离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素
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收稿日期
:20042
082
05 通讯联系人
:夏 虹第
21卷第
2期
Vol.21
No.2分析科学学报
JOURNALOFANALYTICALSCIENCE2005年
4月
Apr.2005
文章编号
:10062
6144(
2005)
022
02232
02
离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素
夏 虹3
,杨 洁
,涂一名
,蒙缔亚
(农业部食品质量监督检验测试中心
,武汉
430064)
摘 要
:采用聚酰胺吸附前处理果汁饮料
,用离子对反相液相色谱法测定柠檬黄、日落
黄、苋菜红、胭脂红四种合成色素。以含对离子试剂四丁基溴化铵
0.005mol/L的甲
醇∶水
=45∶
55(
V/V)为流动相
,15min内可完成四种合成色素的分离
,回收率为
89.8%~
102.2%,变异系数为
1.81%~
2.22%。
关键词
:果汁
;合成色素
;离子对
HPLC
中图分类号
:O657.7 文献标识码
:A
食用色素是食品中常用的添加剂
,它分为天然色素和合成色素两大类。天然色素一般比较安全
,但
由于价格高
,在食品加工、贮存过程中容易褪色和变色
,其应用受到限制。而合成色素色泽鲜艳、性质稳
定、着色力强、成本低廉
,已被广泛应用。
合成色素多为含有
R-N=N-R′键
,苯环或氧杂蒽结构的化合物
,它们对人体有不同程度的毒性作
用
,因此各国都严格控制其使用范围和使用量。在我国允许使用的合成色素有柠檬黄、日落黄、苋菜红、
胭脂红等
10种
,目前测定食用合成色素主要采用薄层色谱法和高效液相色谱法。报道的这些方法中
,有
的采用梯度淋洗
,色谱条件繁琐
;有的不经样品前处理
,液体样品直接过滤进样
,不能有效排除干扰物
,富
集合成色素。
本文采用聚酰胺吸附前处理
,离子对
HPLC法
,以基质较为复杂的珍珠果饮料作为分析对象
,对绿色
食品中必检的上述四种合成色素做了系统的研究
,方法快速、准确、勿需梯度洗脱
,获得满意结果。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪
,配置
510泵
,717自动进样器
,996二极管阵列检测器
,Empower色谱工作站。
甲醇(色谱纯)
,四丁基溴化铵(分析纯)
,柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红标准溶液(购自国家标准物质研
究中心)。
1.2 色谱条件
色谱柱
:kromasilC18柱
20cm×
4.6mmi,d.,5μ
m;流动相
:甲醇∶水
=45∶
55(
V/V)(流动相含
0.005mol/L四丁基溴化铵)
;流速
:0.8mL/min;检测波长
:254nm。
1.3 样品处理及测定
称取珍珠果饮料
30.0g于
100mL烧杯中
,加热至
60℃
,将适量聚酰胺粉加少许水调成粥状
,倒入样
品溶液中
,搅拌片刻
,以
G3砂芯漏斗抽滤
,用
60℃
pH=4的水洗涤
3~
5次
,然后用甲醇∶甲酸
=6∶
4混
合溶液(
V/V)洗涤
3~
5次(
5mL/次)
,再用水洗至中性
,用无水乙醇∶氨水∶水
=7∶
2∶
1(
V/V)混合溶
液解吸
3~
5次
,每次
5mL,收集解吸液
,加乙酸中和
,蒸发至近干
,加水溶解
,定容至
10.00mL。经
0.45μ
m滤膜过滤
,取
20μ
L进样。采用标准曲线外标法定量。
1.4 标准曲线的制作
配制
20.0μ
g/mL的合成色素混合标准溶液。在上述色谱条件下依次进样
2.0μ
L、
4.0μ
L、
6.0μ
L、
322第
2期夏 虹等
:离子对高效液相色谱法测定果汁中的合成色素第
21卷
8.0μ
L、
10.0μ
L。以各合成色素进样量
X(μ
g)与峰面积
Y作线性回归。
2 结果与讨论
2.1 添加剂组分的确认
2.1.1 检测波长的选择 从四种合成色素的紫外2可见吸收光谱图上
,综合考虑各组分的最大吸收波长
,
选择在
254nm下检测
,可获得较高的灵敏度且干扰较小。
2.1.2 光谱鉴定 将样品中欲测组分光谱与该组分标样光谱的
1~
4阶导数图进行比较
,对组分作进一
步确认
,排除了仅由保留时间定性造成的误差。
2.2 样品前处理中吸附剂用量的探讨
合成色素属酸性水溶性色素
,在酸性条件下被聚酰胺吸附
,在碱性条件下又被解吸。当吸附时
,若上
清液仍有色
,应补加适量聚酰胺
,使吸附完全
,否则测定结果偏低。
2.3 流动相比例的选择
以四丁基溴化铵为对离子试剂
,用甲醇和水二元流动相试验获得最佳分离时的流动相比
,为了使分
离时间尽可能缩短
,同时避免样品中杂质峰的影响
,我们选择最佳流动相配比为甲醇∶水
=45∶
55(
V/
V)。
2.4 对离子浓度的影响
在反相离子对色谱中
,分离度和保留时间均与对离子浓度有关
,通过调节对离子浓度可改变被分离
样品离子的保留时间。当对离子浓度增大到一定程度后
,导致保留时间增大
,峰形变宽。实验结果表明
,
对离子浓度在
0.004~
0.007mol/L的范围为最佳。
Fig.1
StandardchromatogramofTartrazine(1),
Amaranth(2),SunsetYellowFCF(3)andPonceau
4R(4)2.5 标准曲线
分别绘制了柠檬黄、苋菜红、日落黄、胭脂红的标准曲
线
,其回归方程分别为
:
Y=3
.74×
106
X-5
.87×
104
、
Y=
3
.21×
106
X-1
.52×
104
、
Y=2
.64×
106
X-0
.92×
104
、
Y=2
.92×
106
X-2
.20×
104
。合成样品在选定最佳色谱
条件下分析
,标样色谱图见图
1。
2.6 加标回收率
在已知含量的同一样品中
,分别加入
200.0μ
g的四
种合成色素
,得到五批测定结果的回收率为
89.9%~
102.2%,相对标准偏差为
1.80%~
2.22%。
DeterminationofSyntheticColourinFruitJuiceby
Ion2
pairHighPerformanceLiquidChromatography
XIAHong3
,TUYi2
ming,YangJie,MENGDi2
ya
(
FoodQualityInspectionandTestingCenterofAgricultruralMinistyofChina,Wuhan430064)
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