橡胶树胶乳RNA简易提取和保存方法的比较探索

一.组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。

2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。

注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。

如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。

后面的步骤和细胞RNA提取一样。

二.培养细胞的RNA提取1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。

悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。

然后离心去上清，不需要用PBS洗。

2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。

（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80℃，用的时候提取和新的提取的效果一样。

）在冰上操作。

3.上面的混匀5-10 分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。

我只介绍一些需要注意的地方。

1.一定要注意冰上操作，低温离心。

2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。

3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。

4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA 酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。

5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。

一种快速微量提取橡胶树胚基因组DNA的方法方家林;蔡海滨;涂敏;华玉伟;黄华孙【期刊名称】《热带农业科学》【年(卷),期】2013(033)006【摘要】In order to establish a rapid detection microsystem of early embryo genomic variation in rubber tree,establishing a rapid microextraction of DNA from the embryo was needed.DNA was extracted from 1 mm3 rubber tree's early embryo by improved CTAB method,urea improved method and SDS method,and identified by PCR amplification.Results showed extraction efficiency of urea improved method was higher than SDS method and improved CTAB method; DNA extracted by urea improved method also can be used in PCR amplification.Urea improved method was the most suitable microextraction method for early embryo genomic in rubber tree.%为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法.运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS 法分别对1mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证.结果表明,尿素改良法的DNA提取率高于SDS法和CTAB改良法;样品的DNA适合PCR检测需要.因此尿素改良法是适宜于微量橡胶树胚基因组DNA 提取的理想方法.【总页数】4页(P19-22)【作者】方家林;蔡海滨;涂敏;华玉伟;黄华孙【作者单位】中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心海南儋州571737【正文语种】中文【中图分类】S794.1【相关文献】1.一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法 [J], 范达;陈勇;陈善春;雷天刚;王军政;宋二玲;彭爱红;谭洪泉;王金萍;李政利;李凤龙2.一种简单快速的拟南芥基因组DNA的微量提取方法 [J], 邹华文;黄丛林3.一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法（英文） [J], 范达;雷天刚;王军政;宋二玲;彭爱红;谭洪泉;王金萍;李政利;李凤龙;陈勇;陈善春4.一种简单快速的拟南芥基因组DNA的微量提取方法 [J], 邹华文;黄丛林5.一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法 [J], 范达; 陈勇; 陈善春; 雷天刚; 王军政; 宋二玲; 彭爱红; 谭洪泉; 王金萍; 李政利; 李凤龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

橡胶提取方法嘿，你问橡胶提取方法啊？这可有点门道呢。

先说说从橡胶树上提取橡胶吧。

这是最常见的一种方法。

得找一棵橡胶树，可不能随便找一棵哦，得是那种能产橡胶的树。

就像你找水果得找能吃的水果树一样。

找到橡胶树后，在树干上割一个口子，这口子可不能割得太深，不然树会受伤的。

割完口子后，橡胶就会从口子里流出来啦。

流出来的橡胶是乳白色的，有点像牛奶。

这时候得用一个小盆子或者罐子接着，别让橡胶流到地上浪费了。

还有一种方法是从废旧橡胶制品中提取橡胶。

比如说旧轮胎啊、旧橡胶管啊啥的。

把这些废旧橡胶制品收集起来，先清洗干净，把上面的脏东西都洗掉。

然后把它们剪成小块，越小越好哦。

剪完小块后，用一种特殊的机器把这些小块加热融化。

就像你把巧克力放在锅里加热融化一样。

加热融化后，橡胶就会变成液体状，可以把杂质过滤掉，留下纯的橡胶液体。

等橡胶液体冷却后，就变成固体橡胶啦。

我给你讲个事儿吧。

我有个叔叔是在橡胶厂工作的。

他们厂里就是用从橡胶树上提取橡胶和从废旧橡胶制品中提取橡胶这两种方法。

有一次，我去他们厂里玩，看到工人们在橡胶树上小心翼翼地割口子，然后用盆子接着流出来的橡胶。

还有一些工人在处理废旧橡胶制品，把它们剪成小块，放进机器里加热融化。

我觉得可有意思啦。

你看，橡胶的提取方法还挺多的呢。

所以啊，橡胶可以从橡胶树上提取，也可以从废旧橡胶制品中提取。

不同的方法有不同的步骤和注意事项哦。

要是你对橡胶提取感兴趣，可以去实地看看，了解一下这个过程。

加油哦！。

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (4): 516−520, 收稿日期: 2006-12-01; 接受日期: 2007-03-05基金项目: 中国博士后基金(No. 200503190)和中国热带农业科学院科技基金(No. Rky0523)* 通讯作者。

E-mail: zzl_catas@.技术与方法.一种快速、高效的橡胶树胶乳总R N A 提取方法张治礼*, 杨云, 刘宽灿, 苏火生中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 热带作物生物技术国家重点实验室, 海口 571101摘要 胶乳是橡胶树(Hevea brasiliensis )乳管中特殊的细胞质, 主要由橡胶粒子、黄色体、F-W 粒子和普通细胞质成分构成, 其中橡胶粒子占20%－40%, 蛋白含量高达1%－2%。

由于高比例橡胶粒子和蛋白质的干扰, 目前使用的胶乳RNA 提取方法都具有步骤繁琐、胶乳需求量大、操作技巧性强不易掌握等缺点。

为快速、高效地获取高质量的胶乳RNA, 我们在现有方法的基础上摸索出一套步骤简单、容易操作、快速、高效提取橡胶树胶乳总RNA 的简易方法, 获得了较好的实验效果。

紫外分光光度计、RT-PCR 和RACE 分析结果表明, 使用该方法提取的胶乳RNA 质量完全能够满足相应的分子操作, 但所需时间仅为目前常用方法的50%, RNA 获得率提高了2－3倍, 操作难度大大降低。

关键词 橡胶树, 胶乳, 方法 , RNA 提取张治礼, 杨云, 刘宽灿, 苏火生 (2007). 一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA 提取方法. 植物学通报 24, 516−520.橡胶树(Hevea brasiliensis )胶乳是橡胶树特有的细胞质, 除含有普通的细胞器成分外, 还含有橡胶粒子、黄色体等特有细胞器, 其中蛋白质含量约为1%－2%(诸杰和朱南康, 2006), 橡胶粒子含量高达20%－40%。

巴西橡胶树的RNA序列分析和从头转录组装摘要：橡胶树，作为商业天然橡胶的唯一来源，是一个非常经济重要的作物。

在努力促进生物，生化橡胶合成和分子生物学研究，在这里，我们报告的下一代大规模并行使用测序技术和de novo转录组装获得了全面的概述H.巴西转录的。

测序生成的输出超过12万，平均长度读取90新台币。

在总额48768 unigenes（平均尺寸=436基点，通过重新组装中位数的大小=328 BP）转录组装。

出13807 H.的巴西cDNA序列存入Genbank中的国家生物技术信息中心（NCBI的）（2月的2011年），11,746序列（84.5％），可配合通过核苷酸高炉的组装unigenes。

“装配序列与基因描述注明，基因本体（GO）的同源群集团（COG）的条款。

所有，37432 unigenes成功注释，其中24545人（65.5％）对齐蓖麻蛋白。

此外，注释uingenes功能分类根据的GO，COG和“京都基因和基因组百科全书数据库。

我们的数据提供了最全面橡胶树的研究提供序列资源以及证明有效利用Illumina 的测序和de novo转录组装在一个缺乏物种基因组信息。

关键词：从头组装橡胶树RNA的序列转录引言：超过2,000合成橡胶（CIS-1-4-聚异戊二烯）植物物种分布在七个家庭300。

其中，橡胶树，橡胶树亩“LL。

精氨酸。

是唯一的商业来源的天然橡胶由于其高的生产和橡胶的质量。

自然橡胶是一种广泛使用的工业聚合物，因为目前没有合成的替代品，具有可比性的物理属性。

天然橡胶的经济重要性推动进入细胞生化继续调查乳胶合成生物学方面（田等。

2003年，兴都库什等。

1990年，许三多等。

2009年周等。

2007年）。

为了争取到橡胶合成的见解乳胶转录，周等人。

（2007年）测序10040表达序列标签（EST），并获得了3441独特的成绩单。

柯等人。

（2003）分析了多20000的cDNA扩增片段长度多态性（cDNA-AFLP 技术）为基础的转录衍生片段（个TDFs）和1176个EST发现7个基因家族占超过51％的乳胶转录。

An effcicient method for extraction of High qualitity RNA from Hevea brasiliensisAbstractTrizol法是RNA提取中最常用的一种方法，但橡胶树富含多糖和次生代谢物、酚类物质，直接用Triton法很难获得高质量的RNA. 本研究先对样品采取CTAB-LiCL预处理，预处理后的样品再用Trizol 法可以提取到高质量的RNA，预处理后的样品也可直接保存在Triton 裂解液待日后再进行提取。

通过CTAB-LiCL预处理可有效去除多糖和次生代谢物，避免样品褐化。

该方法获得的RNA质量很好，可以用于SSH、RT-PCR等基因操作中。

而且该法也可用于热带植物叶子总RNA的提取，如椰子、芒果、荔枝、龙眼等。

An effcicient method for extracting RNA from leaves of rubber plants (Hevea brasiliensis) containing high levels of polysaccharides and secondary metabolites has been developed.The total RNA of high purity is suitable for use in a variety of downstream applications including RACE and RT-PCR. The procedure may also have wider applicability for total RNA extraction from the tissues of other tropical plant, such as coconut、mango、litchi、longan. Several other standards protocols and commercial kit were not efficient for the isolation of RNA from leaves, because of both of latex and polysaccharides pigments. We have developed a new method for extracting RNA from leaves, which preceded a CTAB pretreatment before Trizol protocol. This method alsocan be used for other plants, especial recalcitrant plant.（英文参考A simple and efficient method is described for isolating high quality RNA from bilberry fruit. The procedure is based on the use of hexadecyltrimethyl ammonium bromide (CTAB), polyvinylpyrrolidone (PVP), and beta-mercaptoethanol in an extraction buffer in order to eliminate the polysaccharides and prevent the oxidation of phenolic compounds. This method is a modification of the one described for pine trees, and yields high-quality RNA suitable for cDNA based methodologies. This method is applicable for a variety of plant tissues）Introduction橡胶树(Hevea brasiliensis Muell. Arg.)原产于亚马逊河流域，是目前唯一有商业利用价值的天然橡胶来源，属于热带植物。

利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法与相关技术引言：植物RNA是研究植物基因功能、转录调控等重要的研究对象，准确、高质量的植物RNA提取是进行后续实验的基础。

目前，利用RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法以其高效、快速、高纯度和高稳定性被广泛应用于植物分子生物学研究中。

本文将介绍RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法以及相关技术的应用和优缺点。

一、RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒及方法RNA吸附柱提取方法是一种采用硅胶膜或硅树脂等吸附介质吸附RNA，通过洗脱纯化的方法快速提取RNA的技术。

市面上有多个公司推出了RNA吸附柱快速提取植物RNA的试剂盒，如Tiangen RNAprep Pure PlantKit、Omega E.Z.N.A. Plant RNA Kit等。

1.样品制备首先，需要提前准备样品，常用的样品包括植物新鲜组织、冷冻的植物组织和植物种子等。

2.组织粉碎与裂解将植物样品在液氮中迅速磨碎成粉末，然后将粉末加入适量的裂解缓冲液，研磨均匀。

3.裂解液处理将裂解液加入RNA保护剂，如RNase Inhibitor，以防止RNA的降解。

然后将样品经过高速离心，取出上清液。

4.负载RNA吸附柱将上一步骤得到的上清液加入RNA吸附柱柱床中，反复离心，使样品在柱床上充分接触。

目的是让RNA与吸附柱上的硅胶膜结合。

5.洗涤步骤为了去除杂质，需要进行洗涤步骤。

多次加入RNA洗涤缓冲液，离心，去除杂质。

最后，以高能或去离子水进行扩散，去除阻碍RNA的杂质。

6.RNA洗脱将洗涤后的柱床用RNase-Free水进行洗脱，得到高质量的植物RNA。

最后，使用RNA保护剂进行贮存。

二、相关技术1.纳米比色法纳米比色法是一种常用的技术，用于测定RNA和DNA的浓度和纯度。

通过根据RNA或DNA与试剂之间的比色反应进行分析和测定。

2.全长限制性消化电泳（RFLP）全长限制性消化电泳是一种常用的技术，用于检测RNA的完整性和纯度。

橡胶树的RNA序列分析和从头转录装配摘要：橡胶树是商业天然橡胶的唯一来源，是一个极其经济地重要作物。

在橡胶生物合成中的生物化学和分子学研究致力于便利生物，这里我们报告用的下一代重地的par-等位基因序列技术，从头转录装配获得一个全面概观的综合质量控制。

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关键词：从头装配；橡胶树；RNA序列；转录组研究简介：橡胶(cis-1-4-polyisoprene)被综合附近的的剩余2，000植物种分发其中300类的七个家庭。

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(2007)序列10，040表达序列标签(无害环境技术)，获得3，441个独特副本。

一种改良的橡胶树胶乳总RNA提取方法
黄贵修;吴坤鑫;陈守才
【期刊名称】《热带生物学报》
【年(卷),期】2002(008)004
【摘要】橡胶树胶乳总RNA提取过程中,常常遇到胶乳收集需要时间长,需去除橡胶粒子才能提取RNA等困难;利用常规方法提取的胶乳总RNA通常产量较低、易降解、体外翻译困难等.本文介绍一种改进的LiCl沉淀法,不需预先去除橡胶粒子,得到的总RNA样品经紫外分光光度计检测和1.2%甲醛变性凝胶电泳分析证明,具有较高的纯度和完整性,且产量较高,可满足多数分子生物学实验的需要.
【总页数】4页(P1-4)
【作者】黄贵修;吴坤鑫;陈守才
【作者单位】华南热带农业大学农学院,海南儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571101;中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571101
【正文语种】中文
【中图分类】S7
【相关文献】
1.一种适于枯草芽孢杆菌总RNA提取的改良方法 [J], 徐速;徐香玲
2.一种改良的红豆杉成熟针叶总RNA提取方法 [J], 李德文;杨超;付金颖;刘英;于莉莉;付玉杰
3.一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA提取方法 [J], 张治礼;杨云;刘宽灿;苏火生
4.一种测定巴西橡胶树胶乳中过氧化氢含量及其在胶乳各组分中分布的方法研究[J], 蔡甫格; 王立丰; 史敏晶; 田维敏
5.一种测定巴西橡胶树胶乳中过氧化氢含量及其在胶乳各组分中分布的方法研究[J], 蔡甫格; 王立丰; 史敏晶; 田维敏
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不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用研究摘要:本研究旨在研究不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用。

获取总RNA的方法有一定的复杂性，因此对比评估不同提取方法对总RNA提取效率的影响是重要的。

本研究通过对二氧化碳抽提法、变性抽提法和Trizol抽提法进行实验，分析三种方法对总RNA的影响，结果表明，变性抽提法的结果显示出比其他抽提法更高的可用性，同时也能够提取出更高质量的总RNA。

此外，该方法的可重复性更好，在实际应用中可以在一定程度上保证实验成果的可靠性。

关键词：总RNA，抽提法，CO2抽提法，变性抽提法，Trizol 抽提法正文：本研究旨在研究不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用。

总RNA提取是基于转录组分析的一个重要环节，其首先要获取高质量、高可用性的总RNA样品，以保证其他流程的顺利进行。

提取总RNA有一定的复杂性，需要使用不同的抽提方法来保证提取效率和质量。

为此，本研究实验比较了二氧化碳抽提法、变性抽提法和Trizol抽提法，以此来分析三种方法对总RNA提取可用性和质量的影响。

对二氧化碳抽提法，实验结果表明，该方法不仅能够保持RNA的完整性，同时总RNA 提取量也比其他抽提方法更大，但是其抽提率并不理想。

另一方面，变性抽提法的结果证明出，与其他抽提方法相比，该方法的可用性更高，同时能够提取出更高质量的总RNA样品。

此外，该方法的可重复性更好，在实际应用中可以在一定程度上保证实验成果的可靠性。

最后，Trizol抽提法的结果证明，该方法在可用性和质量方面都不如变性抽提法，而且RIN值也更低。

综上所述，本研究结果表明，变性抽提法是最满意的橡胶树总RNA抽提方法。

本研究的发现对于未来的总RNA提取也有重要的意义。

首先，本研究结果证明变性抽提法是获取橡胶树高可用性总RNA样品的最佳抽提方法，而这种抽提方法在提取效率和质量上都有较好的表现。

此外，本研究也证实，变性抽提法的可重复性优于普通抽提方法，因此在实际应用中可以得到更可靠的结果，同时还可以减少实验时间。