化学发光试剂吖啶酯
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1 绪论1.1 常见的化学发光试剂及其特点化学发光按其反应介质的状态,分为气相化学发光和液相化学发光两大类。
NO,NO2,SO2等气相化学发光测定体系常应用于大气污染物测定;液相化学发光中常用的试剂有鲁米诺、光泽精、吖啶酯、过氧草酸酯、洛粉碱、1,2二氧杂环丁烷等,主要用于过氧化氢、金属离子,以及有机化合物的测定。
鲁米诺类、过氧草酸酯类、吖啶酯类发光试剂是实际分析测定中常用的几种重要发光试剂,在药物分析,环境监测和食品分析方面有着广泛的应用[1]。
近年来,随着化学发光应用技术及仪器的发展,尤其是化学发光试剂修饰,以及化学发光与其它分析检测技术的联用,大大拓展了化学发光分析检测技术的应用领域。
1.1.1 鲁米诺化学发光体系鲁米诺(Luminol)化学名为(5-氨基-2,3-二氢1,1二杂氮萘二酮,又名3—氨基邻苯二甲酞阱),化学结构见图1.1。
其结构简单、易于合成、性质稳定、无毒、环境友好、水溶性好,是应用最多的化学发光试剂之一。
NH2ONHNHO图1.1 鲁米诺的化学结构Fig 1.1 The Structure of Luminol鲁米诺的化学发光性质最早于1928年被Albrechi H O发现,他发现鲁米诺在碱性溶液中,加入过氧化氢可观测到微弱的发光现象,在此基础上加入适当的氧化剂和催化剂,可以大大提高其化学发光强度。
过氧化氢酶、辣根过氧化酶、铁盐、锰盐、过渡金属离子、氨基配合物等均可以作为催化剂或氧化剂增强鲁米诺的化学发光,因此,根据化学发光检测分析的原理,由于上述物质影响了鲁米诺的化学发光速率,并进而影响其化学发光强度,使得鲁米诺可以用于上述物质的分析检测[2-3]。
鲁米诺的化学发光机理通常被认为已经被研究得比较透彻,但实际上,其被氧化中间产物还没有得到统一的结论,只是确定了其最终发光的物质为氨基邻苯二甲酸盐离子。
鲁米诺的化学发光机理如图1.2所示。
鲁米诺可以用于金属离子的含量测定,测定海水中铁离子的含量的方法已经得到建立起来,并应用于海洋环境监测,另外,鲁米诺在过渡金属检测方面也得到了大量的应用;除了过渡金属离子之外,镁离子,钡离子,钙离子等碱土金属离子也可以利用鲁米诺化学发光体系进行检测[4]。
化学发光-吖啶酯,鲁米诺化学发光 (ChemiLuminescence ,简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。
化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。
体系产生化学发光,必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。
一个化学反应要产生化学发光现象,必须满足以下条件:第一是:该反应必须提供足够的激发能(对于蓝光发射需300kj.mol-1,红光需150kj.mol-1),导致电子从基态跃迁至激发态。
第二是:化学反应的能量至少能被一种物质所说接受并使之生成激发态。
第三是:处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光量子效率时期能释放出光子,或能转移它的能量给另一个分子使之处于激发态并使发出光子化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。
对于一般化学发光反应,值约为 10 - 6 ,较典型的发光剂,如鲁米诺,发光效率可达 0 . 01 ,发光效率大于 0 。
01的发光反应极少见。
现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。
1. 鲁米诺及其衍生物鲁米诺(3—氨基—邻苯甲酰肼,1),异鲁米诺(2)及其衍生物(如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼,ABENH,3)在发光分析中被使用。
鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化,发生化学发光反应,辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。
在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢,但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。
最常用催化剂是金属离子,在很大浓度范围内,金属离子浓度与发光强度成正比,从而可进行某些金属离子的化学发光分析,利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物,达到很高的灵敏度。
吖啶酯化学发光和电化学
吖啶酯化学发光和电化学发光是两种常见的发光体系,各自具有独特的优势和应用领域。
吖啶酯化学发光体系以其简单、高效、灵敏和稳定的特点在免疫分析领域中发挥着重要作用。
吖啶酯在碱性条件下,通过与过氧化氢反应产生发光,无需催化剂,操作简便。
此外,吖啶酯发光快速集中,强度大,半衰期约为0.9秒,能在短时间内实现高效检测。
由于其发光性质,吖啶酯适用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析。
电化学发光体系则是通过电化学反应产生发光,具有较高的灵敏度和特异性。
电化学发光体系通常采用有机染料作为发光试剂,如螺旋金刚烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物。
在电化学发光分析中,染料在电极表面发生氧化还原反应,产生电子跃迁并发出光子。
电化学发光体系具有较高的灵敏度和特异性,适用于多种分析物的检测。
尽管吖啶酯化学发光和电化学发光各自具有优点,但在某些情况下,一种发光体系可能比另一种更适合特定的分析应用。
例如,当需要快速、简便的检测方法时,吖啶酯化学发光体系可能是更好的选择。
而当对灵敏度和特异性要求较高时,电化学发光体系可能更合适。
总之,吖啶酯化学发光和电化学发光都是具有重要应用价值的发光体系。
它们在不同的分析场景中发挥着重要作用,为科研和临床检测提供了高效、灵敏和可靠的方法。
随着科学技术的不断发展,这两
种发光体系在未来的分析领域中将得到更广泛的应用,并为人类生活带来更多便利。
吖啶酯化学发光试剂缺陷
吖啶酯化学发光试剂是一种常用的化学发光试剂,用于检测生物、环境和食品等样品中的分析成分。
尽管它具有许多优点,但也存在一些缺陷,如下:
1.光稳定性:吖啶酯化学发光试剂相对于其他发光试剂来说
光稳定性较差,在长时间的照射下容易受到光降解而失去
发光效果。
这导致在实验过程中需要进行严格的光照控制,以防止试剂的降解。
2.反应速度:吖啶酯化学发光反应的速度相对较慢,需要一
定的时间才能达到最大的发光强度。
这使得在实验中需要
对反应时间和温度进行有效的控制,以确保实验结果的准
确性。
3.反应选择性:吖啶酯化学发光试剂的反应选择性相对较低,
容易受到其他样品成分的干扰。
这可能导致在复杂的样品
类型中分析目标分析物时出现误差,需要进行适当的样品
前处理和干扰剂的消除。
4.美观度:吖啶酯化学发光试剂的发光颜色一般偏蓝,缺乏
其他颜色的选择。
这在某些应用领域中可能带来一定的限
制,例如在艺术、装饰或视觉效果方面的应用。
虽然吖啶酯化学发光试剂存在一些缺陷,但其仍然广泛应用于科学研究、生物医学、环境监测等领域。
研究人员在使用时需要充分了解其特性,并采取相应的措施来解决或减轻这些缺陷
对实验的影响。
同时,也需要不断地进行技术改进和研发,以提高吖啶酯化学发光试剂的性能和应用范围。
吖啶酯化学发光原理
吖啶酯的化学发光与鲁米诺不一样,鲁米诺是长光型,可长时间发光,而吖啶酯属于闪光性,发光时间短发光迅速,通常只有数秒。
吖啶酯体系
在碱性条件下加入激发剂过氧化氢0.4s后发射光强度达到最大,半衰期
为0.9s,2s内发光基本结束,可以实现快速检测。
吖啶酯与链霉亲和素
结合后,可使其拥有更好的性能。
链霉亲和素在吖啶酯发光中的放大作用:
链霉亲和素是由链霉菌分泌的一种蛋白质,它能与生物素发生特异性
结合,它们之间的结合力是目前已知的最强的非共价键结合力。
因为这一
特性,链霉亲和素-生物素反应体系在纯化和检测领域得到了广泛的应用。
链霉亲和素以同源四聚体的形式存在,每摩尔的四聚体分子可结合4摩尔
的生物素分子,所以在免疫检测领域具有信号放大作用。
吖啶酯化学发光、链霉亲和素磁珠-生物素放大反应体系包括:吖啶
酯标记的抗体或抗原、生物素标记的抗体或抗原、链霉亲和素包被带有羧
基或者Tosyl(对甲苯磺酰基)官能团的磁珠;所述的磁珠粒径0.1-5μm。
由于生物素和链霉亲和素是以4:1的比例像结合,所以吖啶酯-生物素-抗
原抗体复合物也是以4倍的比例与链霉亲和素结合,这样发光信号也扩大
了4倍,检测灵敏度更高。
吖啶酯的化学发光免疫分析技术本身的灵敏度和特异性就非常高,引
入了特异性结合的链霉亲和素-生物素系统后,放大了检测信号,使吖啶
酯的CLIA有了更好的实用性。
吖啶酯化学发光法
吖啶酯化学发光法是一种利用吖啶酯与过氧化氢反应产生化学发光的方法。
该方法常用于测定过氧化氢或过氧乙酸含量。
具体实验步骤如下:
1. 准备样品溶液:将待测的过氧化氢或过氧乙酸样品溶解在适当的溶剂中。
2. 添加指示剂:向样品溶液中加入吖啶酯指示剂,该指示剂可以选择2,3,5-三苯基吲哚吖啶酯(TPIN)或其他类似化合物。
3. 加入催化剂:向溶液中加入过氧化氢催化剂,常用的催化剂有亚铁离子、过硫酸铵等。
4. 反应触发:将反应溶液加热或用其他方法使反应迅速进行。
5. 观察发光:观察溶液是否发生化学发光,并根据发光强度或发光时间判断样品中过氧化氢或过氧乙酸的含量。
吖啶酯化学发光法具有灵敏度高、反应特异性强、操作简单等优点,常用于生化分析和临床检验中测定过氧化氢或过氧乙酸的含量。
吖啶酯在免疫分析及DNA测定中的应用摘要:吖啶酯作为一种高效的化学发光试剂,在临床免疫分析,DNA 分析,生物酶活性测定等方面有着广泛的应用。
本文重点介绍吖啶酯在免疫分析及 DNA 测定中的应用。
其中在免疫分析方面可以用于标记,跟踪蛋白等,在DNA方面,可用于基因测定或微生物测定。
关键词:吖啶酯, 免疫分析, DNA测定,应用前言吖啶酯衍生物是一类量子产率较高的化学发光试剂,由于它发光过程所需的引发剂少、背景和噪音低、灵敏度高,常用于临床免疫测定,作核酸分子探针,测定生物酶的活性或其它应用[84-89 ],可以标记抗体广泛应用于免疫测定;这类化合物只要在过氧化氢存在下就迅速产生化学发光,具有很高的化学发光效率。
又由于吖啶酯具有与乙酰苯酯相似的结构,具有单一酯键,检测的灵敏度高,因此可用于酶活性的检测。
目前,亚科化学主要推出了以下吖啶酯衍生物:吖啶酯(NSP-DMAE-NHS),黄色粉末,CAS号: 194357-64-7,分子式: C30H26N2O9S,分子量:590.6,含量:≥95.0%,储存条件:2-8℃冷藏,密封、干燥、避光保存。
吖啶盐(NSP-SA-NHS),黄色粉末,CAS号: 199293-83-9,分子式: C32H31N3O10S2分子量: 681.733,含量:≥97%,贮存条件:常温。
吖啶盐(DMAE-NHS),黄色粉末,CAS号: 115853-74-2,分子式: C29H26N2O10S,分子量: 594.589。
吖啶酯的应用吖啶酯在免疫分析中的应用Ianweek L 等人合成了[4-2-琥珀亚胺氧代碳酰乙基)-酚]10-甲基吖啶 9-甲酸苯酯,用它标记在抗体上测定人α-胎蛋白,其检测灵敏度为1.3kiloIU/L,与放射免疫法分析结果一致。
RichardsonAP 报道的吖啶酯 10-甲基吖啶 9-甲酸对氨基苯酯,标记在黄体酮上作半抗原,测定非怀孕灰女血浆中的黄体酮含量,其检测灵敏度达 0.64mol/L。
吖啶酯化学发光法原理嘿,朋友!你知道吗,说起吖啶酯化学发光法原理,那可真是一个神奇又有趣的领域。
咱先来说说啥是化学发光。
就好比夜晚的萤火虫,它们一闪一闪的,那就是一种自然的发光现象。
而化学发光呢,就是在化学反应中产生的光。
吖啶酯就是这场“发光大秀”中的主角之一。
它就像一个神奇的小精灵,只要给它特定的条件,就能释放出耀眼的光芒。
想象一下,吖啶酯分子就像是一个个藏着能量的小宝藏。
当它们遇到某些物质,比如说氧化剂,就像点燃了导火索一样,瞬间把储存的能量以光的形式释放出来。
这光芒可不简单,通过专门的仪器能被捕捉和测量。
你看,这和我们点亮生日蜡烛是不是有点像?蜡烛被点燃,发出温暖的光。
而吖啶酯被特定物质激发,发出的可是能告诉我们很多秘密的光呢!在这个过程中,吖啶酯的结构和性质起着关键作用。
它的分子结构就决定了它具有这种神奇的发光能力。
这就好比不同的钥匙开不同的锁,吖啶酯就是那把独特的钥匙,能打开化学发光的这扇神秘之门。
再打个比方,吖啶酯化学发光就像是一场精心编排的舞蹈。
各个反应物就是舞蹈演员,它们按照特定的节奏和步伐相互作用,最终呈现出精彩的发光表演。
这种发光法的灵敏度超高,一点点微小的变化都能被它察觉到。
这就好比是一个超级敏锐的侦探,任何蛛丝马迹都逃不过它的“眼睛”。
而且吖啶酯化学发光法速度还特别快,瞬间就能给出结果。
这多厉害呀,不像有些方法,得等啊等,急死人。
总的来说,吖啶酯化学发光法原理就是通过特定的化学反应,让吖啶酯这个神奇的小家伙释放出能够被我们利用和检测的光。
这不仅在医学检测、生物研究等领域大显身手,也为我们探索未知的世界打开了一扇明亮的窗户。
是不是很神奇?。
吖啶酯化学发光原理吖啶酯(Amine-ester)是一种化学荧光染料,其发光原理与分子内电子转移(Internal charge transfer, ICT)有关。
在ICT过程中,电子由一个分子的基态转移到另一个分子的激发态,导致荧光发射。
吖啶酯染料是由氨基苯甲酸酯和酚醛类化合物反应所得。
它的结构中包含了大量芳香环和共轭双键,这些特征是发光的关键。
吖啶酯染料能够吸收紫外光(通常在300 nm至400 nm的波长范围内),并在更长的波长范围内发射荧光。
当吖啶酯染料处于基态时,其电子在各个共轭双键之间是共享的。
当吸收紫外光时,电子从基态跃迁到激发态,导致染料分子的电子重新分布。
在ICT过程中,电子从双键上的共享状态转移到染料分子的发色团上,通常是一个含氧的原子(如氨基苯甲酸酯中的酯基)。
这导致了一个局部电荷不平衡,在染料分子内形成了正负之间的电荷转移。
在发色团接收到电子后,它的激发态能级较低。
当电子从激发态返回基态时,能量差异被释放出来,以光的形式发射出来。
这个过程被称为发光,可以在可见光(400 nm至700 nm)或近红外光范围内观察到,取决于荧光染料的确切结构。
吖啶酯染料的发光颜色取决于荧光染料的化学结构和环境。
通过改变染料分子的各种官能团,可以调整发光峰位置和发光强度。
此外,在溶液中,荧光染料的发光特性也可能受到溶剂极性、pH值、温度等因素的影响。
由于吖啶酯染料的高荧光量子产率和较长的发光寿命,它被广泛应用于生物医学研究、荧光标记、细胞成像等领域。
通过与特定的生物分子结合,可以实现对特定细胞、组织或分子的可视化。
此外,吖啶酯染料还常用于无机材料、有机光电器件等领域,以提供可见光的显示或照明。
总结起来,吖啶酯染料的发光原理基于分子内电子转移的概念,通过吸收紫外光后,电子从分子的基态跃迁到激发态,并通过局部电荷转移过程发射荧光。
这种发光行为可以通过调整染料的化学结构和环境条件来实现,具有广泛的应用前景。
吖啶酯标记工作总结引言本文档旨在总结吖啶酯标记工作,并回顾整个过程中的经验和教训。
背景吖啶酯(amine-reactive dyes)是一种常用于生物实验中的荧光染料。
它可以与具有氨基功能团的生物大分子(如蛋白质、肽等)发生共价结合,从而实现对这些生物大分子的标记。
吖啶酯标记技术被广泛应用于免疫荧光染色、蛋白质定量分析、荧光原位杂交等实验中。
标记实验设计本次吖啶酯标记工作主要针对蛋白质标记实验,实验设计如下:1.选择待标记的蛋白质样品;2.准备标记反应体系,包括吖啶酯染料、缓冲溶液等;3.将蛋白质样品与吖啶酯染料以适当的比例混合;4.在适当的温度和时间下进行反应;5.终止反应,除去未反应的染料;6.记录标记后的蛋白质样品的荧光信号。
实验结果与分析经过实验,我们成功地将吖啶酯染料与蛋白质进行了共价结合,并获得了荧光强度良好的标记后产物。
下面是我们对实验结果的分析。
蛋白质标记效率分析为了评估吖啶酯标记的效果,我们对标记后的蛋白质样品进行了荧光信号强度的测定。
结果显示,标记后的蛋白质样品的荧光信号强度与标记前相比明显增加,说明标记效果良好。
同时,我们还进行了标记反应的时间效应研究。
结果显示,在标记反应进行到一定时间后,荧光信号强度趋于稳定,不再明显增加。
这提示我们,在进行吖啶酯标记时,需注意反应时间的控制,避免过长的反应时间导致荧光信号的饱和。
标记后样品的稳定性分析为了评估标记后样品的稳定性,我们将标记后的蛋白质样品在不同条件下进行了保存,并检测其荧光信号强度的变化。
结果显示,在冷藏条件下保存的标记样品荧光信号强度变化较小,表明标记后样品在低温下具有较好的稳定性。
然而,当样品长时间暴露在室温下时,荧光信号强度却明显降低,说明标记后的蛋白质样品对热和光的敏感性较高。
综上所述,我们建议在进行吖啶酯标记后的样品保存时,应尽量避免暴露在室温下,并在冷藏条件下保存以保持样品的稳定性。
优化方案通过对吖啶酯标记实验的总结和分析,我们提出了一些优化方案,以进一步提高标记效果和样品稳定性。
不同吖啶酯系列的用途优势及注意事项
吖啶酯系列一般有几种不同的基团,每种基团对应的用途虽没有很大的区别,但是也会根据客户不同的需求选择更适合的。
下面我们来看看不同吖啶酯的不同用途:
1. 吖啶酯(DMAE-NHS):化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究
2. 吖啶酯(Me-DMAE-NHS):可用于蛋白、抗原、抗体、核酸(DNA RNA)等的标记
3. 吖啶酯(NSP-DMAE-NHS):化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测
4. 吖啶酸丙磺酸盐(NSP-SA):可用于蛋白、抗原、抗体、核酸(DNA RNA)等的标记
5. 吖啶盐(NSP-SA-NHS):很受欢迎的化学发光标记物,稳定性,活性和敏感性都超过了那些放射性同位素
6. 吖啶酰肼(NSP-SA-ADH):吖啶酰肼末端适用与含有醛基的多糖,核酸或者蛋白质等反应,对其进行吖啶标记。
吖啶酯类发光标记物的优势:
空间位阻大,发光效率高、发光强度大
发光反应干扰因素少,标记物稳定(在2 - 8 ℃下可保存数月之久) 热稳定性和信噪比高
标记条件温和
标记率高
标记后不影响分离
使用时注意事项:
1. 称量前先将库存的吖啶酯取出,提前时间根据库存瓶内吖啶酯状态调整,因为是冰冻保存,立即开盖称量会由于温差造成水蒸气凝结,使粉末粘粘,不便于称量。
2. 吖啶酯属化学发光试剂,对光线明显,所以除了保存时需要冷冻避光保存外,发货时也要做到尽量冰冻避光,尤其是天气炎热或长
途运输到境外需要多加留意并作相应调整。
3. 在使用时,可以直接用溶解吖啶酯的容器直接去皮称量,再加入无水DMF溶解,避免称量损耗或者转移过程损耗(过往有个别客户以为收到吖啶酯不足量的情况发生)。
发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系吖啶酯啊,就像是化学世界里的一颗超级闪耀的小星星,在发光物的舞台上尽情地表演着它那独特的化学发光魔法。
你看它,就像一个自带聚光灯的小演员,只要一登场,那光芒就根本挡不住。
它的化学发光反应体系,就像是一个精心编排的魔术秀。
当反应开始的时候,吖啶酯就像是被点燃了热情的小火苗,噌的一下就亮了起来,那光亮简直比一百个手电筒同时打开还要耀眼,仿佛要把整个黑暗的化学世界都给照亮,像太阳突然在黑夜里升起一样不可思议。
这个反应体系就像一个神秘的小宇宙,各种物质在里面就像是不同的小星球,它们相互作用、相互影响。
吖啶酯就像是这个小宇宙里最活跃的彗星,拖着长长的发光尾巴在里面横冲直撞,把周围的一切都染上它那神奇的光亮。
在实验室里,研究吖啶酯标记的化学发光反应体系的科学家们就像是一群好奇的探险家。
他们看着吖啶酯发光,眼睛里都闪着像小孩子看到糖果一样的兴奋光芒。
每次这个反应体系成功地发光,就像是探险家发现了一座满是宝藏的小岛,那种惊喜和激动是无法言表的。
而且啊,这个吖啶酯就像是一个很调皮的小精灵,它的发光有时候会让人捉摸不透。
有时候它会像一个准时的小闹钟一样,按照既定的规则稳稳地发光;但有时候又像一个任性的小娃娃,突然就来一个超亮或者超弱的表演,让科学家们在一旁又好气又好笑,就像家长看着调皮的孩子,既无奈又觉得可爱极了。
这个化学发光反应体系还像一个神秘的魔法盒子,打开它就能看到吖啶酯带来的绚丽景象。
它的光芒像是用彩虹编织而成的彩带,在盒子里飞舞缠绕,每一道光都像是在讲述一个奇妙的故事。
它的存在也像是化学界的一个小秘密武器,在检测、分析等各个领域发挥着巨大的作用。
就像一个隐藏在暗处的超级英雄,在关键时刻突然出现,用它的光亮照亮解决问题的道路。
我感觉吖啶酯就像是被上帝洒下的魔法粉末,赋予了这个反应体系独特的发光能力。
它的光芒不仅仅是一种物理现象,更像是一种充满生命力的艺术表演,在化学的大舞台上永不落幕。
吖啶酯和鲁米诺之间的区别目前国内的化学发光免疫分析技术已突飞猛进,逐步与国际发达国家水平接轨,其中化学发光试剂主要围绕吖啶酯类发光试剂和鲁米诺类试剂展开,那么谁将成为化学发光试剂的核心C位呢?吖啶酯化学发光试剂鲁米诺与吖啶酯的区别:1. 吖啶酯类和鲁米诺都是化学发光免疫检测分析CLIA中应用非常广泛的发光试剂,两者有很大的区别,吖啶酯与鲁米诺相比,最直观的是灵敏度要高很多。
2. 吖啶酯的价格远高于鲁米诺,吖啶酯类发光试剂的价格通常以毫克或克计价,平均每毫克几百元;而鲁米诺则是以克或千克计价,克价在几十到上百不等,所以说价差还是比较大的。
3. 鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物是最早使用的一类化学发光物质,需要使用催化剂过氧化物酶POD及增强剂,这将导致背景发光增强,使测量本底升高,从而限制了这一技术的灵敏度和它的应用及发展。
4. 吖啶酯的发光效率高,且发光体系简单,不需要加入催化剂,本底低,标记简单。
由于传统吖啶酯AE-NHS的热稳定性不是很好,此后又相继研究合成了较AE-NHS更稳定的吖啶酯衍生物并应用于CLIA。
例如DMAE-NHS被证明具有良好的热稳定性和发光性能。
吖啶类发光试剂反应灵敏度非常高,激发液的加入导致反应体系立即释放约430nm的光子,通过使用标准光度计(luminometer)计数光子数量就可检测蛋白质的浓度。
因为此发光过程是十分短暂(整个过程在2秒钟内完成),样品必须直接放在光度计内部光子探测器前面。
蛋白质、多肽、抗体、核酸都可以用吖啶酯标记。
标记化合物在碱性过氧化氢的激发下快速发光,通过收集光子可以检测到标记化合物。
吖啶酯在CLIA中各方面性能显然是优于鲁米诺的,不过它的价格和需要的设备成本更高一些,在一些检测要求相对低一点的情况是不需要用吖啶酯的。
吖啶酯和鲁米诺这两类试剂德晟都有研发提供,可以满足不同的检测需求。
化学发光试剂吖啶酯
概述:
吖啶酯是一类可用作化学发光标记物的化学物质,在碱性H2O2溶液中,吖啶酯的分子受到过氧化氢离子进攻时,吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9和H2O2(过氧化氢)形成不稳定的二氧乙烷(此二氧乙烷可迅速分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮,当回到基态时发出光子),则这类取代吖啶化合物可做为化学发光标记物。
一、发光机理:
根据取代基的不同,常用作化学发光标记物的吖啶取代物分为两类:吖啶酯和吖啶磺酰胺。
它们的结构中都有共同的吖啶环。
它们的发光机理相同:在碱性H2O2溶液中,分子受到过氧化氢离子进攻时,生成不稳定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮,当其回到基态时发出最大发射波长为430nm的光子。
二、用途:
化学发光试剂,吖啶酯类、1,2-二氧杂环丁烷类及过氧草酸酯类等化学发光体系,化学发光法与高效液相色谱、传感器技术以及流动注射技术等其他技术的联用,因具有分析速度快、设备简单、灵敏度高及线性范围宽等优点,已经广泛应用于化学食品安全、生物医学、环境检测等领域。
三、特点:
1、发光反应中在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从
吖啶环上脱离开来,即未发光部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。
2、吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光。
因此应用于化学发光检测具有许多优越性。
四、优点:
1、背景发光低,信噪比高;
2、发光反应干扰因素少;
3、光释放快速集中、发光效率高、发光强度大;
4、易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少;
5、标记物稳定(在2-8℃下可保存数月之久)。
6、这类化合物的发光为闪光型,加入发光启动试剂后0.4s左右发射光强度达到最大,半衰期为0.9s左右。
因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一类非常有效、非常好的化学发光标记物。
五、应用
吖啶类化学发光体系因无需催化剂、反应条件温和、重现性好等优点,被广泛应用于无机有机化合物、生物及药物分析等领域。
在各个领域应用方面吖啶酯发光免疫分析技术有着极大的帮助,根据双抗体夹心法实验原理,利用吖啶酯化学发光免疫分析技术一结合生物素一亲和素磁颗粒分离技术,建立一种定量测定血清中癌胚抗原含量的检测方法。
由于应用了吖啶酯发光免疫技术,使得医学上测定血清中癌胚抗原含量更加快速简便,使得癌胚抗原患者能够得到及时的治疗,提供了极大的便利,在医学上又迈进了一大步。
接受吖啶酯化学发
光免疫技术检测的患者准确率高及快速方便,接受一般免疫学检测的病人准确率相较实验组明显低,且时间长,不方便。
一般来说,吖啶酯化学发光免疫分析技术可以普遍推广和继续研究。
在医学的领域,应用吖啶酯化学发光免疫分析技术已逐渐变化成一种趋势,为医学研究提高速度,精确度。