离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素

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收稿日期

:20042

082

05 通讯联系人

:夏 虹第

21卷第

2期

Vol.21 

No.2分析科学学报

JOURNALOFANALYTICALSCIENCE2005年

4月

Apr.2005

文章编号

:10062

6144(

2005)

022

02232

02

离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素

夏 虹3

,杨 洁

,涂一名

,蒙缔亚

(农业部食品质量监督检验测试中心

,武汉

430064)

摘 要

:采用聚酰胺吸附前处理果汁饮料

,用离子对反相液相色谱法测定柠檬黄、日落

黄、苋菜红、胭脂红四种合成色素。以含对离子试剂四丁基溴化铵

0.005mol/L的甲

醇∶水

=45∶

55(

V/V)为流动相

,15min内可完成四种合成色素的分离

,回收率为

89.8%~

102.2%,变异系数为

1.81%~

2.22%。

关键词

:果汁

;合成色素

;离子对

HPLC

中图分类号

:O657.7 文献标识码

:A

食用色素是食品中常用的添加剂

,它分为天然色素和合成色素两大类。天然色素一般比较安全

,但

由于价格高

,在食品加工、贮存过程中容易褪色和变色

,其应用受到限制。而合成色素色泽鲜艳、性质稳

定、着色力强、成本低廉

,已被广泛应用。

合成色素多为含有

R-N=N-R′键

,苯环或氧杂蒽结构的化合物

,它们对人体有不同程度的毒性作

,因此各国都严格控制其使用范围和使用量。在我国允许使用的合成色素有柠檬黄、日落黄、苋菜红、

胭脂红等

10种

,目前测定食用合成色素主要采用薄层色谱法和高效液相色谱法。报道的这些方法中

,有

的采用梯度淋洗

,色谱条件繁琐

;有的不经样品前处理

,液体样品直接过滤进样

,不能有效排除干扰物

,富

集合成色素。

本文采用聚酰胺吸附前处理

,离子对

HPLC法

,以基质较为复杂的珍珠果饮料作为分析对象

,对绿色

食品中必检的上述四种合成色素做了系统的研究

,方法快速、准确、勿需梯度洗脱

,获得满意结果。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪

,配置

510泵

,717自动进样器

,996二极管阵列检测器

,Empower色谱工作站。

甲醇(色谱纯)

,四丁基溴化铵(分析纯)

,柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红标准溶液(购自国家标准物质研

究中心)。

1.2 色谱条件

色谱柱

:kromasilC18柱

20cm×

4.6mmi,d.,5μ

m;流动相

:甲醇∶水

=45∶

55(

V/V)(流动相含

0.005mol/L四丁基溴化铵)

;流速

:0.8mL/min;检测波长

:254nm。

1.3 样品处理及测定

称取珍珠果饮料

30.0g于

100mL烧杯中

,加热至

60℃

,将适量聚酰胺粉加少许水调成粥状

,倒入样

品溶液中

,搅拌片刻

,以

G3砂芯漏斗抽滤

,用

60℃

pH=4的水洗涤

3~

5次

,然后用甲醇∶甲酸

=6∶

4混

合溶液(

V/V)洗涤

3~

5次(

5mL/次)

,再用水洗至中性

,用无水乙醇∶氨水∶水

=7∶

2∶

1(

V/V)混合溶

液解吸

3~

5次

,每次

5mL,收集解吸液

,加乙酸中和

,蒸发至近干

,加水溶解

,定容至

10.00mL。经

0.45μ

m滤膜过滤

,取

20μ

L进样。采用标准曲线外标法定量。

1.4 标准曲线的制作

配制

20.0μ

g/mL的合成色素混合标准溶液。在上述色谱条件下依次进样

2.0μ

L、

4.0μ

L、

6.0μ

L、

322第

2期夏 虹等

:离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素第

21卷

8.0μ

L、

10.0μ

L。以各合成色素进样量

X(μ

g)与峰面积

Y作线性回归。

2 结果与讨论

2.1 添加剂组分的确认

2.1.1 检测波长的选择 从四种合成色素的紫外2可见吸收光谱图上

,综合考虑各组分的最大吸收波长

,

选择在

254nm下检测

,可获得较高的灵敏度且干扰较小。

2.1.2 光谱鉴定 将样品中欲测组分光谱与该组分标样光谱的

1~

4阶导数图进行比较

,对组分作进一

步确认

,排除了仅由保留时间定性造成的误差。

2.2 样品前处理中吸附剂用量的探讨

合成色素属酸性水溶性色素

,在酸性条件下被聚酰胺吸附

,在碱性条件下又被解吸。当吸附时

,若上

清液仍有色

,应补加适量聚酰胺

,使吸附完全

,否则测定结果偏低。

2.3 流动相比例的选择

以四丁基溴化铵为对离子试剂

,用甲醇和水二元流动相试验获得最佳分离时的流动相比

,为了使分

离时间尽可能缩短

,同时避免样品中杂质峰的影响

,我们选择最佳流动相配比为甲醇∶水

=45∶

55(

V/

V)。

2.4 对离子浓度的影响

在反相离子对色谱中

,分离度和保留时间均与对离子浓度有关

,通过调节对离子浓度可改变被分离

样品离子的保留时间。当对离子浓度增大到一定程度后

,导致保留时间增大

,峰形变宽。实验结果表明

,

对离子浓度在

0.004~

0.007mol/L的范围为最佳。

Fig.1 

StandardchromatogramofTartrazine(1),

Amaranth(2),SunsetYellowFCF(3)andPonceau

4R(4)2.5 标准曲线

分别绘制了柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红的标准曲

线

,其回归方程分别为

:

Y=3

.74×

106

X-5

.87×

104

Y=

3

.21×

106

X-1

.52×

104

Y=2

.64×

106

X-0

.92×

104

Y=2

.92×

106

X-2

.20×

104

。合成样品在选定最佳色谱

条件下分析

,标样色谱图见图

1。

2.6 加标回收率

在已知含量的同一样品中

,分别加入

200.0μ

g的四

种合成色素

,得到五批测定结果的回收率为

89.9%~

102.2%,相对标准偏差为

1.80%~

2.22%。

DeterminationofSyntheticColourinFruitJuiceby

Ion2

pairHighPerformanceLiquidChromatography

XIAHong3

,TUYi2

ming,YangJie,MENGDi2

ya

(

FoodQualityInspectionandTestingCenterofAgricultruralMinistyofChina,Wuhan430064)

42

2