氯霉素溶液-实验试剂

氯霉素检验方法1. 试剂与材料1.1氯霉素试剂盒，德国r-Biopharm公司。

1.2乙酸乙酯，分析纯。

1.3双蒸水。

2.仪器与设备2.1微孔板酶标仪，MuLtisKan Ascent,芬兰Labsystens公司。

2.2 8道移液器，50-300uL。

2.3 单道移液器，5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml。

2.4 离心机。

2.5 旋转蒸发器，配真空冷却系统。

2.6 液体混匀器。

3.样品前处理3.1样品提取称取约2g（准确至0.01g）蜂蜜于20ml具塞试管中，加入用4ml双蒸水溶解，再加4ml乙酸乙酯，在混匀器上混匀10分钟。

将上述样液转至10ml离心管中，以4000转/分离心12分钟。

3.2净化从上述离心管中移取1ml上层的乙酸乙酯（相当于0.5样品）至另一试管中，60℃以下减压旋转蒸干，残留物用0.5ml缓冲液1溶液，此为样品溶液，供酶标仪测定。

4.测定4.1 酶标仪测定条件酶标仪测定波长为450nm。

4.2 酶标测定（以下操作在20-24℃室温条件下进行）。

4.2.1测定之前的准备工作将氯霉素酶试剂盒附带的所有试剂回升至室温20-24℃。

其中氯霉素酶标记物、氯霉素抗体用缓冲液1以1；11的比例稀释，在吸取浓缩液之前，要仔细振摇使之充分混匀。

4.2.2 标准应用的制备；50uL标准浓缩液（氯霉素试剂盒附带）用450uL缓冲液1稀释并混合均匀用玻璃不能用塑料瓶。

标准应用液1：50uL标准浓缩液1用450uL缓冲液1稀释oppt标准应用液2：50uL标准浓缩液2用450uL缓冲液1稀释50ppt标准应用液3：50uL标准浓缩液3用450uL缓冲液1稀释150ppt标准应用液4：50uL标准浓缩液4用450uL缓冲液1稀释450 ppt标准应用液5：50uL标准浓缩液5用450uL缓冲液1稀释1350ppt标准应用液6：50uL标准浓缩液6用450uL缓冲液1稀释4050ppt4.2.3.测定程序：取出实验需要数量的微孔板条，按顺序加入50ul标准或处理好的样品到各自的微孔中，加入50ul稀释了的酶标记物到微孔底部，加入50ul稀释了的抗体溶液到每一个微孔中充分混合（轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均）用薄膜覆盖板上在室温孵育2小时（注意在加入抗体的过程中移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染）。

北京吉美生物技术有限公司
氯霉素溶液(Chloramphenicol,34mg/ml)
产品简介：
氯霉素（Chloramphenicol）是由大David Gottlieb从Streptomyces venezuelae分离出来的抑菌性广谱抗生素。

氯霉素的抑菌原理在于能阻断细菌核糖体50s亚基的肽酰转移酶从而抑制翻译，高浓度下能抑制真核DNA的合成，从而抑制细菌蛋白质生物合成。

临床上，主要用于治疗多种细菌感染，但因易导致造血系统的不良反应，应用大大受到限制。

Jimei Chloramphenicol solution在分子生物学中可以作为氯霉素抗性基因的筛选药物，不用于临床。

一般情况下，工作浓度为25~170μg/ml。

产品组成：
操作步骤（仅供参考）：
1、根据实验具体要求操作。

2、一般工作浓度为100~170μg/ml。

注意事项：
1、注意无菌操作，避免污染。

2、避免反复冻融，以免失效。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

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一、实验目的本实验旨在通过比色法测定氯霉素的含量，了解氯霉素在药物制剂中的含量分布，验证实验方法的有效性，并为进一步的研究提供数据支持。

二、实验原理氯霉素是一种广谱抗生素，主要通过抑制细菌蛋白质合成而发挥抗菌作用。

本实验采用比色法测定氯霉素的含量，基于氯霉素与特定显色剂发生反应，生成具有特定颜色的化合物，通过测定该化合物的吸光度，计算氯霉素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 氯霉素标准品- 药物制剂样品- 乙醇- 硫酸- 磷酸二氢钠- 氯化钠- 显色剂- 实验用水2. 实验仪器：- 分光光度计- 离心机- 电子天平- 烧杯- 容量瓶- 滴定管- 移液器四、实验方法1. 标准曲线的绘制（1）准确称取氯霉素标准品适量，用乙醇溶解并定容至100ml容量瓶中，得到氯霉素标准储备液。

（2）取氯霉素标准储备液，分别用乙醇稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的氯霉素标准溶液。

（3）取6个试管，分别加入不同浓度的氯霉素标准溶液各1ml，再向每个试管中加入显色剂1ml，混匀后置于分光光度计中，在特定波长下测定吸光度。

（4）以氯霉素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定（1）准确称取药物制剂样品适量，用乙醇溶解并定容至100ml容量瓶中，得到样品溶液。

（2）取样品溶液，按照绘制标准曲线的方法，测定吸光度。

（3）根据标准曲线，计算样品中氯霉素的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制通过绘制标准曲线，得到氯霉素的标准曲线方程为：y = 0.0065x + 0.0045，相关系数R² = 0.9987，表明该方程具有良好的线性关系。

2. 样品测定对样品溶液进行测定，得到吸光度为0.876，根据标准曲线计算得到样品中氯霉素的含量为0.9mg/ml。

六、实验结论本实验通过比色法测定了氯霉素在药物制剂中的含量，结果表明，该方法具有较高的准确性和重复性。

氯霉素检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3001一、概要:氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素，对畜禽疾病控制和治疗有重要功效。

但由于氯霉素存在严重的副作用，可抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血，粒细胞缺乏等疾病，欧美等发达国家已相继禁止使用于动物饲料中。

本公司研发的氯霉素(Chloramphenicol)檢測試劑盒是應用抗原，抗体特异性的免疫学原理而建立的一种敏感，特异，简便及快速的檢測产品。

主要應用於檢測蜂蜜、蛋类、牛奶、奶粉、水產品、动物组织(肌肉、肝臟等)、饲料、血清、血浆及尿液樣本中存在的氯霉素。

二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入氯霉素标准品或待测样本，氯霉素酶标抗原和兔抗氯霉素抗体。

经过室温温育，反应液中的兔抗氯霉素抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的抗原与氯霉素酶标抗原竞争微孔板上的兔抗氯霉素抗体。

洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的抗原或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。

反应完成后，样品中氯霉素含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中氯霉素含量越少，则呈色越深。

利用标准曲线可计算出样品中氯霉素含量。

三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。

2.氯霉素参考标准品:0，0.025，0.05，0.10，0.25，0.75ppb (ng/ml);1.5ml/瓶(黄色)，一套共6瓶。

3.氯霉素酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。

4.兔抗氯霉素抗体:7ml/瓶。

5.样品稀释液：100ml/瓶。

6.显色剂/底物：11ml/瓶。

7.反应终止液：11ml/瓶。

8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。

四、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器:1.试剂∙乙酸乙酯∙正己烷或正庚烷2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.蜂蜜a)称取2g 样品加入4ml 蒸馏水溶解均匀。

氯霉素注射液的ph和含量测定简介：氯霉素别名：左霉素，左旋霉素，氯胺苯醇，氯丝霉素试验氯霉素是一种抑菌类抗生素，由大卫·戈特利布（David Gottlieb）于1947年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，再于1949年合成并引入临床。

氯霉素注射液为抗生素类药。

有广谱抑菌作用。

用于伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、脑膜炎球菌、链球菌、肺炎球菌等感染，对多种厌氧菌感染有效，亦可用于立克次体感染。

有引起粒细胞缺乏症及再生障碍性贫血的可能，有时可引起精神症状，长期应用可引起二重感染，新生儿、早产儿用量过大可发生灰色综合症。

分子式：C11H12Cl2N2O5 分子量：323.13《药典》规定氯霉素注射液中氯霉素含量0.125mg/ml，有效范围规定含量90%-110%，ph5.0-7.5.药理：。

氯霉素能控制细菌核糖体的肽酰转移酶从而抑制细菌蛋白质生物合成。

氯霉素可以通过阻止氨基酰tRNA与核糖体50S亚基A位点的结合来抑制核糖体活动及蛋白质合成。

虽然氯霉素与大环内酯都是以影响50S亚基来发挥作用，但氯霉素不属于大环内酯。

用途：氯霉素有着很广泛的活跃性，能有效对抗革兰氏阳性菌，包括大部份的抗药性金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性菌及厌氧性生物。

它却不能对抗绿脓杆菌或肠杆菌属的品种。

而对于类鼻疽伯克氏菌，则只有一点效用，但经已由头孢他啶及美罗培南取代。

在西方，氯霉素的使用主要限制在外用上，这是因它有导致再生不良性贫血的风险。

市场前景：因价钱低廉的关系，现时仍然盛行于一些低收入国家；但在其他西方国家经已甚少使用，这是由于它的副作用的关系：会引致致命的再生不良性贫血。

现时，氯霉素主要是用在医治细菌性结膜炎的眼药水或药膏上。

实验目的：1.ph值的基本原学习直接点位学法测理.2.学会使用酸度计测定氯霉素注射液1.3.学习紫外分光光度法测定氯霉素含量的方法.实验原理：1.PH计是电位法测量溶液PH值的仪器，有PH复合电极插入被测溶液后，复合电极电位随氢离子的浓度变化而变化，这一变化符合能斯特方程。

氯霉素酶联免疫检测试剂盒说明书【反应原理】氯霉素酶联免疫检测试剂盒，主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的，换句话说，就是利用酶标记物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体进行竞争反应。

在整个反应当中，如果样品中的氯霉素残留的越多，相对地就会竞争反应越多的酶标记物，使得能结合上抗体的酶标记物相对地减少，用TMB底物显色，样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出氯霉素含量。

【试剂盒组份】1、酶标板：8孔/条，12条/板2、氯霉素标准溶液(1.5 mL / 瓶)：0 ppb、0.025 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.6 ppb ; 10ppb3、10倍浓缩样品稀释液………………………………30 mL4、10倍浓缩清洗液……………………………………30 mL5、氯霉素酶标记物……………………………………8 mL6、显色液………………………………………………12 mL7、反应终止液…………………………………………12 mL【试剂盒技术指标】试剂盒灵敏度：0.025ppb样本检测下限：生乳…………………………………………………0.1 ppb蜂蜜…………………………………………………0.1 ppb蜂王浆………………………………………………0.1 ppb血清………………………………………………0.025 ppb 鱼虾、蟹、鸡肉、猪肉……………………………………0.025 ppb 饲料…………………………………………………0.25 ppb 蛋…………………………………………………0.025 ppb交叉反应率：氯霉素………………………………………………100%左旋霉素…………………………………………… 1.4% 庆大霉素……………………………………………<0.1% 甲砜霉素…………………………………………… 3.1% 四环素………………………………………………<0.1% 青霉素………………………………………………<0.1% 磺胺甲嘧啶…………………………………………<0.1%回收率：生乳………………………………………70~130%蜂蜜………………………………………70~130%蜂王浆……………………………………70~130%鱼、虾、蟹、乌贼、鸡及猪肉……………70~130%饲料………………………………………70~130%血清………………………………………70~130%蛋………………………………………70~130%批间、批内变异系数：CV≤10%【所需仪器和试剂】所需仪器：酶标仪、离心机、均质机、微量移液器(单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl)所需试剂：乙酸乙酯、正己烷、0.5 N 盐酸溶液、0.5 N 氢氧化钠溶液【注意事项】1、使用前请先将试剂盒回温至室温(置于室温60分钟以上)，各溶液皆摇匀后方可使用。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

千分之一比例加入LB中。

分子克隆实验手册氯霉素为脂溶性,通过弥散进入细菌细胞内,并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚基上,使肽链增长受阻(可能由于抑制了转肽酶的作用),因此抑制肽链的形成,从而阻止蛋白质的合成。

氯霉素溶液的配置和注意事项。

工作液、母液配制：一般常用的工作浓度为25μg/ml。

配制母液时，先用乙醇配成10 mg/ml，再用水稀释至1 mg/ml。

该母液应冻存，并在30天内用完。

注意事项：（氯霉素溶液应避光）（氯霉素溶液见光分解后会变黄，出现橘黄色沉淀）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。