石蜡切片制作

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。

一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。

（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。

组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。

如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

固定的时间长短依据材料大小而定。

固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。

（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。

以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。

-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。

确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。

-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。

-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。

2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。

-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。

-等待石蜡冷却和凝固。

你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。

3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。

-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。

你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。

4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。

-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。

5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。

-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。

6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。

- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。

-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。

制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。

在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。

以下是石蜡切片的基本操作流程：1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。

常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。

固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。

2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。

通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。

首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。

包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。

切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。

封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。

可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

总体而言，石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧，以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。

石蜡切片的制作过程2.2.1选材与固定将选好的材料放入FAA固定液中，浸泡24小时以上；2.2.2脱水与透明将材料从FAA中换到70%乙醇中浸泡12小时，然后按梯度浓度更换酒精：依次是70%乙醇（2ｈ）、85%乙醇（2ｈ）、90%乙醇（2ｈ）、95%乙醇（1.5ｈ）、100%乙醇（45min）、100%乙醇（45min）、100%乙醇（45min）、纯乙醇：二甲苯（1:1）（45min）、二甲苯至完全透明；2.2.3浸蜡将材料连同石蜡一起放入容器中，进烘箱（40℃）12-24小时，再将烘箱预热至60℃，然后每隔2h换一次纯蜡，共3次，最终使石蜡慢慢替代透明剂进入材料的组织中；2.2.4包埋将蜡倒入事先折好的纸盒中，用在酒精灯上加热的镊子把材料整好，迅速均匀地放入凉水中凝固；2.2.5修块与切片将凝固的蜡块修成上下两边平行的方块，用切片机将蜡块切成2-3μｍ厚度；2.2.6粘片在洗净的载玻片上均匀地涂上少量凝胶，滴一滴水将选好的平整的蜡带用毛笔蘸取置于载玻片上，待完全展平后，用解剖针将切片位置拨正，倾去载玻片上的余水，置于42℃的烤片机上烤3-4ｈ，再将其转移至４0℃左右恒温箱内烘干；2.2.7脱蜡将烘干的切片依次放入二甲苯（20ｍｉｎ）、二甲苯（20ｍｉｎ）、二甲苯︰乙醇（１︰１）（10min），100％酒精（5ｍｉｎ）、100％酒精（5ｍｉｎ）、95％酒精（5min）、85%酒精（5ｍｉｎ）、70％番红，浸泡8小时；2.2.8染色、透明将在70%番红的载玻片依次放入85％乙醇（5s）、90%固绿（12ｓ）、90％乙醇（10s）、100%乙醇（30s）、100%乙醇（2min）、二甲苯︰乙醇（1:1）（1ｍｉｎ）、二甲苯（3ｍｉｎ）、二甲苯（5ｍｉｎ）;2.2.9封片滴一小滴中性树胶于载玻片上，轻轻盖上盖玻片，烘干即可。

石蜡切片免疫组化步骤
一、石蜡切片的制备
1、准备石蜡
用烧杯中加入12mL的苯溶剂和8mL的石蜡，加热至融化，将融化的石蜡移植到一块热板上继续加热，以便从热板上取出细薄的膜层，用磨刀涂抹，然后将用涂抹磨刀涂抹的膜层置于蜡块上，将有载体细胞囊毛细管夹在由石蜡制成的膜层和热板之间，着色后再将膜层回置回蜡块上。

2、去除细胞浆
将制备好的石蜡切片放入10％氯化苯甲酸至50％酒精溶液中，让细胞进行脱脂，去除细胞浆，然后将液体放入烧杯中，煮沸5分钟，再放入70％酒精溶液中，洗去残留的脱脂液，最后放入稀盐酸洗涤，洗去残留的蛋白质。

3、着色
将石蜡切片放入适当浓度的着色液中（如酚酞-HA，库仑染料，组织染料等），煮沸着色3-5分钟，放入稀盐酸洗涤，进行染腐去色，将残留的着色液除去，把腐蚀后的石蜡切片放入稀乙醇中，使其着色深度稳定，待用。

二、石蜡切片免疫组化实验
1、抗体的准备
首先根据实验要求，准备抗体。

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度：不同的样品需要不同的切片厚度，要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制：在每个步骤结束后，要对样品的质量进行严格检查，确保切片的质量。

6. 保存条件：切好的石蜡切片应妥善保存，防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术，通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤，可以制备出精细的样品薄片，用于显微观察和分析。

石蜡切片操作一、试剂配制1固定剂：36% ~40%福尔马林液5ml ;冰醋酸5m1; 50%酒精89ml;2、1%番红染液：番红2g，乙醇100ml，水100ml3、0.5%固绿溶液：固绿0.5g，乙醇95ml，水5ml4、各级浓度酒精的配制70% ；85%；95% ；100%酒精。

70%和85%酒精用95%酒精配制；（取70ml95%酒精，加水至95ml，即为70%酒精）6、粘片剂：鸡蛋清一个，打碎，除去泡沫，加入等量的甘油二、实验步骤1固定：组织块大小：1.5X 1.5X 0.2 CM 固定液＞ 4倍组织体积福尔马林固定液12 —24 h后用蒸馏水洗2、脱水：70% 乙醇1h ----------- ►85% 乙醇1h -------- ►95% 乙醇1h ---------- 100% 乙醇0.5 —1h --------- ► 100% 乙醇0.5-1h3、透明：100%乙醇：二甲苯（1 : 1）2h （加少量番红）--------- ►二甲苯1.5h ------------ ►二甲苯1.5h （溶液占瓶子1/3，不倒掉，直接加小蜡块透明）注意：时间太长变脆4、浸蜡：材料和蜡块不相接触，置换组织中的透明剂，为包埋做准备。

方法一：石蜡熔点52—56 C温箱：56C 二甲苯：石蜡（1 : 1）1-2小时；石蜡1-2小时；石蜡1-2小时方法二：1）常温加蜡至饱和（大概加6-7快）；2）35C加蜡块3-6h，不溶为止，可过夜3）60C盖瓶盖2h（3-4块）,开盖6h （溶液是原来的2倍，占瓶子2/3）,至二甲苯完全挥发，可过夜4）纯蜡（60C -65C）2h5）纯蜡（60C -65C）2h5、包埋准备包埋蜡：硬蜡（56~58C或60~62C）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性。

②折纸盒，写好标签。

③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子④在纸盒中倒入56C -58C的石蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。

石蜡切片制作及HE染色取材→固定→冲水→脱水→透明→浸蜡→石蜡包埋→切片→染色→封固1、取材：大小：1cm× 1cm×0.5cm2、固定：固定液的量要充足，应为固定组织的10倍。

组织固定的时间要足够，根据标本体积大小不同，固定时间应有所不同，组织越大越厚，固定时间应越长，反之。

一般4—12小时或更长。

在温箱内将固定液稍加温，可使固定作用加快而缩短固定时间。

在甲醛溶液中短时固定的标本，冲洗时间在10分钟至2小时即可，但固定时间较长的标本需要较长时间的流水冲洗。

一般要冲洗24小时，甚至延长48小时，否则，由于甲酸的沉淀将会影响染色的结果。

10%福尔马林的组成系；甲醛溶液：10ml、水：90 ml3、脱水、透明：（先洗涤固定的组织）脱水:应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

70%乙醇I 、II（各30min）→80%乙醇I 、II（各30min）→90%乙醇I 、II（各30min）→100%乙醇I 、II （各30min）透明:组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆变硬，一般是达到组织的透明为度，小块组织在半至一小时内透明。

二甲苯， I 、II 各30min4、浸蜡：组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡.石蜡不应含有尘粒，杂质及其他异物，不含水分，质地均匀成半透明状，触之感觉滑而不腻，结晶及颗粒少。

组织浸蜡时间也应视组织种类大小和结构不同而异。

为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两级或三级进行。

以熔点较低的软石蜡作为第一步，然后再换为熔点较高的石蜡作为第二步，第三步。

浸蜡时间1－4小时，或更长，并使之过夜则较易切割，如此浸渍的组织切片在干燥箱内干燥也不易卷曲和龟裂。

软蜡（1h）硬蜡（1h）5、包埋：硬蜡※手工包埋的步骤如下：1）.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。

从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。

石蜡切片制作流程表及相关注意事项一、取财1．样品要求：长宽1cm左右，厚度不超过5mm。

2．固定液：10％福尔马林固定液︰组织块=20︰1为宜。

3．固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如果24h或更长，应密封瓶口，封前换液。

4．修理组织块：将切面修平。

5．每个组织块都应编号，并做好记录。

6．用纱布包好组织块，并包上小纸条，注明编号、组织块数量等信息。

注：（1）对于肺部组织，在取材后必须用玻璃注射器抽掉肺泡腔中的气体，否则会影响脱水，透明和浸蜡等效果。

抽气具体方法：A．将组织块置入空玻璃注射器内，塞上推助器。

B．.向注射器内吸入约1/2的自来水，就会发现肺组织漂浮在水面。

C．排掉注射器内的空气。

D．将注射器倒置(头部向上)，用左手拇指赌上注射器头部,用右手用力拉推肋器。

E．反复C、D两步骤，直到肺组织沉到注射器底部即可。

（2）对于气管、支气管等含钙量较高的组织，必须有脱水前用5％和硝酸溶液软化，直到可用大头针扎透为止（一般需一天一夜）。

二、脱水过程1．水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下洗水，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。

2．脱水（1）75％2h（2）80％酒精1h（3）95％酒精Ⅰ 1 h（4）95％酒精Ⅱ 1 h（5）95％酒精Ⅲ过一夜（6）100％酒精Ⅰ 1 h（7）100％酒精Ⅱ 1 h组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其从95％洒精（Ⅲ）进入100％酒精（Ⅰ）时，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。

（其他注意项见下文）三、透明（1）酒精（100％）︰二甲苯=1︰1 过度20min（2）二甲苯Ⅰ透明15min（3）二甲苯Ⅱ透明15min四、浸蜡（1）二甲苯︰石蜡=1︰:1软蜡（熔点52℃～54℃） 1h 温箱56～58℃(2) 石蜡Ⅰ（熔点54℃～56℃） 1h 温箱56～58℃（3）石蜡Ⅱ软硬混合（熔点更高） 1h 温箱56～58℃浸蜡温度保持在56～58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。

一、固定液（xx 氏液）饱和苦味酸75mL+40%甲醛25mL+冰醋酸5mL二、苏木精染液（实验前至少 3 个月要配好）[Harris 'solution]1. A液：KAl（SO4）2 （硫酸铝钾）40g+蒸馏水900ml，加热溶解2. B液xx精5g+无水乙醇100ml3•将B液倒入A,继续加热至沸腾4.C 液，1.5g 氧化汞溶于10ml 蒸馏水5•将C倒入AB混合液，边加边搅拌，缓慢，加完后加热至再度沸腾6. 将上混合液放入冷水中迅速冷却7. 装瓶，临用前加入10ml 冰乙酸使用之前要过滤！三、熬蜡3-4天，每天6-7 h，至xx为止。

四、脱水如果用的是波恩氏液，则可以从50%或者70%乙醇开始脱水。

如果当天不能完成透明过程，到70%处可以停止，否则得一直做到透明过程。

如果用的是甲醛-PBS缓冲液固定，则必须从30%处脱水。

30% (乙醇)1h ---------- 50%1h ------ 70%1h(可以过夜) --------- 85%1h --------- 95%l30min——95%ll30min ----- 100%I,II100(%b时间须自己摸索，不同组织脱水时间不一样。

如果脱水时间过长，则会导致切片的时候有刀痕并且组织不容易切完整。

如果脱水时间过短，细胞间隙水分不能完全脱去，透明的时候会变得浑浊，导致透明液不能完全代替乙醇。

一般说来，像肾脏、胰腺等管状、泡状结构比较多的组织脱水时间可稍微减短，像心脏、肝脏等结构比较致密的组织，脱水时间可稍微长点，一般两次100%乙醇处，每次都不超过30min。

五、透明( 1)二甲苯乙醇30min( 2)二甲苯l 30 min(3) 二甲苯II30min。

如果用二甲苯透明，则须完成后续的包埋工作。

女口果二甲苯里是浑浊状态的，表明组织间隙水没脱干净。

也可以用水杨酸甲酯透明，一般要18-24 h。

六、包埋( 1 )二甲苯石蜡20~30 min( 2)石蜡I 20~30 min( 3)石蜡II 30 min七、切片一般4-7°角，4-5微米厚度八、染色(最后再做)。

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。

2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。

石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法，用于细胞学和组织学的研究。

下面是石蜡切片的操作方法：1. 收集样本：选择要制备切片的组织样本或细胞样本。

样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。

2. 选择合适的浸渍剂：石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中，以固定和保护样本。

常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。

3. 固定样本：将样本固定在固定剂（如甲醛）中，以保持其形态结构。

固定时间根据样本的类型和大小而定，一般在4C下静置数小时或过夜。

4. 脱水：在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中，将固定的样本从水中脱水，使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。

5. 渗透：将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中，使其渗透并置换乙醇。

浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定，一般在一到数小时之间。

6. 包埋：将渗透后的样本置于石蜡中，使其完全浸润。

石蜡块可以预先加热至液态，然后将样本放入其中，或者将样本以及适量的石蜡放入模具中，然后通过加热使其固化。

7. 切片：将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中，使用旋转切片刀将其切成薄片。

切片厚度一般为4-10微米。

8. 取片：用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出，并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。

9. 脱脂：将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中，使其脱去石蜡。

10. 染色：根据需要，可对石蜡切片进行染色，例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。

11. 干燥：将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。

最后，将切片用显微镜载玻片覆盖，并封口保存。

以上就是石蜡切片的一般操作方法，每个实验室可能会根据具体需求进行微调。

在操作过程中要注意安全，避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。