高效液相色谱分析法4

高效液相色谱仪测定邻苯4P作业指导书一、范围本指导书适用于Rohs2.0中管控的四种邻苯二甲酸酯含量的测定。

四种邻苯二甲酸酯：邻苯二甲酸丁苄酯（BBP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（DEHP）。

本指导书适用于Rohs2.0中管控的四种邻苯二甲酸酯的高效液相色谱测定方法。

二、规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

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GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T26792-2011高效液相色谱仪SJ/T11692电子电气产品中有害物质检测样品拆分指南三、术语和定义四种邻苯二甲酸酯Four Phthalates（PAEs）四种邻苯二甲酸酯是指表1中四种碳氢化合物。

四、原理将分析试样破碎后，用乙腈提取，经可控温超声波清洗器超声，过滤洗涤后定容，用高效液相色谱仪（HPLC）测定，采用目标分析物的保留时间定性，外标法定量。

五、试剂与材料5.1乙腈：色谱纯。

5.2甲醇：色谱纯。

5.3水：符合GB/T6682中一级水。

5.4滤膜和滤器：有机相针筒过滤膜，0.22um或相当者。

5.5四种邻苯二甲酸酯标准物质：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（DEHP）纯度>98.0%；邻苯二甲酸丁苄酯（BBP）纯度>98.0%；邻苯二甲酸二丁酯（DBP）纯度>98.0%；邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）纯度98.0%。

六、仪器和装置6.1高效液相色谱仪：配置紫外检测器。

6.2色谱柱：C18柱,250mm×4.6mm×5.0um或相当者。

6.3粉碎机或等效设备：转速高于2700r/min。

6.4分析天平：精度0.1mg。

6.5可控温超声波清洗器：频率（400±100）Hz，功率（120±10）W，水浴温控范围：（25±5）℃至（80±5）℃。

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。

溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。

超声脱气30分钟以上。

2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。

7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 设计走样方法。

9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。

第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱(GC)的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法，易称为现代液相色谱法。

高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。

梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。

也称为梯度淋洗。

低压梯度──又称外梯度，特点是先混合后加压。

它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统，易称为泵前混合。

高压梯度──又称内梯度，特点是先加压后混合。

它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。

两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器，经充分混合后进入色谱柱系统，是一种泵后高压混合形式。

柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。

柱外因素常指从进样口到检测器之间，除色谱柱以外的所有死时间，如进样器、连接管、检测器等的死体积，都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。

液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力，样品分子被流动相带入柱内，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。

K值大的强极性组分易被吸附，K值小的弱极性组分难被吸附，样品组分因此被分离。

液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同，有不同的分配，从而实现分离的方法。

分配系数较大的组分保留值也较大。

正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。

反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。

化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。

网络出版时间：2012-10-16 17:38网络出版地址：/kcms/detail/43.1183.TS.20121016.1738.014.html高效液相色谱法测定酸奶中四种有机酸Determination of 4 organic acids in yogurt by high-performanceliquid chromatography田辉1,2孙懿琳1,2周元良1,2霍贵成1,2TIAN Hui1,2SUN Yi-lin1,2ZHOU Y uan-liang1,2HUO Gui-cheng1,2（1.乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨150030；2.东北农业大学，黑龙江哈尔滨150030）(1.Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Harbin, Heilongjiang 150030, China;2.Northeast Agricultural University, Harbin, Heilongjiang 150030, China)摘要：测定酸奶中风味有机酸，精确评价酸奶风味，并对比3种发酵剂的发酵性能。

使用3种直投式发酵剂以半工业化方式生产酸奶，测定3种酸奶在发酵及冷藏过程中的酸度变化，感官评定酸奶成品，并通过高效液相色谱法（HPLC）分析酸奶中的4种有机酸成分（乳酸、柠檬酸、丙酮酸及甲酸）。

结果表明：3种发酵剂产酸迅速，所产酸奶品质优良，M与自制发酵剂后酸化弱。

冷藏期间3种酸奶中有机酸含量的变化存在细微差异。

利用高效液相色谱法有效测定了酸奶中4种有机酸（乳酸、柠檬酸、丙酮酸及甲酸），成功评定了3种发酵剂的的发酵性能。

关键词：高效液相色谱；有机酸；酸奶；感官评定Abstract: The research is to determine the organic acids in yogurt by high-performance liquid chromatography(HPLC), evaluate the flavor of yogurt by sensory evaluation, and compare the performances of 3 cultures. Threekinds of direct-vat-set cultures were used to produce yogurt respectively in a semi-industrialized way, and then theacidities of yogurt during fermentation were determined. Sensory evaluation was made to assess the quality ofyogurt, and 4 kinds of organic acids (lactic, citric, pyruvic and formic acids) in yogurts were determined by HPLC.Results: It showed that all 3 cultures had quick acidity production, and all yogurt was proved to hold high qualities.The culture M and the self-made culture showed a weak post acidification while N culture showed strong. Somedifferences of the organic acids contents among 3 kinds of yogurt were observed. 4 organic acids (lactic, citric,pyruvic and formic acids) in yogurt were determined effectively by HPLC, and the performances of 3 cultures基金项目：教育部长江学者和创新团队发展计划项目（编号：IRT0959）作者简介：田辉(1984—)，男，东北农业大学在读博士研究生。

超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法一、概述在当今的科学研究和工业生产中，高分辨质谱技术已经成为一种非常重要的分析方法。

它不仅可以用于大分子的结构鉴定和分析，还可以用于微量成分的检测和定量分析。

超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法作为一种新兴的高分辨质谱分析技术，具有很高的分辨率和灵敏度，受到广泛关注。

在本文中，将介绍该技术的原理、应用及发展前景。

二、原理超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法的原理主要包括超高效液相色谱、四极杆质谱和静电场轨道阱质谱三部分。

1. 超高效液相色谱（UHPLC）是一种高分辨率、高灵敏度的液相色谱技术，它通过使用亚毫米级的柱内粒子和高压泵，能够大大提高分离效率和分析速度。

2. 四极杆质谱是一种广泛应用的成熟质谱分析技术，它通过四个电极产生交变电场，对离子进行筛选和分析。

3. 静电场轨道阱质谱是一种高分辨率、高灵敏度的质谱分析技术，它通过静电场将离子束限制在一个稳定的轨道上，以便进行准确的质量测定。

三、应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法在许多领域都有着重要的应用价值，例如医药、食品安全、环境监测等。

1. 医药领域：该技术可以用于药物代谢动力学研究、天然产物的结构鉴定和药物残留的检测。

2. 食品安全领域：该技术可以用于食品中农药、兽药残留的检测、食品添加剂的分析及食品成分的定量分析。

3. 环境监测：该技术可以用于大气、水体和土壤中微量有机物和无机物的分析与检测。

四、发展前景随着分析技术的不断发展，超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法也在不断完善和提高。

未来，预计该技术将在分析速度、分辨率、灵敏度和样品通量方面都会有显著的提升。

1. 提高分辨率：通过优化仪器结构、信号处理算法等手段，提高分辨率，实现更为精准的分析。

2. 提高灵敏度：改进离子传输和捕获方式，提高仪器的灵敏度，能够对更小浓度的物质进行分析。

3. 提高分析速度：通过改进柱子材料、优化流动相等手段，提高分析速度，实现更为高效的分析。

仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。

它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。

仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。

流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。

高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。

与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。

同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。

因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。

在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。

通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。

例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。

在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。

通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。

在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。

通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。

在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。

现代食品检测技术第一部分——色谱分析——高效液相色谱第七章高效液相色谱分析法High performance liquid chromatograph 第一节高效液相色谱的特点与仪器第二节主要分离类型与原理第三节液相色谱的固定相与流动相第四节影响分离的因素与操作条件的选择第五节新型液相色谱简介2010-1-25第一节高效液相色谱的特点与仪器2010-1-25一、高效液相色谱法的特点在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论。

在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化。

高效液相色谱法的突出特点：1）高效（柱效约为30000n /米）2）高速（较经典色谱法））3）高压（150 -350*105Pa4）高灵敏度（高灵敏度的检测器：紫外10-9g，荧光：10-11g ）2010-1-251. HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1）经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1～3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀；常压输送流动相，柱效低（H↑，n↓）；分析周期长、无法在线检测。

2）HPLC：分离和分析柱内径2～6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱）；高压泵输送流动相，柱效高（H↓，n↑）；分析时间大大缩短、可以在线检测。

2010-1-252. HPLC与GC差别9相同：兼有分离和分析功能，均可以在线检测9主要差别：分析对象、流动相及操作条件的差别1）分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测，仅能分析有机物的20％。

HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制；分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测，用途广泛，占有机物的80％。

2010-1-252）流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3）操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大）2010-1-25二、液相色谱仪器2010-1-25三、流程及主要部件Process and main assembly of HPLC 1.流程2010-1-252.主要部件(1) 高压输液泵♥主要部件之一，压力：150～350×105Pa。

高效液相色谱对二苯甲烷4，4'-二异氰酸酯（MDI）及中间产物的快速测定贺春梅;陈国强;陈蓝天【摘要】本文利用高效液相色谱法对二苯甲烷4,4'-二异氰酸酯（MDI）及中间产物的乙醇衍生物进行分析，实现了MDI及中间产物的测定。

色谱条件：采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱分离，以水-甲醇（体积比40∶60）溶液为流动相，流速1.2mL·min-1，检测波长：245nm，柱温30℃，中间产物和MDI衍生物的线性较好（r均在0.999以上）。

该方法重复性好，灵敏度高，简便且快速。

%A new hight performance liquid chromatography(HPLC) method was established for the determina-tion of diphenylmethane 4,4'-diisocyanate(MDI) and the middle of produce was derived by ethanol without water. The chromatographic conditions:the separation was performed on a Agilent Eclipse XDB-C 18 column with Water-methyl alcohol (40∶60,V/V)as the mobile phase at a flow rate of 1.0mL·min-1. The detection wavelength was set at 245 nm, the column temperature was 30℃. Under the optimized condition ,there was good li near relationship be-tween the mass concentration and the peak area of MDI and the middle of produce with the correlation coefficient r>0.999. The method is good reproducibility, hight sensitivity, simple and rapid.【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】4页(P40-42,78)【关键词】二苯甲烷4,4'-二异氰酸酯(MDI);高效液相色谱法;衍生物【作者】贺春梅;陈国强;陈蓝天【作者单位】中国石油乌鲁木齐石化公司研究院，新疆乌鲁木齐 830019;中国石油乌鲁木齐石化公司研究院，新疆乌鲁木齐 830019;中国石油乌鲁木齐石化公司研究院，新疆乌鲁木齐 830019【正文语种】中文【中图分类】O657.7二苯甲烷4,4'-二异氰酸酯（简称MDI）是聚氨基甲酸酯（简称聚氨酯）的主要原料[1]。

高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和检测技术，被广泛应用于化学、生物和医药等领域。

以下是高效液相色谱法实验报告的示例：实验名称：高效液相色谱法分离和检测混合物一、实验目的1.学习高效液相色谱法的基本原理和实验操作；2.利用高效液相色谱法分离和检测混合物中的组分；3.分析实验数据，得出结论。

二、实验原理高效液相色谱法是一种基于色谱分离原理的检测技术。

样品中的组分在流动相和固定相之间的分配平衡，通过不同性质的固定相实现组分的分离。

在分离过程中，组分在色谱柱上的保留时间和洗脱顺序可用于定性分析，而组分的浓度或含量可通过检测器进行定量分析。

三、实验步骤1.准备试剂和仪器：选择合适的流动相、固定相、检测器等，确保仪器正常运行；2.配置样品：将待测混合物溶解于适当的溶剂中，制备成适当浓度的样品溶液；3.连接仪器：将流动相泵、色谱柱、检测器和数据采集系统连接起来，确保密封良好；4.平衡色谱柱：在开始进样之前，让色谱柱通过流动相进行平衡，使固定相达到稳定状态；5.进样分析：将样品溶液注入进样器中，由流动相带入色谱柱进行分离。

记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；6.清洗色谱柱：实验结束后，用适量的流动相清洗色谱柱，以除去残留的样品组分；7.数据处理：对实验数据进行处理和分析，包括峰识别、定量和定性分析等。

四、实验结果与数据分析1.记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；2.根据实验数据绘制色谱图，标注各个峰对应的组分；3.根据峰面积或峰高计算各个组分的浓度或含量；4.分析实验结果，与标准品进行比较，确定组分的性质。

五、结论根据实验结果和数据分析，得出以下结论：1.利用高效液相色谱法成功分离和检测了混合物中的各个组分；2.通过与标准品比较，确定了各个组分的性质；3.本实验表明高效液相色谱法是一种有效的分离和检测方法，可应用于实际生产和科研中。

高效液相色谱法测定高纯度4-甲基邻苯二酚陈素青【摘要】研究了用高效液相色谱-反相色谱内标法测定由4-甲酚与低浓度过氧化氢水溶液反应生成的高纯度4-甲基邻苯二酚.色谱条件为:C18反相柱,流动相为V(甲醇):V(质量分数为0.2%的乙酸水溶液)=50:50,紫外检测波长为282nm,流速0.8mL/min.4-甲基邻苯二酚的最低检测质量浓度为0.04μg/mL,在0.1～100μg/mL范围内4-甲基邻苯二酚的峰面积与质量浓度的线性关系良好(r=0.9999).以对苯二酚为内标物,用内标法检测由4-甲酚与低浓度过氧化氢水溶液反应生成的高纯度4-甲基邻苯二酚含量,用此方法4-甲基邻苯二酚回收率为99.9%～100.2%.【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(019)001【总页数】3页(P46-48)【关键词】反相高效液相色谱法;内标法;4-甲基邻苯二酚;对苯二酚【作者】陈素青【作者单位】连云港三吉利化学工业有限公司,江苏,连云港,222047【正文语种】中文【中图分类】O6580 引言4-甲基邻苯二酚又名高儿茶酚,是重要的精细化工中间体,广泛应用于医药(抗菌剂)、农药、苹果型香料、抗氧化剂及高效阻聚剂等生产领域。

对高纯度4-甲基邻苯二酚纯度的测定目前尚无国家标准可循。

虽然已有厂家在生产4-甲基邻苯二酚,但多用气相色谱检测。

气相色谱法对高含量的样品分析准确度不高[1]。

在查不到4-甲基邻苯二酚国家标准和4-甲基邻苯二酚国际标准的情况下,用本文测定方法检测,实际应用效果很好,该方法主要是针对高纯度的4-甲基邻苯二酚的测定,一般低含量的4-甲基邻苯二酚(如在合成中的中间控制样品)直接用高效液相色谱法外标法就可以了,而对高纯度的4-甲基邻苯二酚的测定,用外标法误差太大,不能满足实际需要。

高效液相色谱法的特点就是高速、高效、高灵敏度。

在常用的内标法、外标法和归一法3种定量分析方法中,内标法由于有进样量的变化和色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响不大的优点[2],通常精确度更高,所以,相对来说对高含量的样品分析采用高效液相色谱法内标法较好。