款冬花有效成分的提取和止咳化痰作用的研究(修改)
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山西中医学院中药学专业毕业论文款冬花化学成分的提取和止咳化痰作用的研究毕业生：武伟伟专业：中药学班级：2011级中药1班指导教师：韩毅丽二〇一五年六月款冬花不同化学成分的提取和止咳化痰作用的研究学生:武伟伟指导教师:韩毅丽［摘要］目的:研究款冬花中不同化学成分对小鼠止咳、化痰的作用。
方法：止咳实验：昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成空白、阳性枸橼酸喷托维林对照组( 0. 01 g/kg)、款冬花水煎液组、萜溶液组、皂苷溶液组、黄酮溶液组、生物碱溶液组。
给药剂量为6g/kg，连续给药5 d，然后观察25%浓氨水定量喷雾后出现咳嗽的潜伏期及2 min内的咳嗽次数［1］。
化痰实验：昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成空白、阳性枸橼酸喷托维林对照组( 0. 01 g/kg)、款冬花水煎液组、萜溶液组、皂苷溶液组、黄酮溶液组、生物碱溶液组。
给药剂量为0.2 mL/10g ，连续给药3d，末次给药45mn后，气管段酚红法测定对小鼠的化痰作用。
结果: 与空白对照组相比，款冬花水煎液及其有效成分咳效果显著，咳嗽潜伏期明显延长，咳嗽次数明显减少。
与空白对照组相比，除黄酮外，款冬花水煎液及其有效成分明显减少小鼠的痰液分泌量。
结论:款冬花中黄铜、萜、生物碱、皂苷均对小鼠有止咳作用；［关键词］款冬花；化学成分；止咳：化痰Study on the effect of extraction and relieving cough and phlegm and effective components of Flos farfaraeWu Weiwei(Shanxi University of Traditional Chinese medicine, Jinzhong Shanxi) [Abstract] Objective: the effect of different ingredients on mice cough, phlegm of tussilago. Methods: cough experiment: Kunming mice, half male and half female were randomly divided into blank, positive citric acid spray Tovey forest in the control group (0. 01 g kg - 1), Flos farfarae Decoction group, terpene solution group, saponin solution group, solution group of the total flavonoids, alkaloids solution group. The drug volume was 20 kg - mL - 1, and the number of cough was 5 days after the quantitative spray and the number of cough in 25% min was observed.. Phlegm experiment: Kunming mice, half male and half female were randomly divided into blank,positive citric acid spray Tovey forest in the control group (0. 01 g kg - 1), Flos farfarae Decoction group, terpene solution group, saponin solution group, solution group of the total flavonoids, alkaloids solution group. Dosing volume of 20 ml, kg - 1, continuous administration for 3 days, the last administration 45 minutes, Tracheal phenol red method determination of phlegm effects in mice. Results: compared with the control group, coltsfoot flower Decoction and its active ingredient cough effect significantly, cough latency was significantly prolonged, cough frequency decreased significantly. In addition to flavonoids, compared with the control group, coltsfoot Decoction and its effective constituents significantly reduced the quantity of sputum secretion in mice.[keyword] Tussilago; effective components; cough and phlegm:款冬花为菊科植物款冬( Tussilago farfara L． )的干燥花蕾。
每年12 月或地冻前当花尚未出土时采挖，除去花梗及泥沙，阴干［2］。
款冬花辛、甘而温，无毒; 主治润肺下气，化痰止嗽。
治咳逆喘息，喉痹。
《神农本草经》称款冬花为“治嗽之最”，尤其是款冬有甘温清补的功效，因此古今常用。
随着现代研究的发展，从款冬花中分离得到了各种化学成分，包括倍半萜、黄酮、有机酸等，款冬花的一些新的药理作用也渐渐发掘，为传统中药的现代应用提供了广阔的前景。
款冬花中有效化学成分包括黄酮类、萜类、皂苷类、生物碱类、挥发油类等［3］。
本实验先提取款冬花中有效化学成分，然后通过浓氨水喷雾法和酚红气管段法分别研究对小鼠的止咳、化痰作用，为款冬花有效化学成分的药理作用的深入研究和发利用提供依据。
1实验材料1. 1动物昆明种小鼠70只，体重18～22 g雌雄各半，由*提供合格证号*。
1. 2药物生品款冬花，购自河北省安国中药材市场。
枸橼酸喷托维林片( 吉林省东方制药有限公司产品，生产批号20140901)。
1. 3试剂25% 氨水( 天津市进丰化工有限公司产品，生产批号20140910) ，无水乙醇(天津市光复科技发展有限有限公司，生产批号20150321) ，氯仿( 天津市光复科技发展有限有限公司产品，生产批号20150407)，正丁醇( 公司产品，生产批号)，石油醚( 天津市光复科技发展有限有限公司产品，生产批号20141116),氢氧化钠（天津市进丰化工有限公司产品，生产批号：20140512），碳酸钠（天津市科密欧化学试剂有限公司产品，生产批号：20130116）。
1. 4仪器UV-6100S型紫外可见分光光度计（上海元忻仪器有限公司产品，编号：AP1410003），EL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司产品），SHB-Ⅲ循环水式真空泵（河南巩义市矛华有限责任公司产品），SY-2000旋转蒸发器（江苏省常州市华天药化设备有限公司），HH-恒温水浴锅（江苏省常州市中捷实验仪器制备有限公司）。
2实验方法2. 1提取有效成分及其水煎液的制备将1kg款冬花用75%的乙醇浸泡10d，过滤，抽滤，回收溶剂，将溶液制成浸膏。
用适量蒸馏水将浸膏溶解，将浸膏溶液均分为4份。
第一份溶液分别用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，将氯仿萃取液制成浸膏，得到黄酮，将正丁醇萃取液制成浸膏，得到皂苷；用5%的盐酸将第二份溶液的pH调到2-3，静置过夜，抽滤，滤渣依次用石油醚、氯仿萃取，将氯仿萃取液制成浸膏，得到萜类，滤液用1mol/l的NaOH溶液调节pH到12-13，再分别用石油醚、氯仿萃取溶液，将氯仿萃取液制成浸膏，得到生物碱。
将黄酮类、萜类、皂苷类、生物碱类浸膏用蒸馏水配制成每毫升有0.3g款冬花的溶液。
取250g款冬花加入2500ml水浸渍过夜，加热至沸腾，并维持微沸状45min，滤取煎出液,药渣再加入2000ml水煎煮，沸腾30min，再滤取煎出液,药渣再加入1500ml水煎煮，沸腾20min，将三次水煎液合并，浓缩至每毫升含0.3g款冬花。
2. 2止咳实验( 浓氨水喷雾法)小鼠置于特制的玻璃钟罩内，使用超声雾化喷雾器进行25%浓氨水定量雾，5s后立即取出，记录小鼠从接受喷雾开始到出现咳嗽的潜伏期，以及2 min内的咳嗽次数。
剔除喷雾后2 min 不咳嗽者［4］。
合格小鼠2 d后随机分成空白、阳性枸橼酸喷托维林对照组(0. 01 g/kg) ，款冬花水煎液组(6g/kg) ;黄酮溶液组(6g/kg) ，萜溶液组(6 g/kg) ，皂苷溶液组（6g/kg），生物碱溶液（6g/kg ），以生理盐水为阴性对照，以枸橼酸喷托维林为阳性对照。
给药剂量为0.2ml/10g,连续给药5 d，每日称重。
于末次药后1 h后，用25%浓氨水定量喷雾，5s后立即取出。
记录小鼠从接受喷雾开始到出现咳嗽的潜伏期及2 min内的咳嗽次数,结果见表1。
2. 3化痰实验(气管段酚红法)2. 3.1气官的摘取及保存分组给药同前, 末次给药45 min后, 腹腔注射5 %酚红溶液0.1 ml/ 10 g体重, 30 min后处死小鼠, 剥离气管周围组织, 剪下自甲状腺软骨下至气管分支处的一段气管, 放入盛有1ml生理盐水的试管中, 再加1 mol/ L NaOH 0.1 ml,将试管放入冰箱保存［5］。
测OD值时用生理盐水将全部试管中溶液定容到2ml。
2. 3.2对照品溶液的制备用十万分之一的分析天平精确称取5.2mg的酚红,在50ml容量瓶中用生理盐水定容，浓度0.104mg/ml。
取0.2ml配好的酚红溶液放入10ml的容量瓶中，然后加入生理盐水1.8ml，再加入1 mol/ L NaOH 0.5 ml,最后用生理盐水定容10ml。
2. 3.3测量波长的选择用紫外可见光分光光度计对对照品溶液进行波长扫描，其最大吸收波长为559nm。
2. 3.4标准曲线的绘制及计算各组酚红含量用移液管分别量取已配好的0.104mg/ml的酚红溶液0.01ml、0.03ml、0.05ml、0.07ml、0.1ml、0.12ml依次加入10ml的容量瓶，再往10ml的容量瓶中依次加1mol/l的NaOH 0.5ml，将容量瓶中溶液用生理盐水都定容到10m l。
