菌液的制备及保存讲课教案

备的菌存保及制液．精品文档 1目的菌种保藏使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。

规范菌种原始菌液的制备及长期保存。

内容 2定义 2.1由冻干菌或冷冻菌直接传代的孢子或生长菌的原始悬浮液。

原始菌液--由原始菌液直接稀释，或根据一般试验需要而等量稀释的特定浓度的-- 工作菌液孢子或细菌的悬浮液。

总则2.2微生物室收到实验菌种后应进行活化及纯化，并进行传代（芽孢杆菌除外）。

每一新菌种在适宜的琼脂平板上划线分离，检查是否纯种，观察菌落形态并用革兰氏染色或芽孢染色法进行镜检，如果是芽孢悬浮液，用常规方法测定其存活孢子数。

经检查如果满意，贴上合适的标签，并将贮备菌存放在实验室专用的冰箱里～8℃）或冷冻室内，以避免与实验室正在使用的其它菌种相混淆，作好菌种传代的记（2录以便能追踪传代史。

生孢梭菌的孢子悬浮菌应每年制备一次。

原始菌种的传代次数最多传至第五代。

培养基 2.3冻干菌制备原始菌液 2.4由甘油冷冻菌制备原始菌液 2.4.1液体培养基后所得的菌作为第一代。

把冻干菌加入100ml 2.4.1.1从冷冻箱内取出冷冻菌，使其在室温下慢慢融化；2.4.1.2该菌所适用的液体培养基中；100ml 2.4.1.3 把冷冻菌无菌转移至或更长一些24h 2.4.1.4 根据菌种的类型，将接种后的培养基在适当温度下培养时间；液体培养基后所得的菌作为第二代。

把甘油冷冻菌加入100ml 2.4.1.5由集菌平板制备原始菌液2.4.2（或更长时间）培养的菌液摇匀，各取24h2.4.2.1 在超净工作台内，把经过只培养基平板上，轻轻转动平板，使菌液均匀分布于平板表面。

不同培51ml，无菌转移至养基适用于不同菌种。

另用一只平板，划线分离菌液，培养之，以检查菌液是否纯种。

2.4.2.2在适当的温度下培养以上平板，不同菌种所需培养周期不一。

2.4.2.3收集于网络，如有侵权请联系管理员删除．精品文档以内即可显见增长；生长菌-24h 2.4.2.3.1孢子，这样可确保提到浓50%7天或更长时间才能得到孢子-需要3～ 2.4.2.3.2的悬浮液。

保存液培育细菌的方法1.引言1.1 概述概述在微生物学研究中，保存液培育细菌是一种常见的方法，它能够有效地保存并培养细菌。

通过保存液培育细菌，研究人员可以长期保存重要的细菌菌株，并且可以在需要的时候重新培养它们。

在本篇文章中，我们将探讨保存液培育细菌的方法。

首先，我们将介绍保存液的选择，包括常用的保存液种类以及选择保存液的考虑因素。

其次，我们将详细讨论培养基的准备工作，包括培养基成分的选择和准备方法。

最后，我们将对保存液培育细菌的方法进行总结，并展望未来的研究方向。

通过本文的阅读，读者将能够了解保存液培育细菌的基本原理和方法，并能够正确选择保存液和准备培养基，从而实现有效地保存和培养细菌的目的。

细菌的长期保存对于微生物学研究具有重要意义，它可以为科学家们提供一个可靠的资源，并为未来的研究工作奠定基础。

我们相信，通过本文的阅读，读者将能够掌握保存液培育细菌的关键技术和方法，为微生物学研究的发展做出贡献。

让我们一起深入探索保存液培育细菌的世界，为科学事业的发展添砖加瓦。

文章结构部分的内容可以描述整篇文章的结构安排和各个章节的主要内容。

下面是一种可能的内容写法：1.2 文章结构本文将按照以下结构来介绍保存液培育细菌的方法：引言部分将概述本文的主要内容和目的，同时为读者提供对保存液培育细菌的背景和意义的了解。

正文部分将对保存液的选择和培养基的准备进行详细讨论。

在"2.1 保存液的选择"一节中，将介绍如何选择合适的保存液，包括保存液的种类、性质和适用范围等方面的信息。

在"2.2 培养基的准备"一节中，将探讨如何准备适用于保存液培养细菌的培养基，包括培养基的成分、制备方法和保存方式等方面的内容。

结论部分将对保存液培育细菌的方法进行总结，并对未来的研究方向提出展望。

在"3.1 总结保存液培育细菌的方法"一节中，将总结本文介绍的保存液培育细菌的方法，并强调其重要性和应用前景。

1目的菌种保藏使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。

规范菌种原始菌液的制备及长期保存。

2内容2.1定义原始菌液--由冻干菌或冷冻菌直接传代的孢子或生长菌的原始悬浮液。

工作菌液--由原始菌液直接稀释，或根据一般试验需要而等量稀释的特定浓度的孢子或细菌的悬浮液。

22总则微生物室收到实验菌种后应进行活化及纯化，并进行传代（芽孢杆菌除外）。

每一新菌种在适宜的琼脂平板上划线分离，检查是否纯种，观察菌落形态并用革兰氏染色或芽孢染色法进行镜检，如果是芽孢悬浮液，用常规方法测定其存活孢子数。

经检查如果满意，贴上合适的标签，并将贮备菌存放在实验室专用的冰箱里（2〜8C）或冷冻室内，以避免与实验室正在使用的其它菌种相混淆，作好菌种传代的记录以便能追踪传代史。

生孢梭菌的孢子悬浮菌应每年制备一次。

原始菌种的传代次数最多传至第五代。

O Q 代产览2.3 培养基2.4冻干菌制备原始菌液2.4.1由甘油冷冻菌制备原始菌液241.1 把冻干菌加入100ml液体培养基后所得的菌作为第一代。

2.4.1.2 从冷冻箱内取出冷冻菌，使其在室温下慢慢融化；2.4.1.3 把冷冻菌无菌转移至100ml该菌所适用的液体培养基中；2.4.1.4 根据菌种的类型，将接种后的培养基在适当温度下培养24h或更长一些时间；2.4.1.5 把甘油冷冻菌加入100ml液体培养基后所得的菌作为第二代。

2.4.2由集菌平板制备原始菌液2.4.2.1 在超净工作台内，把经过24h （或更长时间）培养的菌液摇匀，各取1ml,无菌转移至5只培养基平板上，轻轻转动平板，使菌液均匀分布于平板表面。

不同培养基适24231 生长菌-24h以内即可显见增长;用于不同菌种。

2.4.2.2 另用一只平板，划线分离菌液，培养之，以检查菌液是否纯种。

242.3 在适当的温度下培养以上平板，不同菌种所需培养周期不一。

24232 孢子-需要3〜7天或更长时间才能得到50%孢子，这样可确保提到浓的悬浮液。

常用菌悬液的制备、保存及使用方法摘要：常用菌悬液的制备、保存及使用方法一、常用试验用菌种的生物学特征(1)枯草芽抱杆菌［CMCC(B) 63 501］形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆...常用菌悬液的制备、保存及使用方法一、常用试验用菌种的生物学特征(1 )枯草芽抱杆菌［CMCC(B) 63 501］形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆形，染色均匀，芽抱椭圆形或圆柱形，位于菌体中央，革兰氏染色阳性，能运动。

培养特性：营养琼脂平板：菌落表面粗糙，圆形，灰黄色，边缘锯齿状，分离时应挑选粗糙形菌落。

普通肉汤培养基：呈少量浑浊并产生沉淀，在液体表面形成皱状厚膜粘附于试管壁上。

最适宜培养温度30~37 C,生长温度范围：15〜35 C,兼性厌氧或需氧。

抵抗力：菌体湿热55 C 1小时被杀死，芽抱100 C 3小时或120 C 40分钟被杀死。

(2 )铜绿假单胞菌［CMCC(B) 10 104］形态与染色：革兰氏阴性杆菌。

菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。

培养特性：本菌为专性需氧菌，生长温度范围25~42 C,最适生长温度为25~30 C,特别是该菌在4C不生长而在42 C可以生长的特点可用以鉴别。

在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素( pyocynin )与带荧光的水溶性荧光素( pyoverdin )等。

在血平板上会有透明溶血环。

(3) 白色念珠菌［CMCC(F) 98 001］形态与染色：本菌细胞呈圆形或卵圆形，很象酵母菌，直径 3 ~ 6(_im ,比葡萄球菌大5 ~ 6倍，革兰阳性，但着色不均匀。

培养特性：本菌在血琼脂或沙保氏琼脂上，37 C或室温孵育2〜3日后，生成灰白乳酪样菌落，涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。

(4) 金黄葡萄球菌［CMCC(B) 26 003］形态与染色：圆球形排列成典型的葡萄串状，营养琼脂平板培养多呈短链状或双球状，无鞭毛，不能动，不产生芽抱，革兰氏染色阳性。

液体菌种培训教材(节选四)2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。

所以要自己会做试管种。

试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。

在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。

分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。

塞上棉塞就行了。

这样的成功率一般在80%以上。

在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。

对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。

只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。

菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。

平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。

别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。

（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。

从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。

整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。

液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。

用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。

待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。

马上就可以进行搅拌或摇瓶了。

固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。

固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。

固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。

配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。

一般20多天可以长好。

具有运输和贮存方便等特点。

液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。

液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。

它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。

工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。

液体菌种的制作及使用方法液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。

液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。

近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。

与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。

目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。

一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。

若少量生产，可以用摇瓶培养法。

深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。

而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。

本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。

1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。

天然培养基的组成均为天然有机物。

合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。

在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。

但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。

液体菌种培训教材（六）液体菌种栽培平菇新技术液体菌种培训教材（节选六）2010年4月10日第二章栽培管理技术一、平菇栽培技术液体菌种栽培平菇新技术用固体菌种栽培平菇是一个非常成熟的技术，但在液体菌种栽培平菇上，有不少的人还在应用固体的技术，使液体菌种的先进性得不到发挥。

现将我培训基地液体菌种栽培平菇技术公开如下，不当之处还请各位同行批评指正。

一、液体菌种的制备（一）试管的制备从当地市场上选择外形、片数等形态特征都符合要求的鲜菇，购回。

在接种箱内进行组织分离。

选择生长旺盛、无污染的试管进行转管和提纯。

经过出菇试验后保存。

（二）三角瓶液体专用母种的制备选用PDA加富培养基，去掉琼脂，常规制作灭菌。

在无菌环境下接种后马上放到摇瓶机或搅拌器上，进行三角瓶液体专用母种的制作。

一般4天左右就可以完成三角瓶液体专用母种的生产。

（三）发酵罐液体菌种的制作1.发酵罐的注水与加料由于本公司的发酵罐不需要特殊清洗，只是用水冲一下就行，所以生产者要做的就是将水加到罐的视镜的三分之一处，启动电源，接通灭菌开关，当温度到达85度时，将培养料脱水后加入到罐内。

2.灭菌当培养料加完后，关闭加料口，灭菌。

当温度到125度时保持40分钟至1小时后，关闭灭菌开关。

3.冷却及接种加冷却水冷却罐体。

当温度降到30度以下时，将并瓶后的三角瓶专用母种在火焰圈的保护下进行接种。

4.培养接种后，由于在出厂时，罐的一切培养参数已经设定，所以不需要进行重新设定。

所做的只是注意观察培养期间液体的气味及颜色并及时采样。

一般3天就可以培养完成。

.二、栽培袋的制作常规制作平菇栽培料，用FS-2装袋机进行装袋。

注意，在装袋时，先将栽培袋的一头用绳系住。

装袋时，先定长。

这样装出来的袋是一样长的。

装袋时，当装满料的袋从装袋机内自动脱出时，人工将袋口窝在料孔内，并用塑料棒封口。

如果是发酵料，那灭菌4-5小时就可以了。

如果是纯熟料，那需要8小时灭菌。

灭菌完成后，放到冷却室冷却，当温度降到30度以下时就可以接种了。