CD4细胞内因子检测试剂盒说明书

人可溶性CD40配体（sCD40L）酶联免疫分析试剂盒使用说明书人可溶性CD40配体（sCD40L）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：156pg/ml-10000pg/ml最低检测限：39pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人sCD40L，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中sCD40L 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗sCD40L抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗sCD40L抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的sCD40L呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

补体C4测定试剂盒（免疫比浊法）适用范围：用于体外定量测定人血清中补体C4的含量。

1.1 包装规格a) 试剂1：1×15mL 试剂2：1×5mLb) 试剂1：2×45mL 试剂2：2×15mLc) 试剂1：4×60mL 试剂2：4×20mLd) 试剂1：2×60mL 试剂2：2×20mL1.2 主要组成成分1.2.1试剂1主要组分1.2.2试剂2主要组分2.1 外观试剂1：无色澄清透明液体；试剂2：无色稍有浑浊液体。

2.2 试剂装量应不低于试剂瓶标示装量。

2.3 试剂空白吸光度在340nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5。

2.4 分析灵敏度测定C4含量为0.4g/L样本时，其△A应≥0.04。

2.5 线性范围2.5.1在（0.05，1.2）g/L范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990；2.5.2测试浓度在（0.05，0.3] g/L范围内，线性绝对偏差应不超过±0.045 g/L；测试浓度在（0.3，1.2）g/L范围内，线性相对偏差应不超过±15%。

2.6 测量精密度2.6.1重复性：用三个水平质控血清重复测试其变异系数（CV）应不超过10％。

2.6.2批间差：抽取3个不同批号试剂，对同一份样本进行重复测定，相对极差≤10％。

2.7 准确度在样本中加入一定量的纯品，计算回收率，应在85%～115% 范围内。

2.8 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月的试剂进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书（免疫磁捕获、免疫细胞化学鉴定）简介：本试剂盒利用免疫磁球捕获肿瘤病人全血中极少量的循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC），并通过免疫细胞化学鉴定所捕获的细胞，从而实现对CTC的灵敏检测。

其中免疫磁球表面修饰有抗上皮细胞粘附分子（EpCAM）抗体。

免疫细胞化学鉴定是通过异硫氰酸荧光素标记的细胞角蛋白抗体（FITC-anti-CK19）、Alexa Fluor594标记的抗白细胞共同抗原抗体（AF594-anti-CD45）和DAPI对细胞进行免疫荧光染色，DAPI染色阳性，CK19表达阳性，CD45表达阴性（DAPI+/CK19+/CD45-）的细胞被鉴定为CTC。

本试剂盒对目标细胞的捕获效率高达90%，简便快速、特异性强、特别牢靠，可以在3小时内完成对全血中CTC的检测。

试剂盒所含试剂：（10人份/盒）试剂标号组分用途状态规格配制试剂A牛血清白蛋白封闭固体粉末试剂B免疫磁球磁捕获悬液200μL即用型试剂C4%多聚甲醛固定细胞液体5mL即用型试剂D1%Triton X-100通透细胞液体5mL即用型试剂E DAPI细胞染色液体50μL即用型试剂F FITC-anti-CK19细胞染色液体20μL即用型试剂G AF594-anti-CD45细胞染色液体50μL即用型试剂H1×PBS洗涤液体25mL即用型*保存条件：4-8℃用户自备试剂和材料：1.试剂L：通透封闭液于0.05g试剂A中加入0.5mL试剂D溶解待用，或根据此用量比配置所需用量的通透封闭液，标为“试剂L”。

2.试剂M：染色液于0.01g试剂A中加入190μL试剂H溶解后，向其中加5μL的试剂E，2μL 的试剂F，5μL试剂G，或根据此用量比配置所需用量的染色液，标为“试剂M”，4℃避光保存待用。

4.磁力架（推举Dynal公司123-20D）5.移液器（吉尔森）、涡旋仪、超声波清洗器、进口耗材（离心管、枪头等）、恒温水浴摇床、荧光倒置显微镜等。

免疫组织化学检测CD3d、CD4、LCK、IL-7R在泪腺良性淋巴上皮病变组织的表达及临床意义刘骁;王蕾;马建民;葛心;李静;王霄娜【摘要】目的检测LGBLEL患者病变泪腺标本组织中CD3d、CD4、LCK、IL-7R 的表达情况,探讨病变组织中CD3d、CD4、LCK、IL-7R的表达与LGBLEL发病之间的关系.方法采用免疫组织化学方法检测LGBLEL患者病变泪腺组织中CD3d、CD4、LCK、IL-7R等蛋白的表达情况,并以单纯眼眶海绵状血管瘤患者瘤体组织标本做对照.采用半定量积分法(semi-quantitative immunoreactivity scores,IRS)计算实验组及对照组标本组织中的阳性表达积分值.结果免疫组织化学检测结果显示LGBLEL组CD3d、CD4、LCK、IL-7R蛋白表达均呈阳性;CD3d在淋巴滤泡周围阳性表达率高达85.5%,在淋巴滤泡间区阳性表达率高达51.8%,总体积分值为强阳性(++++);CD4在淋巴滤泡周围阳性表达率高平均约54.6%,在淋巴滤泡间区阳性表达率高达22.5%,总体积分值为阳性(+++);LCK在淋巴滤泡周围阳性表达率高平均约28.9%,在淋巴滤泡间区阳性表达率高达9.8%,总体积分值为阳性(++);IL-7R在淋巴滤泡周围阳性表达率高平均约9.7%,在淋巴滤泡间区阳性表达率平均约4.6%,总体积分值为阳性(+);CD3d、CD4、LCK、IL-7R在腺上皮腺泡的表达呈现明显差异,其中CD3d阳性表达率最高,表达约13.5%,并可见CD3d阳性细胞侵入腺泡现象,CD4阳性表达率次之,表达约4.5%,偶见侵入腺泡现象.LCK、IL-7R在腺泡的表达均呈阴性,未见侵入腺泡现象.眼眶海绵状血管瘤组CD3d、CD4、LCK、IL-7R表达均呈阴性.结论 CD3d、CD4、LCK、IL-7R因子在LGBLEL病变组织中的表达异常,CD3d、CD4、LCK、IL-7R因子参与了LGBLEL的发病过程.%Objective Detecting the expression of CD3d,CD4,LCK,IL-7R in lacrimal gland benign lymphoepi-thelial lesion and discussing whether it is relatedto the pathogenesis of lacrimal gland benign lymphoepitheliallesion.Meth-ods Using the immunohistochemical exam to detect the expression of CD 3d,CD4,LCK,IL-7R in lacrimal gland benign lymphoepithelial lesion and orbital cavernous hemangioma was considered as control group.The integral value of positive expression in the experimental group and the control group was calculated by semi quantitative immunoreactivity scores.Re-sults The expression ofCD3d,CD4,LCK,IL-7R were elevated in LGBLEL.The positive rate of CD3d expression in the lymphoid follicle is as high as 85.5%,in the interfollicular zones the positive expression rate is 51.8%,the overall score is strongly positive(++++).The positive rate of CD4 expression in the lymphoid follicle is about 54.6%,in the in-terfollicular zones the positive expression rate is 22.5%,the overall score is positive(+++).The positive rate of LCK expression in the lymphoid follicle is about 28.9%,in the interfollicular zones the positive expression rate is 9.8%,the o-verall score is positive(++).The positive rate of IL-7R expression in the lymphoid follicle is about 9.7%,in the inter-follicular zones the positive expression rate is 4.6%, the overall score is positive(+).The expression of CD3d, CD4, LCK,IL-7R have showed the significant differences in the expression of glandular epithelial acinus,the positive expression of CD3 d is the highest,the expression rate is about 13.5%,and you can see the CD3d positive cells invade the acinar. The positive expression of CD4 is about 4.5%,and you can see the CD4 positive cells occasionally invaded acini.The ex-pressions of LCK and IL-7R are negative in acini,there is no invasion of acini.The expression ofCD3d,CD4,LCK,IL-7R were normal in orbital cavernoushemangioma.Conclusion The increased expression of CD3d, CD4, LCK, IL-7R in lacrimal gland benign lymphoepithelial lesion may participate in the pathogenesis of lacrimal gland benign lymphoepithelial le-sion.【期刊名称】《临床眼科杂志》【年(卷),期】2017(025)005【总页数】4页(P385-388)【关键词】良性淋巴上皮病变;泪腺;发病机制【作者】刘骁;王蕾;马建民;葛心;李静;王霄娜【作者单位】100730 首都医科大学附属北京同仁医院;100730 首都医科大学附属北京同仁医院;100730 首都医科大学附属北京同仁医院;100730 首都医科大学附属北京同仁医院;100730 首都医科大学附属北京同仁医院;100730 首都医科大学附属北京同仁医院【正文语种】中文泪腺良性淋巴上皮病变(lacrimal gland benign lymphoepithelial lesion, LGBLEL)是一种以泪腺肿大和眼睑肿胀为主要临床表现的较为常见的眼眶疾病[1，2]。

CD4细胞内因子检测试剂盒步骤一.样本收集准备血样收集要使用肝素钠及其他抗凝剂以中和淋巴细胞作用。

使用前可放于室温条件避免血小板活化，收集后8小时内使用！长时间存放可影响抗原提呈细胞功能，运输也可合并细胞功能丧失。

二.步骤1.标记2只15ml聚丙烯活化试管：1管：加入0.5ml肝素化全血，稀释后的刺激剂PMA（取5ul 8×分装以1×PBS 35ul稀释至总体积40ul）和INOMYCINE（取2ul 4×分装以1×PBS 6ul稀释至总体积8ul）各1ul，5ul CD28/CD49d单克隆抗体混合物。

2管：加入0.5ml肝素化全血，5ul CD28/CD49d单克隆抗体混合物。

轻轻振荡每只试管，然后37°孵化2小时。

注意：离心管盖子拧松！！2.从冰箱取出一只分装好的BFA，以消毒的1×PBS 1:10稀释（加90ul1×PBS稀释至总体积100ul），每管加入稀释液10ul，振荡，然后37°孵化4小时。

注意：离心管盖子拧松！！3.每管加50ulEDTA的PBS溶液，剧烈振荡，室温孵育15分钟，再次最高速振荡10秒。

4.如果细胞马上用来染色，可参照4a执行；如果是冻存待染，参照4b。

4a：•标记4只聚苯乙烯试管1管：活化的同种型对照（AIC）2管：未刺激同种型对照（UIC）3管：活化样本（AS）4管：未刺激样本（US）•往AIC管和AS管各分装100ul活化全血•往UIC管和US管各分装100ul未刺激全血•接第5步。

4b：•每管0.5ml全血样本（已活化和未刺激）均加5ml 5 mL of 1X BD FACS Lysing Solution (使用前用去离子水1:10稀释)•振荡，室温孵育10分钟，直接放入-80°冻存。

•染色时，37°水浴箱简单溶解细胞，加入7ml wash buffer，500G室温离心10分钟。

流式细胞术检测胞内细胞因子的经验分析颜彩玲;张慧;周瑞祥【摘要】目的探讨流式细胞术检测胞内细胞因子的注意事项.方法制备小鼠脾脏淋巴细胞悬液.采用细胞表面抗原CD4、CD25及细胞核内因子FOXP3染色检测调节T细胞,胞内因子TNF-α的检测采用PMA/Iono-mycin,anti-CD3/CD28,PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合3种方案进行刺激,比较不同刺激条件下TNF-α胞内因子的表达情况,培养后各组细胞悬液采用固定破膜处理技术进行细胞表面抗原CD3、CD4及细胞内因子TNF-α染色.结果脾脏淋巴细胞悬液制备中研磨、裂解红细胞及染色过程中破膜等操作的不当,均导致前向/侧向(FSC/SSC)点图中目的细胞群模糊不清,从而影响后续分析.新鲜脾脏淋巴细胞得率、CD3+T淋巴细胞得率及TNF-α表达率与冻存的脾脏各类细胞比较,差别无统计学意义(P>0.05).胞内因子TNF-α检测结果显示,刺激组PMA/Ionomycin以及anti-CD3/CD28表达率显著高于未刺激组(P<0.05),PMA/Ionomycin与anti-CD3/CD28联合刺激组的表达率也显著高于未刺激组和独立刺激组(P<0.05).结论流式细胞术胞内细胞因子的检测有很多影响因素,包括脾脏细胞悬液制备中的研磨、裂解红细胞操作,染色处理过程中的破膜、固定,上机检测过程中补偿的调节、对照的设置等均影响实验结果,检测前应注意摸索选择适合待测胞内因子的测定条件.%Objective To investigate factors that may affect the detection of intracellular cytokines with flow cytometry . Methods Splenocytes from mice were disaggregated , and regulatory T cells (Treg) were detected by staining of CD4 ,CD25 ,and intranuclear transcription factor FOXP3 . Forthe detection of TNF-α,splenocytes were stimulated withPMA/Ionomycin ,anti-CD3/CD28 or PMA/Ionomy-cin plus anti-CD3/CD28 ,respectively . Following activation ,the cells were stained with anti-CD3 APC and anti-CD4 FITC ,then intracellularly stained to detect TNF-α after fixation and permeabilization . Controls were designed for both experiments . Results The improper operations in the grinding ,lysing erythrocytes ,fixing and perming the cells all leaded to indistinct target cells of interest in the FSC /SSC dot plots ,which affected the subsequent analysis . There were no significant differences in the percentages of lymphocytes ,CD3+ T lymphocytes ,and TNF-α p roducing cells between the fresh and frozen samples (P>0 .05) . Expression of TNF-αin cells stimulated by PMA/Ionomycin ,anti-CD3/CD28 ,or combined stimulation groups were significantly higher than controls (P<0 .05) . Conclusion Many factors may af-fect the detection of intracellular cytokines by flow cytometry ,including the spleen ,lysing erythrocytes in the preparation of splenocytes suspension ,fixing and perming the cells duringdyeing ,adjusting the com-pensation values ,designing controlled trials and so on . Therefore ,attentions should be paid to explore and select the suitable conditions for studying intracellular factors before testing .【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2017(051)005【总页数】8页(P303-310)【关键词】流式细胞术;细胞因子类;小鼠【作者】颜彩玲;张慧;周瑞祥【作者单位】福建医科大学基础医学院 ,福州 350122;福建医科大学新药安全性评价中心,福州 350122;福建医科大学基础医学院 ,福州 350122【正文语种】中文【中图分类】R332;R341.1;R392.21;R977.6辅助性T淋巴细胞(T helper, Th)是人体内免疫系统的重要组成部分。

小鼠CD4(CD4)酶联免疫检测试剂盒使用说明书种属小鼠96T2-8℃仅用于科研，不得用于医学诊断使用前仔细阅读本说明书。

本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测小鼠CD4(CD4)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

一、用途：用于小鼠血清、血浆及相关液体样本中CD4(CD4)的测定。

二、工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中小鼠CD4(CD4)的水平。

向预先包被了小鼠CD4(CD4)单克隆抗体的酶标孔中加入CD4(CD4)，温育；温育后，加入生物素标记的抗CD4抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅与样品中小鼠CD4(CD4)的浓度呈正相关。

三、试剂盒组成编号产品名称规格1 标准品（32ng/mL）0.5ml2 标准品稀释液3ml3 酶标包被板12孔×8条4 链霉亲和素-HRP6ml5 30倍浓缩洗涤液20ml6 生物素标记的抗-CD4抗体1ml7 显色剂A液6ml8 显色剂B液6ml9 终止液6ml10 说明书1份11 封板膜2张12 密封袋1个四、需要而未提供的试剂和器材1、37℃恒温箱。

2、标准规格酶标仪。

3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水，5、一次性试管6、吸水纸五、注意事项1、从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

3、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

4、为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

5、不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质期之前使用。

6、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

六、洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。

兔子可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【兔子可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔子可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L) 水平。

用纯化的兔子可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L) ，再与HRP 标记的可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。