聚丙烯酰胺凝胶电泳

.电泳技术.第一节第二节电泳技术概述常见电泳技术.常见电泳技术第二节纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳梯度凝胶电泳等电聚焦电泳二维聚丙烯酰胺凝胶电泳印迹电泳毛细管电泳二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr) 和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺(m ethylene-bisacrylamide,简称Bis)在加速剂和催化剂的作用下聚合并联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。

polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE.PAGE应用围广，可用于蛋白质、酶、核酸等的分离、定性、定量及少量的制备，测定相对分子质量、等电点等。

.1、聚丙烯酰胺凝胶的特点①可用于分离不同分子量的生物大分子聚丙烯酰胺凝胶的特点②更高的灵敏度：10－9～10－12 mol/L③化学惰性好，电泳时不会产生“电渗”④电泳分离的重复性好⑤透明度好，便于照相和复印⑥机械强度好，有弹性，便于操作和保存.⑦无紫外吸收⑧可用作固定化酶的惰性载体2、凝胶聚合的原理及有关特性（1）聚合反应凝胶单体丙烯酰胺加速剂四甲基乙二胺AcrTEMED交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺Bis催化剂过硫酸铵(AP) 或核黄素.（2）凝胶孔径的可调性及其有关性质①凝胶性能与总浓度及交联度的关系T(Acr和Bis总浓度)（%）= C(交联剂百分比)（%）= abmbab100100其中a=Acr克数，b=Bis克数，m=缓冲液体积(mL)a/b(W/W)与凝胶的机械性能密切相关a/b＞100 a/b=30 凝胶脆易碎，坚硬呈乳白色凝胶呈糊状，易于断裂完全透明而又有弹性C=6.5−0.3T不同浓度的单体对凝胶性能影响很大，Davis的实验发现Acr＜2%，Bis＜0.5%，凝胶就不能聚合。

当增加Acr浓度时要适当降低Bis的浓度。

聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳法1.仪器装置通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。

其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极，铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流挡上。

2.试剂(1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g，四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L盐酸溶液48ml，再加水溶解并稀释至100ml,置棕色瓶内，在冰箱中保存。

(2)溶液B 取丙烯酰胺30.0g、次甲基双丙烯酰胺0.74g，加水溶解并稀释至100ml,滤过，置棕色瓶内，在冰箱中保存。

(3)电极缓冲液(pH8.3) 取三羟甲基氨基甲烷6g、甘氨酸28.8g,加水溶解并稀释至1000ml，置冰箱中保存，用前稀释10倍。

(4)溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml 与90％乙醇5ml,微热使溶解，加20％乙醇制成250ml。

(5)染色液取0.25％(W/V)考马斯亮蓝G<[250]>溶液2.5ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。

(6)稀染色液取上述染色液2ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。

(7)脱色液 7％醋酸溶液。

3.操作(1)制胶取溶液A2ml，溶液B5.4ml，加尿素2.9g使溶解，再加水4ml，混匀，抽气赶去溶液中气泡，加0.56％过硫酸铵溶液2ml，混匀制成胶液，立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10×0.5cm)中,使胶层高度达6～7cm, 然后徐徐滴加水少量，使覆盖胶面，管底气泡必须赶走，静置约30分钟，待出现明显界面时即聚合完毕，吸去水层。

(2)标准品溶液及供试品溶液的制备(3)电泳将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内，每管加供试品或标准品溶液50～100μl，为防止扩散可加甘油或40％蔗糖溶液1～2滴及0.04％溴酚蓝指示液1滴,也可直接在上槽缓冲液中加0.04％溴酚蓝指示液数滴，玻璃管的上部用电极缓冲液充满，上端接负极、下端接正极。

SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析技术，通过电泳分离蛋白质样品的方法得到了广泛的应用。

本文将着重介绍SDS-PAGE电泳的基本原理。

一、SDS-PAGE电泳的概念SDS-PAGE是一种已经被广泛应用的蛋白质分离技术，它的全称是聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。

这种电泳技术利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过直流电场将蛋白质样品分离出不同电荷和大小的蛋白质成分。

二、SDS-PAGE电泳的原理1. 聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳中所使用的凝胶是由聚丙烯酰胺构成的。

聚丙烯酰胺凝胶具有一定的孔隙结构，可以根据蛋白质的大小和电荷来调整孔隙的大小，从而实现不同大小的蛋白质的分离。

2. SDS处理SDS是指月桂基硫酸钠，它是一种阴离子表面活性剂。

在SDS-PAGE 电泳中，将样品中的蛋白质经过SDS处理后，蛋白质表面都会均匀地吸附一定数量的SDS分子，并且使蛋白质呈负电荷。

这样，所有的蛋白质分子都会带有类似的电荷密度，可以消除蛋白质的本身的电荷特性，使蛋白质在电场作用下只受到电场力的作用，而不受到其他因素干扰。

3. 蛋白质分离将经过SDS处理的蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，然后通过电泳进行分离。

经电泳分离后，蛋白质会根据其大小和电荷迁移到不同位置，从而使不同的蛋白质分离开来。

三、SDS-PAGE电泳的应用SDS-PAGE电泳技术在生物化学和分子生物学研究领域应用广泛。

它可以用于研究蛋白质的分子量、纯度和比例，也可以用于检测蛋白质的存在和表达水平，同时还可以用于鉴定蛋白质的异构体等。

四、SDS-PAGE电泳的发展SDS-PAGE电泳技术自问世以来，经过不断的改进和完善，在蛋白质分离和分析领域一直处于领先地位。

未来，随着科学技术的不断进步，SDS-PAGE电泳技术也将会迎来新的发展，并在更广泛的领域得到应用。

聚丙烯酰胺凝胶电泳实验结果聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）是一种用于分离不同分子量的蛋白质的实验方法。

在PAGE实验中，蛋白质在电场的作用下，会根据其分子量大小在聚丙烯酰胺凝胶中进行迁移。

分子量越大的蛋白质，其迁移率越慢。

PAGE实验结果的分析主要根据以下几个方面：•蛋白质条带的数量：表示样品中存在的蛋白质种类。

•蛋白质条带的大小：表示蛋白质的分子量。

•蛋白质条带的形状：表示蛋白质的完整性。

以下是PAGE实验结果的常见分析方法：•标准品对照：使用已知分子量的蛋白质标准品作为对照，可以用来确定样品中蛋白质的分子量。

•SDS-PAGE：SDS-PAGE是一种常用的PAGE方法，在该方法中，蛋白质会被SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂处理，使其变性并失去其原有的结构。

因此，SDS-PAGE实验结果主要根据蛋白质条带的大小来判断分子量。

•非变性PAGE：非变性PAGE是一种不使用SDS和还原剂的PAGE方法，在该方法中，蛋白质可以保持其原有的结构。

因此，非变性PAGE实验结果主要根据蛋白质条带的形状来判断分子量。

以下是PAGE实验结果的常见示例：•单一蛋白质：如果样品中只有一种蛋白质，那么凝胶中将会出现一个单一的条带。

•多种蛋白质：如果样品中存在多种蛋白质，那么凝胶中将会出现多个条带。

•蛋白质变性：如果蛋白质在样品制备过程中发生变性，那么凝胶中可能会出现多个条带，或者条带的形状会发生变化。

PAGE实验结果可以用于以下目的：•蛋白质纯度分析：通过比较样品中蛋白质条带的数量和大小，可以判断样品的纯度。

•蛋白质分子量测定：通过对比样品中蛋白质条带的大小和标准品条带的大小，可以测定样品中蛋白质的分子量。

•蛋白质鉴定：通过对比样品中蛋白质条带的大小和形状，可以进行蛋白质鉴定。

实验结果实验材料•样品：肌肉组织蛋白•标准品：蛋白质分子量标准品•凝胶：10% SDS-PAGE凝胶•染色剂：溴酚蓝实验步骤1. 将样品和标准品制备成均匀的溶液。

聚丙烯酰胺凝胶电泳dna聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称PAGE）是一种常用的生物分析技术，尤其在DNA分析中得到广泛应用。

本文将从原理、步骤和应用等方面介绍聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA技术。

一、原理聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA是基于DNA分子的电荷和大小差异来进行分离的技术。

聚丙烯酰胺凝胶是一种由聚丙烯酰胺单体构成的高分子网状结构，具有较小的孔隙大小。

DNA分子在电场作用下，根据其电荷大小和分子大小，通过凝胶孔隙的阻碍作用而分离出不同长度的DNA片段。

二、步骤1. 制备凝胶：将聚丙烯酰胺单体与交联剂TEMED和过硫酸铵混合，形成聚丙烯酰胺凝胶混合液。

将混合液倒入凝胶模具中，插入梳子，在混合液固化后去除梳子，得到凝胶板。

2. 样品处理：将待分析的DNA样品与加载缓冲液混合，加热至变性，使DNA分子解开双链，然后冷却至室温。

3. 载样：将处理好的DNA样品加入凝胶孔隙中。

4. 电泳：将凝胶板浸泡在缓冲液中，连接正负电极，通电进行电泳。

电场作用下，DNA分子向阳极（正电极）迁移。

5. 可视化：电泳结束后，将凝胶板进行染色或用荧光探针标记DNA分子，然后使用紫外光或激光扫描仪进行成像。

三、应用1. DNA测序：聚丙烯酰胺凝胶电泳是传统的DNA测序方法之一。

通过根据DNA分子长度的差异进行分离，可以得到DNA的序列信息。

2. DNA片段分析：聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于分析DNA样品中的片段大小和相对含量，用于DNA指纹图谱的构建、基因突变的检测等。

3. 蛋白质分析：类似于DNA分析，聚丙烯酰胺凝胶电泳也可以用于分离和分析蛋白质样品。

通过改变凝胶孔隙的浓度和pH值等条件，可以实现对蛋白质的分离。

4. RNA分析：聚丙烯酰胺凝胶电泳也可以用于RNA的分析，如分析RNA的大小和纯度等。

聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA技术是一种重要的生物分析技术，广泛应用于DNA测序、DNA片段分析、蛋白质分析和RNA分析等领域。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)实验报告一、实验目的1.学习SDS-PAGE分离蛋白质的原理；2.掌握垂直板电泳的操作方法。

二、实验原理1、电泳：(1)定义：是指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。

(2)影响电泳效果的因素：①带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快；②颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快；③溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快；④溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快；⑤电场强度：电场强度越小，电泳速度越慢，反之越快；⑥离子强度：离子强度越大，电泳速度越慢，反之越快；⑦电渗现象：电场中，液体相对于固体支持物的相对移动；⑧支持物筛孔大小：孔径小，电泳速度慢，反之则快。

2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）(1)定义聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：是以聚丙烯胺凝胶作为载体的一种区带电泳。

SDS-PAGE:是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）(2)SDS的作用SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。

由于SDS带有大量负电荷，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖,即消除了蛋白质分子之间电荷差异。

因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小(3) SDS-PAGE分类：¾SDS-PAGE按照缓冲液pH值和凝胶孔径差异分为连续系统和不连续系统两大类：连续系统：电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。

不连续系统：缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度均不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳(4)聚丙烯胺凝胶的生成：聚丙烯胺凝胶由丙烯酰胺单体（Acr）和N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下聚合而成。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：莱姆利(emmli)于1970年创建的含十二烷基硫酸钠(SDS)的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质方法。

向样品加入还原剂(打开蛋白质的二硫键)和过量SDS，SDS是阴离子去垢剂，使蛋白质变性解聚，并与蛋白质结合成带强负电荷的复合物，掩盖了蛋白质之间原有电荷的差异，使各种蛋白质的电荷／质量比值都相同，因而在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时迁移率主要取决于蛋白质分子大小。

是分析蛋白质和多肽、测定其分子量等常用的方法。

可测定蛋白质分子量.其原理是带大量电荷的SDS结合到蛋白质分子上克服了蛋白质分子原有电荷的影响而得到恒定的荷/质比.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量已经比较成功,此法测定时间短,分辨率高,所需样品量极少(1～100μg),但只适用于球形或基本上呈球形的蛋白质,某些蛋白质不易与SDS结合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此时测定结果就不准确.2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）(1)定义丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：是以聚丙烯胺凝胶作为载体的一种区带电泳。

SDS-PAGE:是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）(2)SDS的作用SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。

于SDS带有大量负电荷，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖,即消除了蛋白质分子之间电荷差异。

此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小(3) SDS-PAGE分类：SDS-PAGE按照缓冲液pH值和凝胶孔径差异分为连续系统和不连续系统两大类：连续系统：电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。

不连续系统：缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度均不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳(4)聚丙烯胺凝胶的生成：聚丙烯胺凝胶由丙烯酰胺单体（Acr）和N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下聚合而成。

sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术，该技术通过在凝胶电泳过程中使用一种带有离子表面活性剂SDS（十二烷基硫酸钠）的聚丙烯酰胺凝胶，可以将蛋白质分子进行线性化处理，从而使其在电场中按照分子质量大小进行迁移，最终实现对蛋白质的分离和分析。

sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术是生物化学和分子生物学领域中最重要的实验技术之一。

它被广泛应用于蛋白质的分离、鉴定和定量分析，并且对于蛋白质的结构和功能研究具有不可替代的作用。

在科学研究、医学诊断和生物工程领域中都有着重要的应用价值。

本篇文章将从以下几个方面来介绍sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，包括其原理、应用、实验操作步骤以及相关的意义和发展趋势。

一、原理sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的原理主要包括以下几个方面：1. SDS线性化蛋白质：SDS是一种带有强烈负电荷的表面活性剂，在凝胶电泳过程中，SDS可以与蛋白质分子中的亲水残基相结合，并使蛋白质分子呈线性状态，从而使蛋白质的电泳迁移速率与其分子质量成正比。

2. 分子质量分析：在电泳过程中，由于SDS的作用，所有蛋白质分子都被线性化处理，并且蛋白质分子的迁移速率只与其分子质量大小有关，因此可以根据蛋白质在凝胶中的迁移距离来推断其分子质量。

3. 分离效果：由于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对蛋白质进行了线性化处理，因此不同分子质量大小的蛋白质分子可以在凝胶中得到有效分离，形成清晰的电泳带。

二、应用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术主要应用于以下几个方面：1. 蛋白质分离与鉴定：通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，可以将混合蛋白质样品有效地分离并形成清晰的电泳带，便于后续的蛋白质鉴定和分析。

2. 蛋白质定量：在实验室中，可以利用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对蛋白质样品进行定量分析，根据样品中的蛋白质含量来确定实验结果。

3. 蛋白质结构和功能研究：通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术可以实现对不同蛋白质的分子量测定，为进一步的结构和功能研究提供重要数据支持。