高效液相色谱法测定水中微量苯及甲苯

华南师范大学实验报告课程名称仪器分析实验实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型□验证□设计□综合实验时间2010 年 3 月31 日实验指导老师实验评分一、实验目的1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。

二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内。

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，记录成数据。

液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5%。

定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。

定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。

外标法为标准物质标准溶液制定标准曲线法；内标法为在标准溶液、样品溶液中加入内标物质，以相对峰高、相对面积对标准物质的浓度制定标准曲线；面积归一化法假定所有出峰物质的吸光系数相同，计算某物质的峰面积占所有峰面积的百分比。

三、仪器与试剂：1.仪器：SCL-10A vp紫外可见双波长检测器；SPD-M10A vp柱温箱；LC-10AT高效液相色谱仪；10μL微量注射器2.试剂：2μL/mL苯标液；2μL/mL甲苯标液；0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的苯与甲苯的混合标准溶液；甲醇溶液；待测试样溶液四、实验内容与步骤：1.选择合适的流动相配比，优化色谱条件设置有关参数：控制流速为1mL/min。

柱温30℃，检测波长354nm。

设置流动相配比（甲醇：水=1：1），用10μL微量注射器注射5μL的10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液进行测定，观察其分离度和出峰时间。

高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【摘要】苯、甲苯、乙苯和二甲苯是涂料和油漆等工业中的主要原料和溶剂,使用极其广泛,危害极其严重.苯系物在水性涂料中含量较低,检测灵敏度要求高.建立了高效液相色谱测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量的分析方法.样品经甲醇提取,苯、甲苯、乙苯及二甲苯检出限均为5 mg/kg.在2个浓度水平上做回收试验,回收率分别在95.9％～ 102.0％之间,相对标准偏差(n=6)≤3％.【期刊名称】《安徽化工》【年(卷),期】2018(044)006【总页数】3页(P118-120)【关键词】苯;甲苯;乙苯;二甲苯;水性涂料;液相色谱【作者】姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【作者单位】安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051【正文语种】中文【中图分类】O657.71;TQ630.7涂料使用的有机溶剂可能含有苯、甲苯、乙苯和二甲苯等有毒有害成分。

苯系物是属于极度危害的化学物质，可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而产生危害，其毒性主要表现在对人体至畸、致突变和致癌等方面，可引起各种类型的白血病[1-2]。

由于气相色谱流动相单一，操作简便，分离良好，因此，关于苯系物的气相色谱检测方法层出不穷，不断成熟，并被应用在各个领域[3-4]。

气相色谱在苯系物的定性方面较为繁杂，准确性有待提高。

然而，液相色谱可以通过化合物因光学特性所产生的光谱而准确地界定属性。

高效液相色谱法分离测定废水中的苯和甲苯一、实验目的",1、了解LC-20AT高效液相色谱仪的流路和电路，学会仪器的基本操作；",2、掌握高效液相色谱基本的定性定量方法；",3、了解色谱参数N、K、R的意义和计算方法。

二、原理与技术方法简介：高效液相色谱是色谱分析的一个重要分支，是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种现代仪器分析方法方法特点：高压、高效、高速、高灵敏度分析对象：高沸点、热不稳定有机及生化、环境试样等根据流动相和固定相的相对极性不同可以将高效液相色谱分为正相色谱和反相色谱。

正相色谱：流动相极性小，常为非极性的烷烃；固定相极性大，通常为硅胶、纤维素等；反相色谱：流动相极性大，通常为水-甲醇溶液、水-乙腈溶液等；固定通常为键合的C18、C8、C4、Phenyl等，极性较弱。

",反相高效液相色谱的应用相对较广泛。

定性依据：保留值定性、峰高增量法定性、与其它方法联用。

定量参数：峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。

定量方法：外标法、内标法、归一化法分配系数K在色谱法中，当样品加入后，样品中各组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。

在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度比，称为分配系数，用K表示。

如果各组分在固定相中的分配系数不同，它们就有可能达到分离。

1.一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；2.试样一定时，K主要取决于固定相性质；3.每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；4.选择适宜的固定相可改善分离效果；5.试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础；6.某组分的K=0时，即不被固定相保留，最先流出。

分离度分离条件的选择主要是提高“难分离物质对”的分离度三、实验用品LC-20AT高效液相色谱仪超声波清洗器微孔过滤装置2、试剂：甲醇（AR）、苯（AR）、甲苯（AR）、二次蒸馏水四、操作步骤1、液相色谱分析条件检测器：二极管阵列检测器流动相：甲醇-水（体积比）=9：1流速：1mL/min检测波长：254nm进样量：20μL2、准备工作3、方法的编辑4、运行样品5、注意事项五、数据处理采用LC-20AT高效液相色谱仪化学工作站数据处理程序处理数据。

高效液相色谱法测定水中微量苯及甲苯
刘少泉;朱连友;刘淑娟
【期刊名称】《铁道医学》
【年(卷),期】1990(18)1
【摘要】用高效液相色谱法测定水中苯系物。

根据苯系物对^(18)C反相柱具有不同吸附性的原理,用甲醇一乙酸铵为流动相,将苯、甲苯、二甲苯等物质较好地分离,不需气化或萃取等较繁杂的前处理程序,其他物质对其又无于扰,操作方法简便,灵敏度高。

最低检出限为0.03μg/ml,回收率在94％以上。

【总页数】2页(P47-48)
【关键词】色谱法;苯;甲苯;测定
【作者】刘少泉;朱连友;刘淑娟
【作者单位】吉林铁路中心卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R123.1
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佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽
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高效液相色谱法分析环境水样中4种苯系物王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【摘要】建立了一种高效液相色谱测定水样中4种苯系物(苯、甲苯、乙苯、对二甲苯)的方法.分析柱为Diamonsil5μmC18,250×4.6mm,检测波长为259nm,流动相比例V(乙腈):V(水)=75:25,流量大小为1.000mL/min,色谱柱温度为35℃.方法的线性范围为0.0100～10.0mg/L,相关系数大于0.9997,4种苯系物的检出限(S/N=3)为1.9μg/L～3.2μg/L,方法的重复性良好,峰面积的相对标准偏差(n=7)小于4.6％.样品中未检出,采用加标浓度为0.100mg/L和1.00mg/L进行方法验证,实际水样的加标回收率为82.3％～97.6％,表明该方法可有效用于水样中苯系物的灵敏、准确分析.【期刊名称】《兴义民族师范学院学报》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】6页(P119-124)【关键词】苯系物;高效液相色谱;环境水样【作者】王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【作者单位】兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400【正文语种】中文【中图分类】O656.9Abstract:A method for the simultaneous determination offour benzenes,(benzene,toluene,ethylbenzene,and p-xylene)in water samples was established using high performance liquid chromatography.The analytical column was performed on a Diamonsil C18(5μm×4.6 mm×250 mm),the quantitation analysis of four benzenes were achieved by UV detection at 259 nm,the mobile phase used wasacetonitrile/water(75:253,v/v),the flowrate of the mobile phase was 1.000 mL/min,and the column temperature was kept on 35°C.The linear rangesof four benzenes were in the range of 0.0100 mg/L-10.0 mg/L with correlation coefficients more than 0.9997.The method detectionlimits(S/N=3)off our benzenes were between 1.9 μg/Land 3.2 μg/L.The relative standard deviations(n=7)were less than 4.6%.The spiked recoveries at twomatrixspiked concentrations were in the range of82.3%～97.6%.The results showed that the developed method was sensitive and accurate，and was suitable for the analysis ofbenzenes in water sample．Key words:Benzenes;High Performance LiquidChromatography;Environmental Water Samples苯系物是苯及其衍生物的统称，是塑料、染料、合成纤维、橡胶、药物等的重要原料和有机溶剂，广泛应用于石油化工、医药、农药、塑料、制革等工业中，排放的废水可对环境造成严重的污染[1-2]。

液体中苯和甲苯的检测方法
液体中苯和甲苯的检测方法有以下几种：
1.气相色谱法：将液体样品蒸发至干燥，将蒸发后的物质通过气相色谱仪进行分析，可以得到苯和甲苯的含量。

2.红外光谱法：将液体样品通过红外光谱仪进行分析，苯和甲苯的分子结构不同，其红外光谱图也不同，可以通过比对标准光谱图进行检测。

3.紫外-可见光谱法：将液体样品通过紫外-可见光谱仪进行分析，苯和甲苯都有比较明显的吸收峰，可以通过测定吸收峰的强度来计算其含量。

4.荧光光谱法：将液体样品通过荧光光谱仪进行分析，苯和甲苯的荧光光谱图也不同，可以通过比对标准光谱图进行检测。

以上方法中，气相色谱法和红外光谱法的检测精度较高，但需要较为复杂的仪器和操作步骤；紫外-可见光谱法和荧光光谱法则操作简单，但检测精度稍低。

根据实际需要选择合适的方法进行检测。

液相色谱法测定水样中的苯一、实验目的1．熟悉戴安SmmitP680A液相色谱仪的整套装置、工作原理、工作流程；会较熟练操作和使用Chromeleon控制分析软件包。

2．掌握外标法测定苯和甲苯的实验方法。

二、实验原理液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。

测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定相应组分的含量。

高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置。

贮液器中存贮的载液（用作流动相的液体常需除气）经过过滤后由高压泵输送到色谱柱入口（当采用梯度洗脱时，一般需用双泵系统来完成输送）。

样品由进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。

分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。

如果需收集馏分作进一步分析，则在色谱柱出口将样品馏分收集起来，对于非破坏型检测器，可直接收集通过检测器后的流出液。

其中输液泵，色谱柱及检测器是仪器的关键部件。

三、仪器与试剂1．仪器1）SmmitP680A液相色谱仪(戴安公司)四元梯度泵P680A170四通道阵列紫外检测器UVD170U柱温箱TCC-100色谱柱：C18色谱柱及保护柱手动进样器流动相：甲醇－水(80+20) 流速：1.0 mL·min－1检测波长：254 nm2）微量注射器、容量瓶2．试剂甲醇（色谱纯）、二次蒸馏水、苯五、实验步骤1．配制标准溶液以甲醇为溶剂，于容量瓶中配制苯标准溶液，浓度分别为1.0×10-5、2.0×10-5、5 .0×10-5和1.0×10-4 mol/L 。

液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯一、实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯二、实验目的：1．掌握高效液相色谱仪的原理和仪器构成。

2．了解样品处理、测定和数据处理的全过程，掌握标准曲线定量方法。

三、实验原理：高效液相色谱和其化液相色谱技术一样，其基本原理：利用欲分离的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动时，这些组分在此两相中的分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，最后使这些组分都得到分离。

高效液相色谱法是常用的分析方法，由于组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致组分在固定相上的保留程度不一样。

按分离原理可将HPLC分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。

本次实验是利用分配色谱原理，根据各待测物在互不相溶的两相中的溶液解度不同。

因而具有不同的分配系数。

在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需用进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。

四、仪器与试剂1．仪器高效液相色谱仪；微量注射器（1μL）；贮液胶管。

2．试剂甲醇（分析纯）、苯（2μL/L）、甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（4μL/L）、苯与甲苯（10μL/L）、样品。

五、实验步骤与内容1．仪器操作：依次打开高压泵、检测器、工作站。

参考色谱条件：流动相、甲醇-水、等梯度洗脱、流速、柱温、进样量（10μL）、紫外检测波长。

2．仪器达到稳定后，依次注射不同浓度的苯溶液、甲苯溶液、及苯与甲苯的混合溶液，根据计算机给出的数据，以溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

同时根据样品的峰面积在曲线上查出样品中苯与甲苯的浓度。

3．实验完毕，清洗色谱系统后，关机。

六、数据的记录及结果分析0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/1341665苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)4.711/1988903甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.669/13460994.725/2013398苯与甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350400450mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.676/26278404.732/3943152苯与甲苯（4μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-1001002003004005006007008009001000mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.672/58438114.730/8970976苯与甲苯（10μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/20655784.710/3045297样品结果分析：根据实验原理，各待测物在互不相溶的两相溶解度不同，具有不同的分配系数，在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同。

液体中苯和甲苯的检测方法苯和甲苯是常见的有机化合物，广泛应用于化工、医药、涂料等领域。

然而，苯和甲苯对人体有一定的毒性，因此需要对其进行检测。

本文将介绍液体中苯和甲苯的检测方法。

一、气相色谱法气相色谱法是一种常用的检测有机化合物的方法。

该方法利用气相色谱仪对样品中的化合物进行分离和检测。

对于液体中的苯和甲苯，可以通过以下步骤进行检测：1. 取一定量的液体样品，加入内标物质，如二氯苯。

2. 加入适量的溶剂，如乙腈，将样品溶解。

3. 用氮气吹干样品，使其完全蒸发。

4. 加入适量的衍生化剂，如BSTFA，使样品中的苯和甲苯发生衍生化反应。

5. 将样品注入气相色谱仪进行分离和检测。

二、紫外分光光度法紫外分光光度法是一种利用化合物吸收紫外光的特性进行检测的方法。

对于液体中的苯和甲苯，可以通过以下步骤进行检测：1. 取一定量的液体样品，加入适量的溶剂，如乙醇。

2. 用紫外分光光度计对样品进行检测，测量其在特定波长下的吸光度。

3. 根据标准曲线计算样品中苯和甲苯的含量。

三、气相色谱-质谱联用法气相色谱-质谱联用法是一种结合气相色谱和质谱技术的检测方法。

该方法可以对样品中的化合物进行分离、检测和鉴定。

对于液体中的苯和甲苯，可以通过以下步骤进行检测：1. 取一定量的液体样品，加入内标物质，如二氯苯。

2. 加入适量的溶剂，如乙腈，将样品溶解。

3. 用氮气吹干样品，使其完全蒸发。

4. 加入适量的衍生化剂，如BSTFA，使样品中的苯和甲苯发生衍生化反应。

5. 将样品注入气相色谱-质谱联用仪进行分离、检测和鉴定。

液体中苯和甲苯的检测方法有多种，其中气相色谱法、紫外分光光度法和气相色谱-质谱联用法是常用的方法。

在实际应用中，应根据具体情况选择合适的检测方法。

液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯一、实验目的1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。

二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、主要仪器和试剂主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱]；25μL微量注射器试剂：苯标准溶液：2.0μL/mL甲苯标准溶液：2.0μL/mL苯、甲苯混合标准溶液：2.0μL/mL、4.0μL/mL、10.0μL/mL甲醇：80%苯和甲苯混合待测溶液四、实验步骤1、按操作规程开机，并调好最佳色谱条件，使仪器处于工作状态。

控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；2、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用25μL微量注射器分别进样10μL苯和甲苯混合待测溶液，10μL苯标准溶液（2.0μL/mL）和10μL甲苯标准溶液（2.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。

3、苯、甲苯定量分析在最佳条件下，待基线走稳后，用25μL微量注射器分别进样2.0μL/mL、4.0μL/mL、10.0μL/mL的苯和甲苯混合标准溶液10μL。

观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。

绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。

4、苯和甲苯混合待测溶液分析根据4.2中得到的苯和甲苯混合待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从4.3绘制的标准曲线上查出苯和甲苯混合待测溶液中苯和甲苯的各自的浓度。

液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱法（HPLC）是一种高效的分离、定量和鉴定化合物
的方法。

在液相色谱法中，样品被溶解在一种流动相中，然后通过色谱柱进行分离。

在本例中，我们可以使用反相液相色谱法来分离混合物中的苯和甲苯。

操作步骤如下：
1. 准备反相液相色谱柱。

考虑到苯和甲苯的相似性，建议选择一种C18柱。

2. 准备样品。

将待测混合物加入适量的溶剂中，并用过滤器过滤，以去除悬浮物和杂质。

建议将样品浓度控制在100 μg/mL
左右。

3. 准备流动相。

在本例中，建议使用甲醇和水的混合物作为流动相，比例可根据需要进行调整。

常规建议采用50%甲醇-50%水的流动相。

4. 进行液相色谱分析。

将样品以一定的流速注入色谱柱，并通过检测器检测相应的信号。

在本例中，甲苯和苯可以通过紫外检测器或荧光检测器进行检测。

建议采用紫外检测器，检测波长为254 nm，以获得更好的检测结果。

5. 进行定量分析。

通过标准曲线和峰面积计算得出混合物中苯和甲苯的含量。

液相色谱法是一种快速、灵敏、选择性高的方法，可以用于分析各种复杂的混合物。

在本例中，采用反相液相色谱法可以有效地分离苯和甲苯，获得准确的定量结果。