组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)ELISA试剂盒说明书

细胞P300/CBP组蛋白乙酰转移酶（P300/CBP-HAT）活性光度法（340nm）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞P300/CBP组蛋白乙酰转移酶（P300/CBP-HA T）活性光度法（340nm）定量检测试剂是一种旨在通过通用底物H3多肽，在敏感性抑制剂存在与否的情况下，通过P300/CBP的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到多肽分子上的过程中，释放出巯基辅酶A，进而使用α-酮戊二酸脱氢酶反应系统中伴随的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的还原反应，即采用光度法测定其还原后峰值的变化，来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中P300/CBP HA T的特异活性检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景核小体（nucleosome）是染色质的最小结构单位，由组蛋白H2A-H2B双体和H3-H4双体构成的组蛋白八体结构（octamer），外层涵盖146碱基DNA。

其结构中组蛋白N末端为游离状态，且高度进化保留，在特定氨基酸部位发生诸如甲基化、乙酰化、磷酸化修饰，以改变其电荷和功能。

组蛋白上特定赖氨酸残基的ε氨基基团的乙酰化通过组蛋白乙酰转移酶（Histone Acetyltransferase；HA T；EC2.3.1.48）催化产生，具有表观遗传学的调节作用，达到染色体重构（remodeling），染色质松弛打开，促使基因转录。

其功能异常将导致肿瘤、神经退行性疾病、AIDS和炎症。

组蛋白乙酰转移酶，又称为赖氨酸乙酰转移酶（lysine acetyltransferase）；KAT），分成二型，细胞核内的A型，包括P300/CBP、Gcn5、TAFII250等，和细胞浆内的B型，例如Hat1。

其又分成六类：P300/CBP（P300/cAMP Responsive Element-Binding Protein），包括P300、CBP等；GNAT（Gcn5-related N-acetyltransferase），包括Gcn5、PCAF、Hat1、Elp3、Hpa2、Hpa3、A TF-2、Nut1等；MYST（MOZ、ybf2/sas3、sas2、Tip60），还包括Esa1、MOF、MORF、HBO1等；核受体共激活因子（nuclear receptor co-activator），包括SRC-1、SRC-3、ACTR、TIF2；TAFII250（TATA box binding protein associated factor）；TFIIIC（transcriptional factor IIIC）等。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂构效关系研究摘要：组蛋白去乙酰化酶（HDAC）是一类能够去除组蛋白上的乙酰化修饰的酶，对细胞核的染色质结构和功能起到重要调控作用。

因此，HDAC抑制剂被广泛应用于肿瘤治疗、神经退行性疾病等方面。

然而，HDAC抑制剂中毒性、耐药性等问题也亟待解决。

本文通过对HDAC抑制剂的构效关系研究，探讨不同化合物的结构特点、生物学活性、毒副作用等方面，旨在为研究HDAC抑制剂的合理设计提供参考。

关键词：组蛋白去乙酰化酶，HDAC抑制剂，构效关系，肿瘤治疗一、引言组蛋白去乙酰化酶（HDAC）是一类能够去除组蛋白上的乙酰化修饰的酶，对调节细胞核染色质结构和功能起到重要作用。

研究表明，HDAC 在癌症、神经退行性疾病等疾病的发生、发展过程中起到重要作用。

因此，HDAC抑制剂被广泛应用于肿瘤治疗、神经退行性疾病等方面。

二、HDAC抑制剂的分类目前，HDAC抑制剂主要可分为四种类型：短链脂肪酸类、羟肟酸类、苯甲酸类和磺酰脲类。

其中，苯甲酸类和磺酰脲类是第二代HDAC抑制剂，具有更高的选择性和活性。

三、不同类别HDAC抑制剂的构效关系1.短链脂肪酸类短链脂肪酸类HDAC抑制剂是早期研究的一类化合物，代表性的化合物包括丙酰化肉桂酸（SAHA）和丁酸氢氨基甲酰酰胺（BML-210）。

这类化合物的特点是分子量小、结构简单，但选择性较差。

研究表明，其主要通过竞争性结合酶活性中心，与HDAC1、2、3、6等同源酶结合亲和力较高。

2.羟肟酸类羟肟酸类HDAC抑制剂中，替硫磷类化合物（如Trichostatin A）是具有广泛生物活性的产物，但其药效低下和选择性不足导致应用受到限制。

而目前羟肟酸类HDAC抑制剂的代表化合物是沙米多（Romidepsin/Depsipeptide FR901228），其低毒性、高选择性、广泛抗肿瘤活性，成为临床上研发的重要对象。

3.苯甲酸类苯甲酸类HDAC抑制剂中，Belinostat、Pralsetinib等化合物主要含有苯甲酸基、苯乙酸基等芳香族基团，具有良好的水溶性和药代动力学性能。

表观遗传之组蛋白修饰—组蛋白乙酰化解决方案一、组蛋白乙酰化作用越来越多的证据表明：组蛋白乙酰化在转录调控中的作用机制表现为：①组蛋白尾部乙酰基的加入，中和了组蛋白的电荷，弱化了组蛋白与DNA的相互作用，疏松了染色质结构，有利于转录的进行，②组蛋白的乙酰化可以为转录因子的招募提供特异性的锚定位点：③组蛋白乙酰化结合其他组蛋白修饰（甲基化，磷酸化、泛素化）形成组蛋白密码影响基因的转录。

二、组蛋白乙酰化修饰蛋白乙酰化：在乙酰基转移酶的作用下，在蛋白质赖氨酸残基上添加乙酰基的过程。

组蛋白乙酰化：是一种翻译后修饰，多发生在核心组蛋白N一端碱性氨基酸集中区的特定赖氨酸残基，将乙酰辅酶A的乙酰基转移到赖氨酸的sNH3+中和掉1个正电荷。

由组蛋白乙酰转移酶（HATs）和组蛋白去乙酰基转移酶(histone deacetylase，HDACs)共同决定。

重要性：通过研究组蛋白乙酰化和组蛋白脱乙酰化，研究人员可以对“组蛋白密码”有更多的了解，可以研发HDAC的药物，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂（HDACi）通常用作情绪稳定剂和抗癫痫药，最近已被用作可能的癌症，神经退行性疾病和炎性疾病的治疗方法。

三、组蛋白乙酰化相关研究工具1.组蛋白提取试剂盒在我们进行某项实验之前首先需要做很多的准备工作，比如组蛋白修饰实验，需要准备的是组蛋白。

那么我们怎么来准备适合我们实验需要的组蛋白呢？取决于你用的提取试剂盒。

比如OP-0006 EpiQuik Total Histone Extraction Kit(100)：适合从哺乳动物的细胞或者组织中提取总核心组蛋白(H2A, H2B, H3, and H4)，组蛋白提取物中的翻译后修饰（PTM）保持完整，因此可与Epigentek的组蛋白修饰测定试剂盒一起使用，或用于组蛋白甲基化，乙酰化，磷酸化，SUMO化，泛素化，瓜氨酸化和ADP-核糖基化研究。

2.组蛋白乙酰化定量试剂盒组蛋白乙酰化，包括组蛋白H3和组蛋白H4，参与染色质结构的调节和转录因子向基因启动子的募集。

组蛋白去乙酰化酶在基因表达调控中的作用研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）是一种重要的酶类，其主要作用是去除组蛋白上的乙酰基，从而调控基因的表达。

随着研究的深入，人们对于HDAC的功能和调控机制也有了越来越深入的了解。

本文将就组蛋白去乙酰化酶在基因表达调控中的作用研究进行探讨。

一、HDAC的功能组蛋白是一类质粒基因组DNA包裹的蛋白质，其主要作用是为DNA提供稳定的结构，防止其在离开核质时受到损伤。

而HDAC则是一种负责去除组蛋白上的乙酰基的酶类，其作用主要有以下几个方面：1. 调节基因表达。

去除组蛋白上的乙酰基可以使其更加紧密地包裹DNA，从而阻碍转录因子的结合，从而抑制基因的转录。

而HDAC的主要功能就是去除组蛋白上的乙酰基，进而调节基因表达。

2. 参与细胞分化。

细胞分化是一种复杂的过程，其包括许多的转录调控和表观修饰。

HDAC通过去除组蛋白上的乙酰基，控制了基因表达和染色质结构，参与了细胞分化和发育过程。

3. 参与细胞周期控制。

细胞周期是指在生命活动中，细胞从分裂到再生产生的一系列连续变化。

HDAC可以在细胞周期中起到重要的作用，参与了细胞的增殖和凋亡。

二、HDAC的调控机制HDAC的活性受到多种因素的调控，其中包括以下几种：1. 神经递质和激素。

某些神经递质和激素可以通过直接作用于HDAC，从而影响其活性和有选择地调节某些基因的表达。

2. 过氧化物酶体增强子（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor，PPAR）。

PPAR是一种转录因子，可以与HDAC结合形成一个复合物，从而共同作用于某些基因的表达和调控。

3. 微小RNA（miRNA）。

miRNA是一类短链非编码RNA，可以与mRNA结合并靶向性地调控基因表达。

HDAC可以通过干扰miRNA的表达或活性，进而参与基因表达的调控。

三、HDAC在肿瘤发生和发展中的作用HDAC与许多疾病的发生和发展密切相关，其中包括了肿瘤。

组蛋白去乙酰化酶是一类调控基因表达的重要酶，主要功能是去除组蛋白上的乙酰基团，参与染色质结构的调整和基因的转录调控。

这类酶主要分为两大家族：组蛋白去乙酰化酶和乙酰化组蛋白转移酶。

1. 组蛋白去乙酰化酶（Histone Deacetylases, HDACs）：分类：类I HDACs（HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC8）：主要存在于细胞核，广泛参与调控组蛋白的去乙酰化。

类II HDACs（HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC9, HDAC10）：分为IIa和IIb两个亚家族，广泛分布在细胞质和细胞核，参与细胞周期调控等生物学过程。

类III HDACs（Sirtuins，SIRT1-SIRT7）：也称为Sirtuins 家族，具有NAD^+-依赖性去乙酰化活性，参与细胞代谢和长寿命等生理过程。

2. 乙酰化组蛋白转移酶（Histone Acetyltransferases, HATs）：分类：GNAT家族（Gcn5-related N-acetyltransferases）：包括Gcn5、P300/CBP等，参与组蛋白去乙酰化过程，广泛调控基因的转录活性。

MYST家族（MOZ, Ybf2/Sas3, Sas2, Tip60）：主要包括Tip60、MOZ等，参与染色质重塑和基因的转录调控。

CBP/p300家族：包括CBP（CREB-binding protein）和p300，具有乙酰化组蛋白的活性，调控细胞周期和转录过程。

这两类酶的相互作用调控组蛋白的乙酰化水平，从而影响染色质结构的松紧和基因的表达水平。

组蛋白去乙酰化酶和乙酰化组蛋白转移酶的平衡对于维持正常的细胞功能和生命活动至关重要。

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的研究进展夏靖,冯冰虹(广东药学院药科学院广东广州510006)摘要:在肿瘤的表观遗传学研究中,组蛋白的乙酰化修饰对肿瘤的发生发展起重要作用。

正常细胞体一旦出现核内组蛋白乙酰化与去乙酰化的失衡,即会导致正常的细胞周期与细胞代谢行为的改变而诱发肿瘤。

组蛋白去乙酰化酶(hist one deacety l ases ,HDA Cs)催化组蛋白的去乙酰化,维系组蛋白乙酰化与去乙酰化的平衡状态,与癌相关基因转录表达、细胞增殖分化及细胞凋亡等诸多过程密切相关。

本文从组蛋白去乙酰化酶HDACs 的结构分类及其与肿瘤发生发展关系两方面对HDACs 做一综述。

关键词:组蛋白去乙酰化酶(HDA Cs);肿瘤;表观遗传学中图分类号:R 73;Q 786 文献标识码:A do :i 10.3969/.j issn .1006-8783.2010.05.028文章编号:1006-8783(2010)05-0546-06The research progress of h istone deacetylases (HDACs )as an i m portant target for an tineoplastic agentsX I A J i ng ,FENG B i ng -hong(School o f Phar m acy ,G uangd ong Phar m aceutical Colle g e ,Guangzhou ,Guangdong 510006,China)Abstract :The m odificati on for histone acetylation is of gr eat m i portance for for m ulati on a nd develop m ent of tu m ors i n the ep i geneti c study of t um ors .The d i sequ ili bri u m of h ist one acet ylati on a nd deacetyl ati on m ay ca u se so m e changes of cell cycle and cell m eta boli s m.H i stone deacetylases (HDACs )catal yze the deacetylation of h ist ones ,a nd m ai ntain the equ ili bri u m bet w ee n h isto ne acet ylati on and deacetylation as w el.l They are r elated to m a ny r egu latio n processes contai n ing tr anscripti on of oncogene ,cell cycle ,a poptosis and so on .The str uct u r e class ifi cati on ofH D AC s and the relati onsh i p bet w ee n the HDACs and the for m ati on and adva nce m ent of tu m or w ere re v i e w ed i n t h is paper .K ey words :h ist one feacetylases (H DAC s);tu m or ;e p igenetics收稿日期:2010-06-10基金项目:广东省科技厅立项项目(2010B031600137)作者简介:夏靖,男,硕士研究生;通讯作者:冯冰虹,男,教授,Em a i:l fengbh @scnu .edu .cn 。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

HDAC3和 HDAC5在乳腺癌中的表达与临床病理特征意义林俊杰;杨昭婷;玄延花;倪卫东;王丽强【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2016(020)006【总页数】3页(P1001-1003)【作者】林俊杰;杨昭婷;玄延花;倪卫东;王丽强【作者单位】延边大学 2013 级口腔医学专业，吉林延吉 133002;延边大学医学院病理学教研室;延边大学医学院病理学教研室;延边大学医学院病理学教研室;吉林大学中日联谊医院【正文语种】中文近几年来,我国乳腺癌患者以每年21万例的增长速度成为女性最常见恶性肿瘤中的第一位[1]。

有效的治疗乳腺癌,对于保障女性的生命与健康意义重大。

准确的估计乳腺癌患者的预后情况，对于指导乳腺癌患者的个体化靶向治疗具有很大帮助。

所以，研究乳腺癌患者预后的相关影响因素迫在眉睫。

研究发现组蛋白去乙酰化酶(HDACs)在乳腺癌的发生、演进过程中具有重要作用。

其中HDAC3属于Ⅰ类HDACs，HDAC5属于Ⅱ类HDACs，HDAC3和HDAC5均可通过催化生理过程中的关键蛋白,从而影响肿瘤的发生与发展。

研究表明HDAC3在浸润性乳腺癌组织中高表达[2]，为进一步研究HDAC3和HDAC5在乳腺癌组织中的表达情况与患者预后的关系，本研究共选取29例乳腺组织和124例乳腺癌组织，通过免疫组化EnVision法测定HDAC3和HDAC5在乳腺癌组织中表达的情况，并从表观遗传学角度探讨其与临床病理特征及预后的关系。

1.1 材料本研究选取延边大学医院病理科1998-2008年的正常乳腺组织29例和乳腺癌组织存档蜡块标本124例。

124例乳腺癌组织中患者年龄≤50岁84例，年龄>50岁40例；根据AJCC 2009年肿瘤的分期标准，124例乳腺癌组织中TNM分期：Ⅰ期31例；Ⅱ期54例；Ⅲ期39例；124例乳腺癌组织中,淋巴结转移阳性的有64例,淋巴结转移阴性的有60例。

依据在第十三届St.Gallen国际专家共识推荐的乳腺癌分子分型标准,本组124例乳腺癌病变组织分4型,Luminal A 型22例,Luminal B型72例,HER-2过表达型21例,三阴性型9例。