HCMV-pp65

文章编号(A rticle I D):1009-2137(2008)02-0397-04 论著 C MV pp65基因修饰的树突状细胞刺激自身T细胞活化高广勋,陈协群,张劲翼1,朱华锋,董宝侠,顾宏涛,高瑛,潘耀柱第四军医大学西京医院血液科,陕西西安,710032,1多伦多大学西奈山医院Sa m uel Leunenfe l d研究所,加拿大摘要 巨细胞病毒(CM V)感染易发生于慢性移植物抗宿主病(c GV HD)患者,其特异性免疫依赖于T细胞活性。

本研究探讨CM V pp65基因修饰的树突状细胞(D C)对自身T细胞的活化作用。

采用具有高效转染非分裂细胞的慢病毒系统将CM V全长pp65基因导入鼠源性D C;采用CpG D NA诱导D C细胞成熟;采用流式细胞术及免疫荧光方法测定T淋巴细胞抗原及IFN 表达。

结果表明:慢病毒感染D C的感染复数(m ultipli c ity o f i nfecti on, M O I)为50,最佳感染效率可达30%-40%;表达pp65基因的成熟DC能刺激自身na i ve T细胞表达CD69;表达PP65蛋白的成熟D C能够刺激自身CD4+或CD8+T细胞分泌IFN 。

结论:pp65基因修饰、C p G DNA诱导成熟的D C能体外激活C M V特异性T淋巴细胞。

关键词 巨细胞病毒;PP65蛋白;T淋巴细胞;树突状细胞;C p G DNA中图分类号 Q813;R392文献标识码 AC M V pp65G eneM odified Dendritic C ells Activate Autol ogous T C ells GAO G uang X un,CHE N Xie Q un,ZHANG Jin Y i1,ZHU Hua Feng,DONG Bao X ia,GU H ong T ao,GAO Ying,PAN Yao ZhuD epart m en t o fH e m atology,Xiji n g Ho s p it a l,The Fourth M ili tary M ed ical Un iversity,X i an710032,Shanxi Provi nce,Ch i na;1Th e Sa m uel Lun enfel d Res ea rch Insti tute,M oun t S i na iHo s p it a l,U niversity of Toron to,Toron t o,On t a ri o,CanadaAbstract Cy tom eg a l ov irus(CM V)i nfecti on is a dange rous com pli cati o n i n pa ti ents w it h chro nic g ra ft ve rs us ho std isea se(cGVHD).CM V s pec ific i m m un it y depends on the acti v it y of T ce lls.T his st udy w as a i m ed to i nv estiga te thee ffect of CM V pp65g ene m o dif i ed dendritic ce lls(D C s)on ac tiva ti on of aut o l o gous T ce lls.L en ti v irus sy ste m w as utilized to i ntroduce t he CM V full leng th pp65genei nto m o us e D C s;CpG D NA w as used to i nduce m ature D C s;fl ow cy tom e try and i m m uno fl uo re scence w ere used to de t e r m i ne t he ex pre ssi on o f anti g en and IFN in T l ym pho cy te s.T he re s u lts s how ed tha t t he D C s w ere i nfected w ith lentiv irus at a m ulti p lic ity o f i nfec tion(M O I)o f50w it h o pti m a l i n fectious eff i c i ency o f30%-40%;m ature D C s ex pre ssi ng pp65g ene cou l d sti m ulate auto logo us na ive T ce lls to express CD69specif i ca lly;m ature D C s expressi ng PP65co uld sti m ulate auto logo us CD4+or CD8+T ce lls to pro duce IFN .It is conc l uded tha t CM V pp65 m od ified and CpG D NA induced m ature DC s can acti v ate CM V s pec ific T lym phocy tes i n vitro.K ey w ords cy tom ega lov irus;PP65pro te i n;T l ym pho cy te;dendr itic ce l;l C p G DNAJ Exp H e m a to l2008;16(2):397-400巨细胞病毒(C M V)感染易发生于慢性移植物抗宿主病(c GVHD)等免疫功能低下患者,而C M V 免疫依赖于T细胞活性,因此恢复CMV特异性T 淋巴细胞功能对于防治C M V感染就尤为重要。

人巨细胞病毒蛋白pp65在胶质瘤中的表达及意义李鹏起;费舟;李秉琴;闫志丰;陈晓燕;袁亮;董秋峰;杨鑫;李三中;甄海宁【摘要】Objective The expression and significance of pp65 protein of human cytomegalovirus (HCMV) in gliomas were investigated.Methods The expression of pp65 protein of HCMV was detected by immunohistochemistry in 175 cases of human brain ghoma and 10 cases of normal human brain tissue,as well as the relationship between its expression and clinicopathological features of gliomas was futher analyzed.Results Expression of pp65 protein in gliomas was significantly higher than that in normal human brain tissues (Z =-4.338,P=0.000).Immunostaining intensity of pp65 protein in malignant ghomas was significantly higher than that in benign gliomas (Z =-0.960,P=0.037),while the immunostaining intensity of pp65 protein was not significantly associated with the pathological grade (r =0.096,P=0.208),as well as with the gender (r =0.138,P =0.069),age (r =0.016,P =0.837) and tumor site (r =-0.147,P =0.52) of ghoma patients.Conclusion HCMV infection and its protein pp65 expression may be associated with the tumorigenesis of human brain gliomas,however its exact oncogenous mechanism needs further study.%目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)蛋白pp65在胶质瘤中的表达水平及其意义.方法采用免疫组化方法检测HCMV蛋白pp65在175例人脑胶质瘤组织及10例正常人脑组织中的表达,分析其表达水平与胶质瘤临床病理学特征的关系.结果 pp65蛋白在胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常人脑组织(Z=-4.338,P=0.000);pp65蛋白在高恶性度胶质瘤中的免疫染色强度明显强于低恶性度胶质瘤(Z=-0.960,P=0.037),而pp65蛋白免疫染色强度与胶质瘤的病理级别无明显的相关性(r =0.096,P=0.208),以及pp65蛋白免疫染色强度与胶质瘤患者的性别(r=0.138,P=0.069)、年龄(r=0.016,P=0.837)和肿瘤部位(r=-0.147,P=0.052)也均无明显相关性.结论 HCMV感染及其蛋白pp65表达可能与人脑胶质瘤的发生存在一定关系,但其确切的致瘤机制尚需进一步研究.【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2017(016)003【总页数】5页(P202-206)【关键词】人巨细胞病毒;磷酸化糖蛋白65;胶质瘤;免疫组化【作者】李鹏起;费舟;李秉琴;闫志丰;陈晓燕;袁亮;董秋峰;杨鑫;李三中;甄海宁【作者单位】第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;海东市乐都区人民医院妇产科,青海海东810700;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R373;R739.41胶质瘤是中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤，其发病率约占颅内肿瘤的45%。

论著 人巨细胞病毒gp52-pp65-pp150的融合表达及应用*张乐海**,马丽霞,王世富,姜忠强,彭振居,王素兰(山东大学齐鲁儿童医院,山东济南250022)摘要 目的 克隆表达人巨细胞病毒(human cy tomeg alov ir us,HCM V)特异性强的抗原决定簇基因,制备并纯化重组蛋白,并通过组装成捕获法EL ISA试剂盒对其抗原性进行评价。

方法 提取人巨细胞病毒A D169株的DN A,用PCR扩增H CM V的pp150(U L32)、g p52(U L44)、pp65(U L83)基因片段,将3个基因片段串联克隆至原核表达载体pG EX-5x-3进行融合表达和纯化,采用SDS-P AG E电泳法和免疫印迹法(W est ern blo t)对融合基因的克隆及重组蛋白的表达进行鉴定,并组装成捕获法EL ISA试剂盒对临床标本进行检测,评价试剂盒的各项性能指标。

结果 经序列测定各基因片段序列正确,成功构建了H CM V的高效表达融合基因的重组载体g p52-pp65-pp150,表达的融合蛋白经Western blot分析,分子量在50ku,具有良好的抗原性。

将该蛋白组装成捕获法EL ISA试剂盒,经232份血清标本的检测,与进口试剂盒相比,本试剂盒的灵敏度为93.91%;特异度为97.43%;粗一致性为96.1%;约登指数为0.901;批内变异系数为12.4%;稳定性良好,37 保存试剂与4 保存试剂进行对照试验,变异系数为13%。

结论 本实验通过基因工程技术的方法有效地获取纯度较高、特异性强的HCM V抗原(g p52-pp65-pp150重组蛋白),该融合蛋白构建的捕获法ELISA试剂与进口试剂盒比对,具有较高的灵敏度和特异性,经初步临床应用,具有进一步开发应用的价值,为不同临床感染阶段的H CM V的检测提供了技术基础。

关键词 人巨细胞病毒;g p52-pp65-pp150;免疫球蛋白M;融合基因;原核表达;免疫印迹法中图分类号 R373.11 文献标识码 A 文章编号 1673-5234(2011)01-0012-05[J our nal of Pathogen B iology.2011Jan;6(1):12-16.]The expression and use of the human cytomegalovirus gp52-pp65-pp150fusion geneZH ANG Le-hai,M A L-i x ia,WANG Sh-i fu,JIANG Zhong-qiang,PENG Zhen-ju,WANG Su-lan(T he labo rator y of Qilu Chil dr en s H osp ital of Shandong Univer sity,J inan250022,China)Abstract Objective T o clone and ex press antig en-determining g enes fro m human cyt omegalov irus(H CM V)w ith a high lev el o f specificit y,t o prepare and pur ify t he r eco mbinant prot ein,and to then ev aluate ant igenicit y using an EL ISA capture kit. Methods D NA was ex tracted fr om the H CM V str ain AD169,g ene frag ments o f pp150(U L32),gp52 (U L44),and pp65(U L83)w er e amplified with P CR,and then these thr ee g enetic fr agments wer e connected to the pr o-kar yot ic expressio n v ecto r pGEX-5x-3in a series for fusion,ex pr ession,and pur ificatio n.SDS-PA GE electro pho resis and Western blott ing w ere used to ev aluate clones with fusio n genes and ex pr essio n of recombinant pr otein.Clinical samples wer e tested with an EL ISA capture kit to evaluate the perfo rmance index o f the kit. Results Sequences of t he g enet ic frag ments all pro ved to be corr ect accor ding to sequencing.T he gp52-pp65-pp150recombinant vecto r was successfullyco nstr ucted w ith efficient expressio n of fusion genes of H CM V.Analysis of this ex pression by W estern blotting indicated that the mo lecular w eight of the fusion pr otein was50ku and that it had g ood ant igenicit y.T his pro tein w as subjected to assay w ith an ELI SA captur e kit.T esting of232ser um samples indicated that this kit had a sensitiv ity o f93.91%,spec-i ficity o f97.43%,crude co nsistency o f96.1%,Y ouden index o f0.901,and coefficient o f var iatio n o f12.4%.T he kit had satisfactor y stability compared to an impo rted kit.In a co ntr olled t est w ith the r eagent kept at37 and4 ,the co-efficient o f variation w as13%. C onclusion In this ex per iment,bio eng ineering effect ively y ielded HCM V antig en w ith better pur ity and specificity(gp52-pp65-pp150recombinant pro tein).Compared to impo rted r eagents,the EL ISA captur ekit consist ing of f usio n pro tein in a captur e assay had bet ter sensitiv ity and specificity.Pr eliminar y clinical use war rantsfur ther development and use of this kit.Furthermo re,it pr ovides a techno log ical basis fo r detection o f H CM V in different stag es of clinica l infection.Key words H uman cyto megalovirus(H CM V);g p52-pp65-pp150;immunog lobulin;fusion g ene;pr okary otic expres-sio n,wester n blo t人类巨细胞病毒(H CM V)感染非常普遍,多呈亚临床不显性感染和潜伏感染。

HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定王兴满;汤仁树;赵俊;陈敬贤;王明丽【期刊名称】《安徽医学》【年(卷),期】2010(031)003【摘要】目的研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准.方法对工程菌(DH5α/peDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定.结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8～0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%.三批终产品全面质量检定均符合规定.结论建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础.【总页数】4页(P201-204)【作者】王兴满;汤仁树;赵俊;陈敬贤;王明丽【作者单位】230022,合肥,安徽医科大学微生物学教研室;教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室(省部共建);230022,合肥,安徽医科大学微生物学教研室;教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室(省部共建);230022,合肥,安徽医科大学微生物学教研室;教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室(省部共建);230022,合肥,安徽医科大学微生物学教研室;教育部"重要遗传疾病基因资源利用"重点实验室(省部共建);安徽医科大学微生物学教研室【正文语种】中文【相关文献】1.孕前接种人巨细胞病毒pp65 DNA疫苗对阻断小鼠人巨细胞病毒宫内传播的效果 [J], 黄会芝;吴亦伦;唐久来;吴德;杨世炳;盛晓蓉;许晓燕;周翔2.HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备 [J], 王兴满;吴琼;汤仁树;甘霖;赵俊;王明丽3.HCMV pp65 DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答 [J], 李艳秋;余莉;方草晖;张文艳;王明丽4.同时检测HCMV早期结构抗原（PP65）及其DNA—PCR和抗体IgM对CMV 肝炎诊… [J], 周镇先;李解权5.治疗性双质粒HBV DNA疫苗的纯化与检定 [J], 饶桂荣;黄明;杨富强;莫国玉;刘惠萍;陈光明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。