糖尿病的研究现状及进展摘要:随着国民经济的迅速发展,生态环境的变化,人们生活节奏日趋加快,糖尿病已日益成为威胁人类健康的公共卫生问题,越来越高的糖尿病发病率及其导致的并发症,严重地影响着患者的身体健康和生活质量。
目前糖尿病已成为继恶性肿瘤和心脑血管疾病之后,危害人们健康的第三大非传染性疾病。
在此紧迫形势下,人类和疾病的斗争并未停顿,糖尿病的研究不断取得进展,不断有新的防治策略和方法应用于临床,人类最终根治糖尿病并非遥不可及。
关键词:糖尿病,胰岛素,药物治疗,细胞糖尿病(diabetes mellitus)是一种常见、多发的内分泌代谢性疾病,系由多种不同的病因造成胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低,导致糖、蛋白质、脂肪代谢紊乱,发生持续性高血糖。
病后倘若得不到有效控制,随病程延长可出现广泛微血管、大血管病变引起系统性损害累及眼、肾、神经、心血管等组织,最终出现这些脏器功能缺陷和衰竭。
病情严重或应激状态时可发生酮症酸中毒、非酮症高渗性昏迷等急性代谢紊乱。
糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。
1型糖尿病是因为胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏,由自身免疫损伤引起,多数年龄较轻。
2型糖尿病是由于胰岛素阻抗作用和分泌缺乏所引起,还有特异型糖尿病和妊娠糖尿病。
1.糖尿病的发病机制1.1 1型糖尿病1型糖尿病是一种特异性针对胰岛B细胞的自身免疫性疾病,对其亚型成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的研究进展很快,LADA与经典的1型糖尿病的自身免疫发病机制相同,不同之处在于其胰岛细胞所受免疫损害呈缓慢性。
LADA 主要具有成年起病、病程进展缓慢且有胰岛自身免疫破坏的证据(如一种或多种胰岛自身抗体阳性)3个特征。
文献报道多倾向把有谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)或血胰岛细胞抗体(ICA) 等胰岛自身抗体阳性的成人起病的 2型糖尿病称为LADA。
LADA患者临床异质性明显,根据 GAD—Ab的滴度不同,LADA又可以分成不同的亚型,有研究发现以GAD—Ab滴度 O.5或 O.1分界均体现明显不同的临床特点,表明LADA甚至糖尿病是一个连续的疾病谱,在 1型和 2型糖尿病之间可有 1.2型、1.5型、1.7型及 1.8型等过渡类型,LADA总体上可称为 1.5型。
糖尿病治疗的新进展糖尿病是一种常见的慢性代谢疾病,主要表现为血糖水平异常升高。
根据世界卫生组织的统计,全球糖尿病患者人数逐年上升,预计到2030年,糖尿病患者将超过4亿人。
随着人们生活方式的改变以及饮食习惯的变迁,糖尿病已经成为全球公共卫生的重要挑战。
本文将探讨近年来糖尿病治疗的最新进展,包括新的药物、疗法以及针对个体化治疗的研究。
一、新型药物的开发1.1 胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂GLP-1受体激动剂是近年来备受关注的一类抗糖尿病药物。
该类药物通过刺激胰岛素分泌并抑制胰高血糖素释放,从而降低血糖水平。
此外,GLP-1受体激动剂还具有促进饱腹感、减轻体重等作用,对2型糖尿病患者尤其有效。
新近上市的药物如利拉鲁肽(liraglutide)和杜拉糖肽(dulaglutide),在降低血糖及其相关并发症方面表现出良好的临床效果。
1.2 钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂SGLT2抑制剂是一种通过抑制肾小管对葡萄糖再吸收来降糖的药物。
这类药物不仅能有效控制血糖,还能改善心衰竭等心血管影响。
近年来,一些新型SGLT2抑制剂进入临床,如达格列净(dapagliflozin)和恩格列净(empagliflozin),这些药物在不同程度上显示了心保护及肾保护作用。
对于糖尿病伴随心血管疾病或慢性肾脏疾病患者,SGLT2抑制剂被认为是优选的治疗方案。
1.3 新型胰岛素制剂胰岛素的使用一直是糖尿病治疗的重要组成部分。
随着技术的发展,新型快速作用胰岛素制剂及长效胰岛素制剂相继问世,这些制剂能够在一定程度上模拟生理胰岛素的分泌模式,提高餐后血糖控制。
同时,通过减少注射次数或改善注射舒适度,这些新型胰岛素制剂提高了患者依从性。
二、个体化医学的发展随着精准医学的发展,个体化治疗成为糖尿病管理的重要方向。
个体化治疗旨在根据患者的具体情况,包括基因组信息、生活方式、共病情况等,为每位患者制定独特的治疗方案。
血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体检测的临床意义2篇血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体是两种常见的临床检测指标,对于胰岛功能异常的判断和糖尿病的诊断起着重要的作用。
本文将分别对血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体的检测临床意义进行介绍。
一、血清胰岛细胞抗体的检测临床意义血清胰岛细胞抗体(islet cell antibody,ICA)是指人体内产生的一种针对胰岛细胞的自身抗体。
血清ICA的检测主要通过间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)进行,可以帮助医生判断患者是否存在胰岛功能异常或自身免疫性糖尿病。
1. 早期糖尿病诊断血清ICA阳性对于早期糖尿病的诊断具有一定的价值。
糖尿病的早期症状不明显,但血清ICA阳性可能提示患者存在自身免疫性糖尿病的风险。
通过早期检测血清ICA阳性,可以及早发现糖尿病可能的发展趋势,有助于及时采取干预措施,延缓疾病进展。
2. 自身免疫糖尿病的筛查与诊断血清ICA是自身免疫性糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)的重要标志物。
T1D是一种由自身免疫反应引起的胰岛细胞破坏和胰岛素分泌不足的疾病。
血清ICA阳性可以暗示患者体内免疫系统针对胰岛抗原产生异常反应,进而导致胰岛细胞受损和胰岛功能受限。
血清ICA的检测结果可以作为筛查和诊断T1D的辅助依据,有助于早期干预和治疗。
3. 鉴别胰岛功能异常的类型血清ICA的检测还可以帮助医生鉴别胰岛功能异常的类型。
血清ICA 阳性与胰岛素依赖性糖尿病(insulin-dependent diabetes,IDD)有较强关联。
如果患者血清ICA阳性,且胰岛素水平明显下降,可以进一步判断为IDD。
对于这类患者,需要密切监测胰岛功能,并在胰岛素治疗方面给予特殊的关注。
二、胰岛素自身抗体的检测临床意义胰岛素自身抗体(insulin autoantibody,IAA)指的是人体内产生的一种针对胰岛素的自身抗体。
胰岛自身抗体和生化指标在糖尿病分型诊断中的应用价值目的分析探讨针对糖尿病患者检测抗胰岛素抗体、抗胰岛细胞抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体的临床应用价值。
方法选取我院2013年8月~2016年8月收治的临床DM患者230例作为研究对象,检测患者的抗胰岛素抗体、抗胰岛细胞抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体。
根据抗体阴性/阳性分为T1DM组和T2DM组,分别比较两组的空腹葡萄糖、空腹胰岛素及空腹C肽浓度。
结果T1DM组患者的IAA-Ab、ICA-Ab以及GAD-Ab阳性率明显高于T2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。
IAA-Ab、ICA-Ab以及GAD-Ab阳性组和阴性组的空腹胰岛素浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05),空腹葡萄糖和空腹C-肽比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论糖尿病患者检测自身抗体,对糖尿病的早期诊断、分型和治疗有很大的指导意义。
[Abstract]Objective To analyze and discuss the clinical application value of detection islet cell antibodies,anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies in the diagnosis of diabetes mellitus.Methods 230 cases of clinical diabetes mellitus patients admitted to our hospital from August 2013 to August 2016 were selected as the study subjects.The indexes of islet cell antibodies,anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies were detected.The T1DM group and T2DM group were divided according to antibody negative/positive classification,the FBG,INS and CP concentrations of two groups were observed.Results The positive rate of islet cell antibodies,anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of patients in T1DM group was significantly higher than that in T2DM group,and the differences were statistically significant (P <0.05).The INS concentrations of islet cell antibodies,anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of positive group and negative group were compared,and the differences were statistically significant (P<0.05);the indexes of FBG and CP of islet cell antibodies,anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of positive group and negative group were compared,and the difference was not statistically significant (P>0.05).Conclusion For diabetes mellitus patients,the detection of insulin autoantibodies have great guiding significance in the early diagnosis,typing and treatment.[Key words]Islet cell antibodies;Anti-insulin antibodies;Glutamic acid decarboxylase antibodies;Diabetes mellitus糖尿病(diabetes mellitus,DM)是臨床常见的慢性疾病,随着我国居民饮食习惯和生活习惯的改变,糖尿病发生率逐渐升高,引起相关专家学者的关注和重视。
胰岛素自身免疫综合征诊断标准胰岛素自身免疫综合征(Insulin Autoimmune Syndrome,IAS)是一种罕见的自身免疫性疾病,其特征是血液中自身抗胰岛素抗体水平升高、低血糖发作和胰岛素过量。
目前,尚未建立IAS的国际统一诊断标准。
然而,根据临床实践和研究,可以参考以下标准进行IAS的诊断。
1. 临床症状和体征:IAS患者常出现反复发作的低血糖症状,例如头晕、出汗、心慌等。
这些症状往往在饭后或睡觉时发作,并可以通过进食或停止胰岛素治疗得到缓解。
体格检查时,可能会触及到肝脾轻度肿大。
2. 血清胰岛素水平:IAS患者血清胰岛素水平通常明显升高,超过正常范围。
正常人胰岛素水平在5-20 μU/mL,而IAS患者可达到数百上千μU/mL。
3. 血清C肽水平:血清C肽是一种合成胰岛素时产生的副产物,可以可靠地反映胰岛素分泌功能。
IAS患者的血清C肽水平通常很低,与胰岛素水平不相符。
4. 胰岛素抗体水平:IAS患者血液中常出现高水平的自身抗胰岛素抗体(IAA),其浓度可超过正常范围。
抗体水平高是IAS诊断中最重要的指标之一。
5. 排除其他原因:在进行IAS诊断时,需要排除其他可能引起低血糖的原因,如外源补充胰岛素过量、胰岛素分泌异常等。
尽管以上标准可以作为IAS的参考诊断标准,但IAS的确诊仍需要进一步的检查和评估。
以下是常用于IAS诊断的辅助检查方法:1. 胰岛素抗体亚型:胰岛素抗体可以分为IgG、IgM和IgA亚型。
IAS患者往往以IgG亚型为主,因此检测胰岛素抗体亚型可以进一步支持IAS的诊断。
2. 胰岛素抗原特异性:在实验室中,可以通过测定患者血液中的胰岛素抗体与不同胰岛素抗原结合的能力来确定胰岛素抗体的特异性。
IAS患者的胰岛素抗体通常与胰岛素的B链结合,不与A链结合。
3. 胰岛素刺激试验:该试验通过给予胰岛素注射液来评估病人对胰岛素的刺激反应。
IAS患者在胰岛素刺激后血糖水平往往不升高或只有微弱的升高,与正常人明显的胰岛素刺激反应不同。
胰岛自身抗体检测技术新进展1型糖尿病(TIDM)患者血清中存在多种自身抗体(即胰岛自身抗体),如胰岛细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体2(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA)、锌转运体8自身抗体(ZnT8A)等等。
检测这些自身抗体对于T1DM的发病预测、诊断和鉴别诊断、治疗监控和预后评估有着重要的临床意义。
由于ICA检测难以标准化,目前应用受到限制。
而GADA和IA-2A检测方法经历的多次改良和标准化,目前已能为临床诊断和治疗监控、以及发病预测提供有力的佐证。
先前的检测方法经历了免疫印迹法、免疫荧光法、免疫沉淀酶活性分析法等,终因操作繁琐耗时,灵敏度和特异性差而极少应用于临床。
目前国内外临床应用得较多的是酶联免疫吸附分析法(ELISA)和放射免疫分析法(R1A),国际标准化的检测方法是放射配体法(RLA)。
1.酶联免疫吸附法分析法酶联免疫吸附法分析法(ELISA)检测GADA和IA-2A在国内外各级医院应用较广,目前检测法主要基于3种不同原理设计。
①包被抗原法(直接法)将GAD抗原加入到96孔酶免板的微孔内,室温放置过夜。
然后各孔加入封闭液,再次室温放置过夜。
洗涤,加入稀释过的血清,室温反应60min,洗涤,加入连接碱性磷酸酶的羊抗人免疫球蛋白抗体,室温反应60min,洗涤。
加入对硝基苯酚磷酸盐溶液,37℃作用30min,加入NaOH溶液终止反应。
在酶免仪上于405nm处检测吸光度,与标准品对照,即可知待测血清GADA水严。
因反应模式限制,该方法最终灵敏度和特异性不高。
②包被抗体法(间接法)将GADA(1A-2A)单克隆抗体包被于96孔微量滴定板内,洗涤,加入纯GAD(或IA-2)抗原,4℃避光固定过夜。
洗涤,加入预稀释的血清,室温作用90min,再加入连接碱性磷酸酶的抗人免疫球蛋白,室温作用60min。
洗涤,加入对硝基苯酚磷酸盐溶液,37℃作用15min,加入NaOH溶液终止反应。
在酶免仪上,于405nm处检测吸光度,与标准品对照,即可知待测血清GADA(或IA-2A)水平。
该方法与直接法相比,灵敏度和特异性有所提高。
③应用亲和素和生物素放大系统的ELISA法亲和素一生物素系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大。
可以在固相上先预包被亲和素,应用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合,通过亲和素一生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。
这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露。
另外,在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代,然后连接亲和素一酶结合物,以放大反应信号。
“前放大”模式是放大了抗原包被量或使抗原表位充分暴露。
其原理是:第一步GAD —生物素(IA-2-生物素)与抗生蛋白链菌素包被的微孔板结合,洗涤后,与样品中GADA(或IA-2A)结合。
清洗后,过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgG 与GAD(或IA-2)抗体结合。
HRP复合物与ABTS底物反应并检测吸光度。
颜色的深浅反映了GADA(或IA-2A)水平。
该方法灵敏度和特异性好,与标准的放射配体检测法结果判定上总体一致性良好,特别对厂低抗体水平的正常人标本以及高抗体水平的T1DM标本符合率高。
“后放大”模式是放大了显色信号。
其原理是:将GAD(或IA-2)抗原包被在ELISA 板上,与血清中的GADA(或IA-2A)结合,洗涤,再加入结合生物素的GAD(或IA-2)与固定好的复合物结合。
这样GAD(或IA-2)—BIOTIN与GADA(或IA-2A)水平成正相关。
加入链酶素过氧化物酶结合,再加入底物TMB显色,读取450nm F的吸光度,与标准曲线对照,即可得到血清中的GADA(或IA-2A)水平。
该方法批内CV为2.4-4.2%,批间CV 3.8-25.6%,灵敏度和特异性好。
这两种放大模式原理不尽相同,但在操作程序上有很多相似之处:都采用了温育振荡方式(﹥200RPM)进行抗原抗体反应,这样能提高抗原抗体分子接触的机会,使检测灵敏度提高。
同时洗板是两种方法的关键步骤,如果清洗不充分会导致检测精密度下降和本底吸光度上升。
我们的研究显示不同原理设计的ELISA试剂盒检测灵敏度和特异性有显著差别。
2.放射免疫分析法放射免疫法检测GADA和IA-2A主要采用采用氯胺T标记法,用125I标记GAD(或IA-2)与血清在分析缓冲液中4℃作用过夜。
加入蛋白A—琼脂糖后于4℃放置1h,沉淀经洗涤3次后进行放射计数。
以阳性参考血清为标准,待测血清的活性定义为阳性血清的沉淀计数百分率。
Masuda等采用此方法检测了217例不同年龄与病程的IA-2A,发现阳性率为47%(103/217),其中新发病的TIDM 阳性率57%(64/113)。
有2.5%(1/40)的Grave's 病患者用此方法检测山IA-2A 阳性,T2DM患者IA-2A阳性率2.5%(5/204)。
该方法与标准的放射配体检测法结果相关系数r为0.78。
我们的研究显示采用RSR放射免疫试剂盒检测GADA与放射配体法—致率达79.3%。
由于采用氯胺T标记法前,必须获得高纯度及高活性的胰岛自身抗原。
且在标记过程中,有可能导致胰岛自身抗原的损伤或空间构象的改变,从而降低方法的灵敏度,故该法较少应用标准化分析。
3.放射配体检测法主要检测方法是采用人GAD65(或IA-2)cDNA插入到原核表达质粒pcDNAⅡ SP6启动子下,构建重组质粒,并转化宿主菌E.coli.DH10B后,通过原位杂交筛选出含重组质粒的阳性菌落,碱法提取质粒进行酶切和测序鉴定。
将连接正确的重组质粒在转染的E.coli.DHl0B中繁殖扩增,并抽提纯化质粒。
GAD65(或IA-2)的质粒在无蛋氨酸的兔网织红细胞裂解液体系中,加入35S标记蛋氨酸(35S-Met),经由体外转录/翻译直接得到35S标记GAD65(1A-2)抗原。
采用Sephadex柱凝胶层析或三氯醋酸(TCA)沉淀等方式去除游离的35S-Met。
35S标记GAD65(IA-2)与血清旋转孵育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。
沉淀物经TBST缓冲液充分洗涤后,加入闪烁液置于液闪仪上计数,结果以抗体指数或国际标准单位形式报告。
目前该方法是国际上检测胰岛自身抗体的标准化方法,我们于1996年在国内首次建立了该方法。
2000年,Woo等报道了一种新的平板放射配体法检测胰岛自身抗体,其采用微孔平板对抗原抗体进行孵育,所需血清量小,适宜于大规模儿童人群的筛查;采用了Millipore分离技术取代了传统的试管法洗涤沉淀复合物,使洗涤更加充分完全,更易于自动化和大样本检测。
目前大多数欧美发达国家的权威实验室均同时建立了该检测法,我们于2004年在国内首次建立了该方法。
4.胰岛自身抗体检测的标准化为了使各实验室检测胰岛自身抗体的结果具有可比性,以降低室间检测结果的变异系数。
近几年,国际标准化重点已放在如何采用有效通用的标准物,以统一的国际标准化单位报告结果。
目前,由国际糖尿病免疫学会(IDS)与美国疾病预防控制中心(CDC)共同举办的糖尿病自身抗体标准化方案(DASP)机构,专门从事胰岛自身抗体检测标准化评估。
通过评估检测方法以及采用新的WHO 国际参考标准物,将结果报告换算成统一的国际单位形式,使各国(地区)实验室间抗体检测结果具有可比性。
其方法是50例新诊断为T1DM的患者血清、100例健康人血清以及WHO参考标准物和稀释血清,发往13个国家的53个实验室盲法检测,并在规定时间内回报结果。
目前,DASP已成为胰岛自身抗体检测的权威评估机构。
我们分别作为国内唯一一家医疗单位参加了2003年和2005年的两次DASP评估,在2003年计估中综合检测质量在全球53个权威实验室中位于第15位,2005年讦估进入第9位,标志着胰岛自身抗体检测水平步入国际先进行列。
5.胰岛自身抗体异质性研究胰岛自身抗体的检测是诊断T1DM的重要依据,而对自身抗体的异质性研究能进一步阐明自身免疫的发生与发展过程。
融合蛋白构建技术初步明确了抗体针对胰岛抗原的粗略区域,单克隆抗体封闭技术进一步辩明了抗体识别抗原某一肽段及表位扩展规律。
然而,自身抗原具有高度构象和线性不连续的表位,抗体实际识别和接触抗原的特定氨基酸难以确定。
利用特异性抗体筛选噬菌体随机肽展示文库结合位点指导下突变技术,有利于分析构象型的表位,最终有望能鉴别抗体互补结合抗原的关键氨基酸残基。
采用生物素化单克隆亚类特异性抗体,并籍助链霉亲合素琼脂糖沉淀剂是目前检测自身抗体亚类/同种型的主要手段。
单克隆抗体技术可用于区分IA-2A/IA-2βA。
采用蛋白变性剂洗脱或裂解法同样能适用于胰岛自身抗体亲合力的检测。
诸多研究显示,在T1DM前期的患者中,抗体识别自身抗原表位的变化呈动态扩展。
对于GADA,最初出现与GAD分子中段结合特性,并迅速扩展到C端,扩展到N端与发病高风险性相关联;对于1A-2A,直接针对JM区和C末端,多IA-2/IA-2β表位的反应性抗体存在与疾病进展相关联。
目前临床研究显示,自身抗体亲和力指数与抗体的滴度并无相关性,但与随后多种抗体阳性发生率明显相关,具有发病预测价值。
多种IgG亚类存在与高滴度的自身抗体水平相关,GADA业类/同种型分析未能区分GAD65-Ab阳性的T1DM一级亲属进展者与非进展者。
而IA-2A IgG亚类/同种型分析能显著改进T1DM风险性评估,且目前发现IgE-IA-2抗体是保护性的指标。
6.新的胰岛自身抗体-锌转运体8自身抗体(ZnT8A)①ZnT8蛋白ZnT8属于CDF(阳离子扩散易化)家族,含369个氨基酸。
为基因SLC30A8(染色体8q24.11)编码,所有的蛋白有着相同的染色体组织结构,即8个外显子和7个内含子。
与IGRP等其他糖尿病自身抗原一样,ZnT8是一种6次跨膜蛋白。
预测序列在第四和第五螺旋结构中包含丰富的组氨酸区域。
哺乳动物与人ZnT8蛋白非常相似(98%保守的氨基酸),提示其进化过程的高度保守性。
②ZnT8表达部位研究证实,ZnT8mRNA主要表达在胰岛细胞上,激光共聚焦显微分析进一步显示,ZnT8仅定位于胰岛p细胞分泌囊膜上。
③ZnT8生理作用在胰岛素合成中,ZnT8能使锌掺入到胰岛素囊泡山,易化锌—胰岛素固相六聚体的形成。
分泌性的锌是胰岛α细胞和β细胞分泌的胰高血糖素以及胰岛素旁分泌和自分泌的调节剂。
研究发现,ZnT8表达增高能刺激锌的富集和增加胰岛素分泌Ins—1E细胞内锌浓度。
而且,ZnT8高表达的细胞显示高的葡萄糖刺激胰岛素分泌(与对照组比较)现象。
糖刺激诱导的ATP/ADP比率增高封闭了ATP依赖钾通道,因此激活浆膜的去极化。