【CN109851678A】一种改良的亚稳定态牛呼吸道合胞病毒融合前体F蛋白质及编码的DNA分子和其

专利名称：牛轮状病毒融合蛋白和犊牛腹泻多联疫苗
专利类型：发明专利
发明人：贺笋,张国庆,闫鹏先,席娜,郭苗苗,肖升东,聂祥祥,孔楚心,李延涛,潘毅平
申请号：CN202010638005.2
申请日：20200706
公开号：CN111518222A
公开日：
20200811
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种牛轮状病毒融合蛋白和犊牛腹泻多联疫苗，涉及分子生物学技术领域。

该牛轮状病毒融合蛋白含有VP6片段，VP6片段含有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，且如下（a）~（c）中至少一个loop区替换为来源于牛冠状病毒的抗原表位和/或来源于大肠杆菌的抗原表位：（a）第168‑177位氨基酸残基，氨基酸序列如SEQ ID NO.1；（b）第194‑205位氨基酸残基，氨基酸序列如SEQ ID NO.2；（c）第296‑316位氨基酸残基，氨基酸序列如SEQ ID NO.3。

该牛轮状病毒融合蛋白中含有多种抗原表位，免疫宿主后能使宿主产生多种抗体。

申请人：天康生物(上海)有限公司
地址：200120 上海市浦东新区自由贸易试验区伽利略路338号8幢2-3层
国籍：CN
代理机构：北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：李双艳
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《基于CRISPR-Cas系统建立牛呼吸道疾病病原的快速检测方法》篇一基于CRISPR-Cas系统建立牛呼吸道疾病病原的快速检测方法一、引言牛呼吸道疾病（Bovine Respiratory Disease，BRD）是一种常见的传染病，严重危害着畜牧业的发展和动物健康。

对于这种疾病的快速诊断和治疗显得尤为重要。

然而，传统的牛呼吸道疾病检测方法存在着周期长、准确性差等不足，不能满足畜牧业对于高效、精准诊断的需求。

因此，我们尝试使用CRISPR/Cas系统，以期望能够快速准确地检测牛呼吸道疾病病原。

二、CRISPR/Cas系统简介CRISPR/Cas系统是一种基于基因编辑的生物技术，它利用了细菌的免疫防御机制来识别和切割外源DNA。

该系统具有高度的特异性、灵敏度和可编程性，因此被广泛应用于基因编辑、基因诊断等领域。

在病原检测方面，我们可以利用CRISPR/Cas系统的特性，构建出能够快速识别特定病原的检测方法。

三、方法构建首先，我们根据牛呼吸道疾病常见的病原（如病毒、细菌等）的基因序列，设计出特定的CRISPR RNA（crRNA）和反义crRNA。

这些crRNA和反义crRNA可以与病原基因组结合，然后引导Cas蛋白对特定病原进行切割。

然后，我们将这些crRNA和Cas蛋白等关键元件构建到一个反应体系中，形成一种能够快速检测牛呼吸道疾病病原的CRISPR/Cas系统。

当该系统与病原接触时，如果存在特定的病原，那么Cas蛋白就会在crRNA的引导下对病原进行切割，从而触发反应体系的信号输出。

四、实验验证我们通过实验验证了该方法的可行性和准确性。

首先，我们使用模拟的病原样本进行实验，发现该方法能够在短时间内（如几小时内）准确检测出病原的存在。

其次，我们使用真实的牛呼吸道疾病样本进行实验，发现该方法与传统的检测方法相比，具有更高的准确性和灵敏度。

五、讨论与展望基于CRISPR/Cas系统的牛呼吸道疾病病原快速检测方法具有许多优点。

专利名称：一种呼吸道合胞病毒融合前F蛋白及其应用专利类型：发明专利
发明人：何金生,马尧,付远辉,彭向雷,郑妍鹏
申请号：CN201910337141.5
申请日：20190425
公开号：CN110054668A
公开日：
20190726
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种呼吸道合胞病毒融合前F蛋白及其应用，属于呼吸道合胞病毒疫苗技术领域。

该融合前F蛋白是野生型F蛋白的第106位、第108位及第109位氨基酸由Arg突变为Asn后，第104位氨基酸由Asn突变为Cys、第155位氨基酸由Ser突变为Cys，或者第58位氨基酸由Thr突变为Cys、第190位氨基酸由Ser突变为Cys。

本发明突变野生型F蛋白的第一个弗林酶切割位点，使Pre‑F 的结构更加稳定，表达量没有下降且M1‑F在293T细胞中表达的融合前表位显著提高；对F蛋白氨基酸位点的第二次突变，使其形成二硫键，与野生型相比具有更稳定的融合前表位，适用于人RSV的其他病毒株；适用于以RSV F蛋白为抗原的各种疫苗形式，如：核酸疫苗、蛋白疫苗、载体疫苗及重组病毒颗粒疫苗。

申请人：北京交通大学
地址：100044 北京市海淀区西直门外上园村3号
国籍：CN
代理机构：北京市商泰律师事务所
代理人：邹芳德
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专利名称：一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白专利类型：发明专利
发明人：汤斌,邱啟欲,朱宁新,赵斌
申请号：CN201611065117.3
申请日：20161128
公开号：CN106518988A
公开日：
20170322
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白，所述牛呼吸道胞合体病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ 048055.1至少有两个位点被半胱氨酸替代，且替代后的半胱氨酸之间由二硫键连接，在此基础上又进行内二硫键、空穴填充和单链连接等改进，同时提供了此类抗原蛋白的制备方法。

抗原蛋白应用蛋白质晶体学的技术和理论，确定蛋白在病毒侵染和致病过程中的结构变化，再根据结构变化的结果对这个关键的病毒蛋白进行基因工程改造，使其成为只侵染不致病、并引起动物体抗体高效反应的蛋白抗原，能够有效的预防和治疗牛呼吸道胞合体病毒感染，以此为基础可以开发出理想的病毒疫苗，有效控制和防范病毒感染带来的损失，具有重大的经济意义和社会意义。

申请人：烟台偌帝生物工程有限公司
地址：261400 山东省烟台市高新区科技大道39号内3号
国籍：CN
代理机构：青岛高晓专利事务所
代理人：黄晓敏
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910160051.3(22)申请日 2019.03.04(71)申请人 甘肃农业大学地址 730000 甘肃省兰州市安宁区营门村1号(72)发明人 王广　张克信　张艳蕾　刘长仲　(74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限公司 11212代理人 谈杰(51)Int.Cl.C12N 15/113(2010.01)C12N 15/10(2006.01)A01N 57/16(2006.01)A01P 7/04(2006.01)(54)发明名称一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法及应用(57)摘要本申请公开了一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法，包括以下步骤：①、根据豌豆蚜的海藻糖酶序列(XM_003245847.3)选取RNAi的靶标区域，并利用Primer5.0设计靶标区域的PCR扩增引物；②、提取豌豆蚜的总RNA并通过反转录过得cDNA，然后用扩增引物对cDNA中含有海藻糖酶基因进行PCR扩增，纯化产物获得目的基因；③、扩增含T7promoter序列的双链目的DNA，然后利用试剂盒合成双链RNA。

权利要求书1页 说明书6页 附图4页CN 109852617 A 2019.06.07C N 109852617A权　利　要　求　书1/1页CN 109852617 A1.一种豌豆蚜海藻糖酶基因的RNA干扰序列的制备方法，所述的方法包括以下步骤：①、根据豌豆蚜的海藻糖酶序列(XM_003245847.3)选取RNAi的靶标区域，并利用Pri mer5.0设计靶标区域的PCR扩增引物：正义链5’-3’GGCGTGGTTTGACTGGGATA反义链5’-3’CAACCAAAACCTGTCTGCGG；②、提取豌豆蚜的总RNA并通过反转录过得cDNA，然后用扩增引物对cDNA中含有海藻糖酶基因进行PCR扩增，纯化产物获得目的基因；③、对①中的特异性引物5’-端加上T7 promoter序列：TRE-1：TAATACGACTCACTATAGGGGGCGTGGTTTGACTGGGATATRE-2：TAATACGACTCACTATAGGGCAACCAAAACCTGTCTGCGG，用于扩增含T7 pro moter序列的双链目的DNA，然后利用试剂盒合成双链RNA。

《基于CRISPR-Cas系统建立牛呼吸道疾病病原的快速检测方法》篇一基于CRISPR-Cas系统建立牛呼吸道疾病病原的快速检测方法一、引言牛呼吸道疾病（Bovine Respiratory Disease，BRD）是导致全球养牛业重大经济损失的常见疾病之一。

由于病原体的多样性，快速、准确地检测BRD病原成为防治该病的关键。

传统的检测方法如PCR、血清学检测等虽然具有一定的准确性，但操作复杂、耗时长，难以满足快速诊断的需求。

近年来，随着基因编辑技术的发展，CRISPR/Cas系统作为一种新兴的基因工程技术，为BRD病原的快速检测提供了新的可能性。

本文旨在基于CRISPR/Cas系统建立一种牛呼吸道疾病病原的快速检测方法。

二、CRISPR/Cas系统简介CRISPR/Cas系统是一种生物体内的天然免疫防御系统，具有特异性切割外源DNA的功能。

其基本原理是利用Cas蛋白与CRISPR序列特异性结合，形成复合物后切割外源DNA分子。

这一特性使得CRISPR/Cas系统在基因编辑和基因检测方面具有巨大的应用潜力。

三、基于CRISPR/Cas系统的牛呼吸道疾病病原快速检测方法1. 确定靶标基因：根据牛呼吸道疾病常见的病原体，如病毒、细菌等，选择特异性较强的靶标基因。

2. 设计CRISPR/Cas系统元件：根据靶标基因序列设计合适的CRISPR RNA和Cas蛋白，形成CRISPR/Cas系统。

3. 构建检测体系：将CRISPR/Cas系统与报告系统（如荧光报告系统）相结合，形成一种能够在体外实现对BRD病原快速检测的体系。

4. 样品处理与检测：采集牛呼吸道样品，提取DNA并进行PCR扩增。

将扩增产物与CRISPR/Cas系统混合，观察是否有切割反应及报告信号的产生。

5. 结果分析：根据报告信号的强弱及切割反应的发生情况，判断样品中是否存在BRD病原及其浓度。

四、实验结果与讨论1. 实验结果：通过实验验证了基于CRISPR/Cas系统的牛呼吸道疾病病原快速检测方法的可行性。

牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的生物学功能郭雪莲;李永琴;李瑞乾;李昊;靳双媛;王雪妍;杜家伟;许立华【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2024(55)4【摘要】牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。

BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F 蛋白)是BRSV表面主要的包膜糖蛋白,参与病毒吸附、融合宿主细胞的过程。

G和F蛋白含多种识别表位,能够刺激机体产生中和抗体反应,常常是牛呼吸道合胞体病(bovine respiratory syncytial disease, BRSD)疫苗开发所关注的重点。

探究G和F蛋白在BRSV侵染中的作用机理对于病毒致病机理分析、疫苗开发具有重要意义。

本文旨在对牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的结构功能及有关疫苗的开发加以综述,以期为BRSV疫苗的研制和BRSD的防控提供参考。

【总页数】10页(P1478-1487)【作者】郭雪莲;李永琴;李瑞乾;李昊;靳双媛;王雪妍;杜家伟;许立华【作者单位】宁夏大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5【相关文献】1.表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定2.牛呼吸道合胞体病毒主要编码蛋白研究进展3.基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用4.牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定5.牛呼吸道合胞体病毒G蛋白特异性核酸适配体的筛选及初步应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

牛呼吸道合胞体病毒主要编码蛋白研究进展李梦莹;马小静;张凯;孙鑫鹏;王文佳;程成;许立华【摘要】牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起反刍动物呼吸道疾病的主要病毒之一,犊牛对该病毒的感染率、发病率和病死率均较高,严重危害养殖的经济效益.牛呼吸道合胞体病毒主要编码蛋白F蛋白和G蛋白上的某些抗原表位可刺激中和抗体反应,而且是BRSV唯一能够在动物模型中诱导中和抗体并产生保护性免疫应答的蛋白.N蛋白具有高度保守性,可诱导BRSV的保护性免疫,小疏水性蛋白(SH)有助于维持病毒外壳稳定性.目前,在该病的防控措施上仍然存在未解决的问题,可根据BRSV 编码蛋白的不同特性与功能,研发出一种免疫效果良好、安全高效的疫苗,用以防控BRSV的感染.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2019(040)004【总页数】4页(P88-91)【关键词】牛呼吸道合胞体病毒;编码蛋白;流行现状【作者】李梦莹;马小静;张凯;孙鑫鹏;王文佳;程成;许立华【作者单位】宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021;宁夏大学农学院 ,宁夏银川 750021【正文语种】中文【中图分类】Q819;S852.659.5牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus，BRSV)引起牛的一种急性、接触性传染病。

BRSV属于副黏病毒科、肺病毒属，单股负链RNA病毒，是引起犊牛及其他反刍动物发生急性呼吸道疾病的主要病毒之一[1]。

90%以上的犊牛可被牛呼吸道合胞体病毒感染，潜伏期约为2 d～5 d，临床表现为轻度抑郁、食欲不振、急性发热、连续咳嗽、呼吸急促、眼角流泪、大量垂涎、流鼻液等[2]，牛呼吸道合胞体病对畜牧业造成严重危害。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710000306.0(22)申请日 2017.01.02(71)申请人 刘昕地址 510663 广东省广州市广州科学城万科东荟城A4-303(72)发明人 王弋　刘昕　(51)Int.Cl.C12N 15/85(2006.01)C12N 15/866(2006.01)C12N 15/81(2006.01)C07K 19/00(2006.01)C07K 16/10(2006.01)A61K 39/295(2006.01)A61K 39/155(2006.01)A61P 31/14(2006.01)(54)发明名称一种新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法和应用。

所述的RSV pre-F融合蛋白载体由如下方法制备得到：将第三个半胱氨酸(第182位)突变为丝氨酸的G蛋白CX3C类似域的天然颈环loop结构域连接到pre-F的铰链区。

所述的RSV pre-F融合蛋白保持了RSV pre-F的位点的构象，保证了其高免疫原性，能够诱导高水平的pre-F的中和抗体，减少RSV病毒对机体免疫的操控，从而减轻免疫造成的损伤。

本发明所描述的RSVpre-F融合蛋白可潜在地应用于：抗人RSV疫苗研发；抗人RSV感染的中和抗体和药物筛选；作为基因载体应用于其它病原体疫苗的研发。

权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 108265079 A 2018.07.10C N 108265079A1.一种新型呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体的制备方法，其特征在于，由如下方法制备得到：基因全合成法将G蛋白CX3C类似域天然的颈环loop结构域直接连接到pre-F蛋白的a4-a5区域铰链区。

2.根据权利要求1所述的呼吸道合胞体病毒pre-F融合蛋白载体，其特征在于：G蛋白CX3C类似域的第三个半胱氨酸(第182位)突变为丝氨酸。

专利名称：牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：赵晓民,童德文,王凯丽,刘丹
申请号：CN202011602492.3
申请日：20201229
公开号：CN112593013A
公开日：
20210402
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒，包括由SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.5所示核苷酸序列组成的牛副流感病毒RPA检测引物组，以及由SEQ.ID.NO.8和SEQ.ID.NO.10所示核苷酸序列组成的牛呼吸道合胞体病毒RPA检测引物组。

所述试剂盒基于重组酶聚合酶扩增法，以利用RNA反转录形成的cDNA为模板并在优化的反应温度和时间下进行扩增反应，利用核酸凝胶电泳获得检测结果。

本发明可用于同时对牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒进行检测，操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为牛病原体的现场筛查提供了快速检测试剂。

申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省咸阳市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安通大专利代理有限责任公司
代理人：范巍
更多信息请下载全文后查看。