R2A medium

常用培养基配方范文培养基（Culture medium）是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。

常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。

下面列举了一些常用的培养基配方。

1. LB培养基（Luria-Bertani medium）成分：-牛肉提取物：10克-酵母提取物：5克-热可溶性淀粉：10克-氯化钠：10克-水：1升2. NB培养基（Nutrient broth）成分：-牛肉提取物或肉蔻精：8克-酵母提取物：4克-葡萄糖：4克-水：1升3. MacConkey培养基成分：-水解动物蛋白：17克-中和胆盐：1.5克-中性红：0.03克-水：1升4. TSB培养基（Tryptic soy broth）成分：-大豆胨：17克-酵母提取物：3克-水：1升5. BHIA培养基（Brain Heart Infusion Agar）成分：-脑心汤固体：37克-水：1升6.R2A培养基成分：-水解酵母提取物：0.5克-蛋白胨：0.5克-葡萄糖：0.5克-脱脂乳粉：0.5克-黄豆粉：0.5克-高氯酸钠：0.3克-多聚体1466：0.05克-水：1000毫升7.比尔斯氏培养基（BHI培养基）成分：-大豆胨：37克-脑心汤固体：2克-水：1升8. 培养基199（Medium 199）成分：-高锰酸钾：0.015克-硫酸：1.55克-磷酸一氢钠：0.184克-高氯酸钠：8.0克-溴酚蓝：0.4克-d-葡萄糖：5.55克-l-谷氨酸：40.525克-苏打粉：0.84克-水：1升9. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）成分：-苔藓胶原酸：1克-乳糖：1克- 谷氨酸：584mg- 水：1000ml这只是一小部分常见的培养基配方，实际上有很多种不同的培养基，它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。

不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。

饮用水中2-甲基异莰醇降解菌的筛选和生物降解能力初探王方睿;陈克云;赵宇;曹楠;郭庆园;于建伟【摘要】嗅味是饮用水中普遍关注的关键指标之一,其中2-甲基异莰醇(2-MIB)和土臭素(geosmin)导致的土霉味问题最为常见.以2-MIB为目标,探讨从水厂生物活性炭滤池中分离特定降解菌的可行性,并对2-MIB的降解效果进行评估.结果表明,试验筛选得到了三株对2-MIB具有降解能力的降解菌,经16S rRNA系统进化分析,分别为假单胞菌,鞘氨醇单胞菌以及金黄杆菌;初步的降解能力评价表明,三种降解菌对2-MIB的降解效果类似,且均表现出相对较高的降解能力,接种后不经延滞即开始2-MIB的降解;试验期内对2-MIB的降解率可达94％以上,最终可将初始浓度为200 ng/L的2-MIB降解至阈值浓度以下.后续将对于不同环境条件以及实际连续流操作条件下的降解效果和运行方式进行进一步的评价,探讨其用于实际工艺中强化生物降解2-MIB的可行性.【期刊名称】《净水技术》【年(卷),期】2018(037)0z2【总页数】4页(P1-4)【关键词】嗅味;2-甲基异莰醇;降解菌;降解效果【作者】王方睿;陈克云;赵宇;曹楠;郭庆园;于建伟【作者单位】人大附中朝阳分校,北京100028;中国科学院生态环境研究中心,北京100085;中国科学院生态环境研究中心,北京100085;北京市自来水集团,北京100031;北京市自来水集团,北京100031;中国科学院生态环境研究中心,北京100085;盐城工学院,江苏盐城224051;中国科学院生态环境研究中心,北京100085【正文语种】中文【中图分类】TU991.2嗅味是饮用水中普遍关注的关键指标之一。

水源水中藻类等微生物的过度增殖是季节性嗅味问题发生的主要原因之一，其中2-甲基异莰醇（2-MIB）和土臭素（geosmin）导致的土霉味问题最为常见[1-3]。

对此类嗅味物质，自来水厂的混凝沉淀过滤等常规工艺去除效果有限，一旦水源水中发生此类嗅味问题，多采用粉末活性炭（PAC）投加的方式加以应急处理。

ႂႨඣᇏࠫᇕ༥ऩ࠹ඔٚم֥бࢠ鲁巍,王云,张晓健(清华大学环境科学与工程系,北京　100084)ᅋေ:比较采用不同培养基的平板计数(Plate Counts ,PC )方法,以及不同荧光染色剂的显微镜直接计数方法与常规计数方法的差别.研究认为,常规平板计数方法并不能准确反映饮用水中实际存活的细菌数量;吖啶橙直接计数(Acridine Orange DirectCounts ,AODC )的结果最高,较常规平板计数方法高出3～4个量级;活细菌直接计数(Direct Viable Counts ,DVC )中,DVC 2N.A.、DVC 2CTC 和DVC 2BacLight 等计数方法的结果较常规平板计数结果高出2～3个量级.以地表水为水源的水厂出水中活细菌数占总细菌数的比例在10%左右.ܱ࡯Ս:饮用水;直接计数;平板计数;活细菌直接计数;细菌ᇏ๭ٳোݼ:X832;TU991125　໓ངѓ്઒:A ໓ᅣщݼ:025023301(2004)0420167203൬۠ರ௹:2003208207;ྩרರ௹:2003209225ࠎࣁཛଢ:国家自然科学基金资助项目(50238020);国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2002AA601140)ቔᆀࡥࢺ:鲁巍(1978～),男,博士研究生,主要从事水污染防治技术研究.Methods of Enumeration of B acteria in Drinking W aterL U Wei ,WAN G Yun ,ZHAN G Xiao 2jian(Department of Environmental Science and Engineering ,Tsinghua University ,Beijing 100084,China )Abstract :Methods of the enumeration of total bacteria and Coliform in drinking water were researched in this paper.The differences between heterotrophic plate count and direct viable count method were compared.It is concluded that the total number of bacteria in R2A medium is one order of quantity higher than the traditional plate count agar ,and the results of acridine orange direct counts (AODC )is the highest.S ome different staining methods in direct viable count were also compared in this paper ,such as nalidixic acid ,CTC staining and BacLight staining.The proportion of the live bacteria to the dead is about 10%.K ey w ords :drinking water ;enumeration ;PC ;DVC ;bacteria 在饮用水处理中,出厂水加氯消毒后进入管网,部分存活的微生物和管网中生物膜中的微生物会利用管网水中的微量可生物降解有机物进行再生长,引起所谓的生物稳定性问题[1].长期以来,国内多采用异养菌平板计数法(Heterotrophic Plate Counts ,HPC )和最大或然数法(Most Probable Number ,MPN )来测定饮用水中的活菌数.但由于饮用水中的贫营养环境有别于传统培养基提供的富营养环境,大多数在显微镜下观察到的细菌不能在传统培养基中生长(Nonculturable ),致使活菌计数结果偏低.近些年来,国外先后应用吖啶橙染色直接计数(Acridine Orange Direct Counts ,AODC )、活菌直接计数(Direct Viable Counts ,DVC )等方法对饮用水中的细菌总数及活菌数进行快速、直接的镜检计数.一些新的染色方法,如采用52氰基22,32联甲苯四唑盐酸盐(52Cyano 22,32ditolyltetrazolium chloride ,CTC )、核酸探针(BacLight )等对活细菌计数,都取得了很好地效果.国内这方面的研究却未见报道.本文应用AO 、CTC 、BacLight 等试剂染色,采用显微镜直接计数对饮用水中的细菌数量进行测定,并与常规平板计数方法所得结果进行了比较与讨论.1൫ဒҋਘބٚم111　水样的采集本试验所用水样分别取自实验室自来水和北方某市管网水.水样均采用无菌磨口玻璃瓶采集.实验室自来水未经特殊处理直接测定.现场水样采集后立即放入冷却箱中保存,4h 内测定.消毒试验所用水样为实验室自配水.112　细菌计数11211　总细菌计数(1)AODC 法[2]　水样采集后迅速加入甲醛固定,甲醛最终浓度2%;取10mL 固定后水样加入015mL 012%吖啶橙(Acridine Orange ,Sigma 公司)染色1～2min ;将染色水样经滤膜(孔径012μm ,直径25mm ,黑色聚碳酸脂滤膜,Nuclepore 公司)过滤;过滤后将滤膜置于载玻片上,用落射荧光显微镜(日本Nikon ,EF 2D 型)计数视野中发橙色或绿色荧光的菌体;显微镜光源为200W 汞灯,激发光滤光片第25卷第4期2004年7月环 境 科 学ENV IRONM EN TAL SCIENCEVol.25,No.4J uly ,2004๭1༥ऩ࠹ඔࢲݔFig.1　The results of bacteria enumeration为450～490nm ,光束分离滤光片510nm ,阻挡滤光片520nm.(2)BacLight 染色直接计数法　将试剂按照产品要求配制后,取2mL 固定后水样加入60μL 所配BacLight 染色试剂,避光培养15～20min ;然后按照AODC 处理方法制片,观察计数视野中发红色或绿色荧光的菌体.所用滤光片波段同AODC 相同.11212　活细菌计数(1)DVC 法　方法①(DVC 2N.A.):向水样中加入01002%萘啶酮酸(N.A.,Nalidixic Acid ,Fluka 公司)和01025%酵母膏(均为最终浓度),避光,25℃培养6h ,然后2%甲醛固定,再按照AODC 法直接镜检计数.视野中长大或变粗的菌体被认为是活菌;方法②(DVC 2CTC ):将012mL 1167%的CTC 加入10mL 水样中(CTC 最终浓度1mmol/L ),避光室温培养4h ,然后2%甲醛固定,再按照AODC 法直接镜检计数视野中的红色菌体;方法③(DVC 2BacLight ):参见11211,只镜检计数视野中发绿色荧光的菌体.(2)HPC 法　采用传统营养琼脂培养基和R2A 培养基进行平板计数,详见相关检验手册[3].R2A 培养基基本组成为:酵母浸膏015g ,蛋白胨015g ,酸水解干酪素015g ,葡萄糖015g ,可溶性淀粉015g ,丙酮酸钠013g ,K 2HPO 4013g ,MgSO 4・7H 2O 0105g ,琼脂15g ,溶于1L 水.11213　总大肠菌群计数消毒试验考察消毒剂的灭菌效果,配水中投加的大肠杆菌菌液为实验室自培养.(1)滤膜法　常规检测方法,详见检验手册[3].(2)荧光显微计数　参见11211,11212.2൫ဒࢲݔაษં211　细菌计数方法比较应用AODC 、DVC 及HPC 等方法对实验室自来水及城市管网水中细菌总数及活菌数计数的结果见图1,表1中计算了活菌数占总细菌数的比例.і1ࠃऩඔᅝሹ༥ऩඔ֥б২/%Table 1　Proportion of the live bacteria to the total/%样品计数方法N.A./AODCCTC/AODC Bac 2live/AODC HPC/AODC营养琼脂R2A 实验室自来水13191717251701094111某水厂出水6119181217未检出01068管网水818101512140100770112管网末梢水7191113915010100112 由图1可以看出,AODC 和BacLight 2种方法得出的总细菌数无显著性差异.北方某市各点水样中细菌总数在105个/mL 量级,活菌数在104个/mL 量级.实验室自来水中细菌总数在104个/mL量级,活菌数在103个/mL 量级.以营养琼脂作为培养基的平板计数只有几十个CFU/mL ,以R2A 作为培养基的平板计数也只达到102个/mL 量级.实验室自来水是高校自供水,水源为地下水,所调查水厂的水源为地表水,水源水质差异可能是引起细菌数差异的因素之一.由表1看出,实验室自来水中活菌数所占比例在10%～25%之间,而以地表水为水源的水厂出水中活菌数所占比例基本在10%左右.活菌计数中计数结果大小顺序为:BacLight >CTC >N.A.>R2A >营养琼脂.R2A 培养基是一种贫营养培养基,其提供的培养条件更接近饮用水中的贫营养环境,因此其结果较常规营养琼脂培养基高.但是由于自然环境中大多数微生物是不可培养的(Nonculturable ),所以DVC 结果又远高于平板计数结果.萘啶酮酸可以抑制细菌DNA 的复制,但不影响细胞中其它合成途径的继续运转,在一定浓度营养物存在下,菌体伸长、变大(如图2所示).但是由于部分格兰氏阳性及格兰氏阴性菌对萘啶酮酸有抗性,低浓度的NA 不能抑制它们的繁殖,致使计数结果出现偏差[4].BacLight 是近年来由分子探针公司研制出的新型荧光染色剂,由SYTO9和碘化丙锭(propidium iodide )2种核酸探针组成.SYTO9能将所有细菌染色,发绿色荧光,而碘化丙锭能穿透细胞膜受损细胞,发红色荧光(如图2所示)[5].由于碘化丙锭只能穿透受损细胞,因此部分细胞膜完好但实际不能存活的部分细菌未能被染色,这就导致了BacLight 的活菌计数结果高于CTC 、NA 的计数结果.应用CTC 进行活菌计数时,由于细菌的呼吸作用,CTC 被还原成CTF (CTC Formazan ),其在荧光显微镜下发红色荧光(如图2所示)[6],从理论上看,CTC 方法的基本原理是利用活细胞的呼吸作用,因此能够比较准确地反映活细菌的数量,而且该方法的试验费用相对较低,适合实验室研究使用.212　消毒试验大肠杆菌计数๭2ࠃऩ࠹ඔم႐ܻಙ೤๭ཞ(ᅶோनູՂऩ஡အު෮ജ,٢նПඔູ࣍රᆴ,ࣇ܂ҕॉ)Fig.2　The images of fluorescent staining methods 实验室通过配水试验,考察一定浓度余氯对大肠菌群的灭活效果,大肠菌群计数方法采用常规膜滤法和DVC 方法.当初始加氯量015mg/L 时,存活细菌数与时间的关系如图3所示.๭3թࠃ༥ऩඔაൈࡗ֥ܱ༢Fig.3　The relationship of time and the number of the live bacteria从图3中可以看出,AODC 计数结果基本不随时间变化,始终停留在初始量级105.N.A.,CTC ,BacLight 3种药剂的DVC 计数结果基本相同,从105逐渐下降到103.传统的膜滤法平板计数结果同样都随着时间的推移而逐渐减少,但是计数结果与DVC 方法存在显著的差异,这说明常规计数方法并不能准确反映水体中微生物的存活状况.3ࢲં (1)显微镜直接计数的结果远远高于常规平板计数,更能准确反映饮用水中的微生物数量.(2)活菌计数中计数结果大小顺序为:DVC 2BacLight >DVC 2CTC >DVC 2N.A.>R2A >营养琼脂.其中CTC 方法能够比较准确地反映活细菌的数量,而且该方法的试验费用相对较低,适合实验室研究使用.(3)在考察消毒剂对细菌的灭活效果时,直接计数可以更准确地反映细菌存活的状况.ҕॉ໓ང:[1]　王占生,等.微污染水源饮用水处理[M ].北京:中国建筑工业出版社,1999.236～243.[2]　Hobbie J E ,et e of nuclepore filters for counting bacteriaby fluorescence microscopy [J ].Appli.Environ.Micriobiol.,1976,33(5):1225～1228.[3]　俞毓馨,等.环境工程微生物检验手册[M ].北京:中国环境科学出版社,1990.136～144.[4]　Kazuhiro K ogure ,et al .An improved direct viable countmethod for aquatic bacteria[J ].Arch.Hydrobiol.,1984,102:117～122.[5]　Lina Boulos ,et al.L IVE/DEAD BacLight TM :application of a new rapid staining method for direct enumeration of viable and total bacteria in drinking water [J ].J.Microbiological Methods.,1999,37:77～86.[6]　Rodriguez G G ,et e of a fluorescent redox probe fordirect visualization of actively respiring bacteria.Appli.Environ.Micriobiol.,1992,58(6):1801～1808.。

R2A琼脂培养基即用型平板说明书【产品名称】通用名称：R2A琼脂英文名称：R2A Agar【型号规格】Φ90mm，10皿/包。

【预期用途】用于纯化水中菌落总数的测定。

【检验原理】蛋白胨、酵母浸出粉、酪蛋白水解物提供氮源及生长因子；葡萄糖、可溶性淀粉提供碳源亦可吸收细菌代谢过程中产生的废物；丙酮酸钠有利细菌生长；磷酸盐是pH稳定剂；琼脂是凝固剂。

【组成成份】由蛋白胨、酵母浸出粉、酪蛋白水解物、葡萄糖、可溶性淀粉、丙酮酸钠、磷酸盐和琼脂等组成。

【使用方法】样本按药典标准规定进行前处理后接种于培养基，30～35℃培养18～24h 后，观察结果。

【检验结果】枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌生长良好。

【注意事项】1.该培养基仅用于科研研究。

2.采集的标本必须尽快接种培养，以保证结果准确。

3.所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。

【贮存条件】2～25℃，避光保存。

【有效期】有效期6个月。

【参考文献】1.中国药典2020年版2.SN/T1538.1-2005培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3.SN/T1538.2-2007培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南4.WS/T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程5.GB4789.28-2013食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求【基本信息】生产企业名称：上海申启生物科技有限公司住所：上海市普陀区绥德路118弄60号4层、56号2层联系方式：电话：************************传真：************生产地址：上海市普陀区绥德路118弄62号4层邮编：200331网址：/。