原生质体融合构建葡萄酒降酸酵母的研究

葡萄酒降酸实验
方金
【期刊名称】《中外葡萄与葡萄酒》
【年(卷),期】1999(000)002
【总页数】2页(P54-55)
【作者】方金
【作者单位】新疆伊犁葡萄酒厂
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.6
【相关文献】
1.降酸方法对葡萄酒降酸效果的影响 [J], 陈继峰;Bill Kremer
2.葡萄酒的降酸方法综述：兼谈山葡萄酒的降酸 [J], 邓军哲;屈慧鸽
3.原生质体融合葡萄酒酵母用于葡萄酒降酸 [J], 高玉荣
4.寒地"贝达"葡萄酒混合降酸工艺初探 [J], 刘云清; 肖明; 胡禧熙; 李艳青; 朱磊
5.不同降酸剂处理对葡萄酒中赭曲霉毒素A含量的影响 [J], 刘鸿;陈静;李雅善;王艳君;张瑛莉;南立军;刘丽媛
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葡萄酒及果酒的微生物降酸技术摘要：本文主要讨论了了目前国内外对以葡萄酒为主的果酒降酸工艺进展，总体上分为物理降酸法、化学降酸法、微生物降酸法；其中微生物降酸法是目前最常用的方法，包括苹果酸—乳酸发酵和苹果酸- 酒精发酵法。

关键字：果酒，微生物降酸果酒是以新鲜水果或果汁为原料,采用全部或部分发酵醜制而成,酒度在体积分数上为7-18%的各种低度饮料酒[1]。

葡萄酒作为果酒中一个重要的分支，现已被广大消费者所接受并认可，酒中保留了水果原有的糖类、氨基酸、有机酸和矿物质等成分。

有机酸是果酒中重要的风味物质，有机酸的存在，可加速多糖的转化和果胶物质的分解，促进果酒的老熟和澄清；能与酒精起酯化反应生成酯，使果酒具有酯香；能使果酒具有清凉爽口的风味。

果酒中适量的酸可以使果酒具有爽口感，而过高的酸会使酒体口感粗糙，刺舌、有锐利感。

调节果酒酸度使其保持在合适的范围内，是果酒酿造过程中的重要环节[2]。

1 酒的降酸方法目前国内外对果酒降酸主要采用物理降酸法、化学降酸法和生物降酸法。

各类降酸方法的技术措施、适用情况和使用效果各不一样。

生产中常常将不同降酸方法有机结合起来达到更好的效果[3]。

1.1 物理降酸法低温冷冻降酸法。

葡萄酒中主要有机酸盐——酒石酸氢钾在纯水和葡萄汁中溶解度大，而在酒液中溶解度小且其溶解度和温度成正比。

该降酸法采用自然降温或利用冷冻设备进行冷冻处理，使酒石酸氢钾结晶析出，达到降酸的目的，通常可以降低酸度0.5～2.0g/L不等(以酒石酸计)[4]。

1.2 化学降酸法化学降酸法的原理是利用加入的碱性化学试剂和果汁中的酸发生中和反应，来达到降低果汁酸度的目的。

常用的降酸试剂有碳酸钙、氢氧化钙、碳酸钾、碳酸氢钾、酒石酸钾、氢氧化钠等。

此方法发生的化学反应可能会对果汁的口感和色泽产生影响[5]。

1.3 生物降酸法由于物理降酸法和化学降酸法一般只针对葡萄酒中含量较高的酒石酸，对生理代谢较活跃的苹果酸等不起作用，且对酒质的负面影响较大。

用细胞融合法制成新酵母酿制白葡萄酒
2005-3-30新闻发布：中国红酒网
用细胞融合法制成新酵母酿制白葡萄酒
一种西班牙产的白葡萄酒-谢利酒，味香爽口，欧美人视作饭前饮用的名酒，享有很高的声誉。

日本国税厅酿造试验所采用生物工程尖端技术细胞融合的办法制成高性能谢利酵母来酿制这种白葡萄酒获得了成功。

制作方法
该试验所制作这种新酵母的办法是，首先从自然界中分离出两种酵母即具有制造白葡萄酒能力的产膜性酵母（聚集在酒的表面上繁殖起来成膜状的酵母）和具有抑制开杀灭别种酵母繁殖能力的抑制性酵母。

但是，这两种酵母各有其不足之处，前者抵卸杂菌侵入和繁殖能力较弱，后者制造白葡萄酒的能力很差。

为制成兼备这两种酵母性质的谢利酵母，分别将其胞子取出，用药剂使细胞壁溶化制成赤裸的原生塑性物，再加入媒介物聚乙二醇，用培养基使两种原生塑性物互相合到一起而成为融合细胞。

形成这种融合细胞的几率很小，只有1%左右，通过精心挑选出来用动物胶裹起来进行培养，细胞壁再生而形成一个独立单位的酵母。

利用这种新酵母对以甲州葡萄酒为原料进行试验的结果十分理想。

现已酿制成了出色的白葡萄酒。

使用新技术意义
据认为，把两个不同种类的酵母强行融合起来，并使融合成的融合细胞加以巧妙的繁殖而制成新的酵母这一技术，为今后改良酵母开辟了新途径，已引起了各有关方面的关注。

而且，把最尖端的生物工程中的细胞融合办法应用到传统的酿酒技术中去，对守旧的酿造技术体系将成为一个革新的起点。

原生质体融合法选育酵母菌株酿造低甲醇高总酯蒸馏酒
林小江;周世水
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2014(000)013
【摘要】[目的]选育酿造低甲醇高总酯蒸馏酒的酿酒酵母菌株.[方法]利用原生质体融合技术,对低甲醇酿酒酵母与高总酯酿酒酵母进行融合.[结果]选育出的酵母菌种酿造蒸馏酒中的相对甲醇含量为145.31 mg/L,比初始低甲醇菌株降低了22.8％,总酯含量为0.79g／L,增加了83.7％.[结论]原生质体融合法成功选育出低甲醇高总酯的酿酒酵母菌株.
【总页数】2页(P4050,4054)
【作者】林小江;周世水
【作者单位】华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006
【正文语种】中文
【中图分类】S609.9;TS261.1;TS262.3
【相关文献】
1.青岛啤酒酵母和高浓酵母原生质体融合选育高浓酿造菌株 [J], 李居宁;易庆平
2.原生质体融合技术及其在酿酒酵母菌株选育中的应用 [J], 魏运平;叶俊华;赵光鳌
3.高活性高酒精产率产酯酵母菌株的选育 [J], 王瑞明;李敏
4.优良的啤酒酿造酵母菌株JW1-3的选育及其中试 [J], 王芬;由媛;全丽;戴玉聪;刘
月英
5.利用原生质体融合技术选育高产虾青素酵母菌株 [J], 刘虹;程秀芳;张志焱;谷巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

专利名称：一种葡萄酒降酸酵母及其培养方法专利类型：发明专利
发明人：李华,刘树文,王华,何忠宝
申请号：CN200510041935.5
申请日：20050411
公开号：CN1721524A
公开日：
20060118
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种葡萄酒降酸酵母及其培养方法，其通过酿酒特性优良的葡萄酒酵母与优良酒酒球菌SD－2a间的原生质体融合，构建出了在酒精发酵的同时能够进行MLF的降酸酵母。

本发明是以葡萄酒酵母1450及酒酒球菌SD－2a为亲株，应用原生质体融合技术构建的，葡萄酒降酸酵母细胞形态、大小、菌落特征均与葡萄酒酵母1450相似。

申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省杨凌示范区西农路西北农林科技大学葡萄酒学院
国籍：CN
代理机构：西安新思维专利商标事务所有限公司
代理人：韩翎
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复合诱变和原生质体融合选育S-腺苷甲硫氨酸酿酒酵母高
产菌株的开题报告
一、选题背景
S-腺苷甲硫氨酸（SAM）在酿酒过程中具有重要的作用，可以促进酵母细胞的生长和发酵效率。

因此，高产SAM的酿酒酵母菌株一直是酿酒行业关注的研究方向之一。

目前，一些研究者通过单一菌株的选育和基因工程技术来提高酿酒酵母的SAM产量和酿酒性能，但效果并不理想。

因此，采用复合诱变和原生质体融合技术选育SAM高产酵母菌株，是一种新的思路和方法。

二、选题意义
选育SAM高产酵母菌株，不仅可以提高酿酒的加工效率和经济效益，还可以减
少对外界添加SAM的依赖，从而降低酿酒成本。

此外，该研究还将为酿酒酵母的选育和基因工程技术的进一步发展提供新的参考和思路。

三、研究内容和方法
本研究的主要研究内容为利用复合诱变和原生质体融合技术选育SAM高产酵母
菌株。

其中，复合诱变是通过同时利用物理、化学和生物等多种方法诱发酵母基因突变，从而选择SAM高产菌株。

原生质体融合是将两个不同的酿酒酵母菌株的原生质体通过化学和电融合的方法融合在一起，从而实现SAM合成途径上的基因重组和优化。

四、预期成果
本研究预期通过复合诱变和原生质体融合技术，筛选出SAM高产菌株，并对其
基因组进行分析和比较，从而确定SAM增加的可能机理和途径。

该研究将为酿酒酵母的选育和基因工程技术的进一步发展提供新的参考和思路。

降酸酵母在葡萄酒酿造中的研究进展及应用
降酸酵母（Acid-reducing yeast）是一种在葡萄酒酿造中使用的酵母菌，其主要功能是通过代谢产生的酶来降低葡萄酒中的酸度。

酸味是葡萄酒口感的一个重要组成部分，但高酸度可能使葡萄酒口感过于酸涩。

降酸酵母的研究进展和应用包括以下几个方面：
1.酸降解酶的研究：降酸酵母通过产生酸降解酶来降低葡萄
酒中的酸度，其中包括酒石酸酶、苹果酸酶等。

研究人员
致力于探索酵母菌的代谢途径和基因调控机制，以提高酸
降解酶的活性和稳定性。

2.选择和改造降酸酵母菌株：研究人员通过对不同酵母菌株
的筛选、培养和改造，选择具有较高酸降解能力的菌株。

这些菌株可能表现出更高的酸降解酶活性和更好的适应性，使其在葡萄酒发酵过程中表现出更好的降酸效果。

3.降酸酵母的应用：降酸酵母的应用可以通过直接添加酵母
菌或混合发酵的方式来实现。

添加适量的降酸酵母可以在
发酵过程中促进酸降解酶的产生和酸的降解，从而降低葡
萄酒中的酸度，改善口感和平衡。

4.评估和控制降酸效果：对降酸酵母的使用效果进行评估和
控制是研究的重点之一。

通过检测酸度、pH值、有机酸
含量等指标来评估降酸效果，并结合葡萄品种、酿造工艺
等因素进行调整和优化。

降酸酵母在葡萄酒酿造中的研究主要关注于提高酸降解酶的活性和稳定性，选择和改造适宜的降酸酵母菌株，优化降酸效果的评估和控制等方面。

这些研究为葡萄酒的酸度调控提供了新的途径和方法，有助于生产出口感更好、口味更平衡的葡萄酒产品。

然而，对降酸酵母的研究仍在不断发展，需要进一步的实验和应用验证，以实现更理想的酸度调控效果。

运用紫外线灭活原生质体融合技术选育高产酯酒精酵母的研究赵华;赵树欣
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】1996(000)005
【摘要】本文运用紫外线灭活原生质体融合技术，在对酒精酵母（Ｋ酵母）和产酯酵母（Ｆ２）的原生质体形成率及紫外线灭活条件进行研究的同时，通过筛选不影响亲株代谢性能的天然耐药性为遗传标记，简化融合子检出步骤，成功地对酒精酵母和产酯酵母进行了属间细胞融合，获是６株遗传性状稳定的融合子。

经发酵实验，最终获得既具有酒精酵母的高产酒特性，又具有产酯酵母的高产酯特民生的发酵性能稳定的融合子ＦＫ３－２７。

【总页数】4页(P13-16)
【作者】赵华;赵树欣
【作者单位】天津轻工业学院食品系白酒实验室;天津轻工业学院食品系白酒实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.11
【相关文献】
1.双亲灭活原生质体融合选育高性能酒精酵母菌的研究 [J], 易弋;黎娅;程谦伟;龚熠;黄翠姬;伍时华
2.用原生质体融合技术选育2—酮基—L—古龙酸高产菌株的研究 [J], 吕群燕;王
书棉
3.双灭活原生质体融合法选育耐高温高产酒精酵母的研究 [J], 杨汝德;朱文生
4.原生质体融合技术选育赖氨酸高产株的研究Ⅱ.原生质体融合试验及融合株选育[J], 周婉冰;云逢霖
5.原生质体融合技术选育赖氨酸高产菌株的研究Ⅰ.原生质体形成与再生条件的研究 [J], 周婉冰;周惠;云逢霖
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果酒降酸方法大全果酒是以野生或人工种植物的果实为原料发酵而成的低酒精度饮料，其保留了水果原有的糖类、氨基酸、有机酸和矿物质等成分。

有机酸是果酒中重要的风味物质，有机酸的存在，可加速多糖的转化和果胶物质的分解，促进果酒的老熟和澄清；能与酒精起酯化反应生成酯，使果酒具有酯香；能使果酒具有清凉爽口的风味。

果酒中适量的酸可以使果酒具有爽口感，而过高的酸会使酒体口感粗糙，刺舌、有锐利感。

调节果酒酸度使其保持在合适的范围内，是果酒酿造过程中的重要环节。

因此，本文研究果酒降酸方法，并且对果酒降酸的发展趋势进行探讨与展望。

1物理降酸法1.1低温冷冻法低温冷冻法主要利用冷冻设备对葡萄酒进行降温，使酒体中的酒石酸盐类结晶沉淀，从而达到降酸的目的，通常可以降低酸度0.5〜2.0g/L不等（以酒石酸计）。

用低温冷冻降酸法处理葡萄酒，虽然在降酸过程中保证了酒原有的品质且不引入其他影响酒质的杂质，但是降酸种类单一，主要是降低酒中游离的酒石酸，而对乳酸和辛辣感较强的苹果酸无作用。

1.2稀释降酸法采用稀释降酸法对山楂干酒进行降酸处理，在每100mL山楂果汁中分别按不同比例添加白砂糖，用玻璃棒搅拌均匀后监测 pH 的变化, 当pH不再变化时即达到酸稀释平衡。

然后用滤纸过滤，测定其滴定酸度。

研究表明，稀释法降酸效果明显，成本低且操作工艺简便，但是高浓度的糖度会使果汁变的浑浊不通透，黏稠度增加。

2化学降酸法生产中常常利用碳酸钙、碳酸氢钾、酒石酸钾、双盐等进行化学降酸，化学降酸具有操作方便、易控制且降酸效果明显等优点。

但其化学反应往往会影响酒液的口感和色泽，同时由于金属离子的大量溶入，可能会带来酒液的不稳定，如失光、混浊等现象。

2.1CaCO3降酸CaCO3作为降酸剂在葡萄酒上的应用较为广泛。

CaCO3降酸反应快，成本低，使用方便，其限用量为1.5g/L。

但不要将CaCO3直接加入葡萄汁中，因为加入的C CaCO3和酒石酸反应，产生酒石酸钙，会直接降低酒的质量，给酒带来一种邪味。

酵母原生质体融合××××××××××酵母有发酵工业的灵魂之称，其发酵性能的好坏直接影响发酵产品的质量，同时也决定着发酵工艺流程和运转周期及运转费用[1]。

因此，选育优良的酵母菌种在发酵工业中具有重要的意义[2]。

对酿酒酵母的选育始终是酿酒工作者所要从事的重要工作之一。

好的酿酒酵母能够提高酒的质量和产量，赋予酒良好的风味；能够简化工艺流程，减少设备投资；能够缩短发酵周期，降低运转费。

原生质体融合育种( protoplast fusion)是20世纪60年代发展起来的基因重组技术。

通过两个遗传性状不同的亲株原生质体融合从而达到杂交目的。

1960年法国的Barsi研究小组在培养两种不同动物细胞混合时发现了自发融合现象，同时日本的Dkada发现仙台病毒可诱发内艾氏腹水病细胞彼此融合，从而开始了细胞融合的探索。

国内外对原生质体融合技术的研究都比较成熟, 一般认为酵母菌原生质体融合技术的关键点有原生质体的制备和再生、原生质体的融合以及融合子的筛选等。

传统的对酿酒酵母的选育方法主要有自然分离、连续培养和诱变育种[3]。

近年来重组技术，基因工程和原生质体融合技术迅速发展，得到了广泛应用。

两个或两个以上的细胞经过自然的或者人为的作用合并成为一个细胞叫融合细胞，这个过程就称为细胞融合过程。

用微生物作材料进行细胞融合，必须消除细胞壁和细胞膜。

通常采用酶解作用破除细胞壁，采用聚乙二醇促使细胞膜融合。

细胞融合之后，还经过细胞质融合，细胞核重组，细胞壁再生等一系列过程才能形成具有生活能力的新菌株。

融合后的细胞有两种可能：一是染色体DNA不发生重组，两种细胞的染色体共存于一个细胞内，形成异核体，这是不稳定的融合。

另一类是两亲本细胞核染色体DNA真正发生重组。

通过连续传代分离纯化可以区别这两类融合。

应该指出，即便是真正的重组融合子，在传代中也有可能发生分离，产生回复或新的遗传重组体。

原生质体电融合法构建嗜杀猕猴桃酒酵母的开题报告一、选题背景与意义嗜杀猕猴桃酒酵母是一种新型的酿酒酵母，在制作口感独特、营养丰富的猕猴桃酒中具有广阔的应用前景。

但是，当前已存在的嗜杀猕猴桃酒酵母菌株不够多样化、生产效率不高，且难以适应复杂多变的发酵环境，限制了酿酒产业的进一步发展。

因此，开展嗜杀猕猴桃酒酵母的构建研究，提高酵母的遗传多样性、生产性能和环境适应力，具有积极的意义和应用价值。

原生质体电融合技术是一种迅速高效的基因转移方法，能够实现细胞膜的瞬间通透性，实现不同来源细胞间的基因组重组。

在酿酒产业中，原生质体电融合技术已被广泛应用于不同酵母菌株的构建研究，有效地提高了酵母的遗传多样性和酒类的口感品质。

因此，考虑利用原生质体电融合法构建嗜杀猕猴桃酒酵母，探究该技术在酿酒产业中的应用价值和可能的作用机理。

二、研究目标和内容本研究旨在通过原生质体电融合技术构建适应性更强、酒精产量更高、营养成分更丰富的嗜杀猕猴桃酒酵母菌株。

具体来说，研究内容包括以下几个方面：1. 优选合适的嗜杀猕猴桃酒酵母母菌株，分离提取其原生质体并进行电融合操作。

2. 构建原生质体电融合菌株，并进行基因鉴定和分析，探究不同来源细胞间基因重组的可能性和机理。

3. 对原生质体电融合酵母进行酿酒性能和口感品质的评价，并与原有嗜杀猕猴桃酒酵母进行对比实验，比较酿酒产量、酒精含量、糖化效率、营养成分等方面的差异。

三、研究方法和技术路线1. 以已有的嗜杀猕猴桃酒酵母菌株为母菌，进行原生质体提取，并筛选产生高效电融合的原生质体。

2. 选择适宜的电融合条件，进行原生质体电融合实验，并筛选出具有稳定遗传性的嗜杀猕猴桃酒酵母菌株。

3. 对电融合得到的酿酒酵母进行基因测序和分析，挖掘不同来源细胞间的基因重组和可能的新基因组合。

4. 对电融合酵母菌株进行酿酒性能的评估，包括糖化效率、酒精含量、营养成分等指标的测定，并进行与原有嗜杀猕猴桃酒酵母的对比实验。