葡萄糖氧化酶生产PPT课件

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在进行葡萄糖氧化酶的生产之前，需要进行一系列准备工作。

葡萄糖氧化酶的最大光吸收波长为377～455nm。

葡萄糖氧化酶的等电点在4.9左右,而过氧化氢酶的等电点在6.5附近。

因此在提纯葡萄糖氧化酶时应选用阴离子交换剂，且在ｐＨ值大于4.9时上样和淋洗，此时葡萄糖氧化酶带负电荷，可被阴离子交换剂吸附留柱，而过氧化氢酶带正电荷随淋洗液流下，从而使二者得以分离，最后用ｐＨ值小于4.2的缓冲液洗柱，使葡萄糖氧化酶带正电荷而从柱上被洗脱。

葡萄糖氧化酶稳定的ｐＨ值范围为3～4，最适ｐＨ值为5，如果没有葡萄糖等保护剂的存在，ｐＨ值大于8或小于3葡萄糖氧化酶将迅速失活。

葡萄糖氧化酶的作用温度为30～60℃，该酶不受乙二胺四乙酸、氰化钾及氟化钠抑制,但受氯化汞、氯化银、对氯汞苯甲酸和苯肼抑制。

葡萄糖氧化酶一、酶的简介葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，简称GOD)能够在有氧气的条件下专一性催化β-D- 葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢,高纯度GOD的制剂为淡黄色粉末、易溶于水，完全不溶于乙醚、氯仿、甘油和乙二醇[1]。

50%丙酮、66%甲醇能使其沉淀。

它广泛地分布于动物、植物和微生物体内，但由于微生物具有生长繁殖速度快，来源广等特点使之成为葡萄糖氧化酶的主要来源，微生物中的主要生产菌株为黑曲霉和青霉。

葡萄糖氧化酶是用黑曲霉等发酵制得的一种需氧脱氢酶，对人体无毒、副作用，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等功能，它广泛应用于食品、饲料、医药等行业中，具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用。

【2】二、菌种及培养基2.1 菌种：以黑曲霉H1-9b为菌种，在发酵罐中装入培养基2.2 发酵培养基(g/L)：蔗糖80、蛋白胨3、KH2PO4 2、MgSO4·7H2O 0.7、KCl 0.5、NaNO3 4，pH5.5；斜面培养基(g/L)：蔗糖30、NaNO32、K2HPO41、KCl 0.5、MgSO4 0.5、FeSO40.01、琼脂20，pH5.5【3】。

发酵条件为：26～29摄氏度，pH值自然，通风量0．3m3／(m3·min)，搅拌速度400r／min。

发酵液离心分离得菌丝体，经研磨(因葡萄糖氧化酶是一种胞内酶，提取时首先必须先研磨破壁)后过滤，得到含葡萄糖氧化酶的滤液即酶液。

[4]三、工艺流程葡萄糖氧化酶制备流程图原料预处理培养基配制灭菌无菌空气制备发酵产品的分离纯化菌种的制备和种子培养葡萄糖氧化酶下游工艺流程图3.1葡萄糖氧化酶的发酵3.1.1种子液培养在斜面培养基上接种黑曲霉H1-9b 孢子，28℃培养4 ～5 d 。

3.1.2摇瓶发酵250mL 锥形瓶中分装50mL 发酵培养基，121℃灭菌20min，接种黑曲霉H1-9a 孢子浓度为104个/mL，28℃、200r/min 摇床培养80h 即达产酶高峰。

葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法是指将葡萄糖（Glc）作为底物，由某种特殊酶（G6Pase）催化氧化而产生氢氧化物（H2O2），该反应又称为微量氢氧化物（MDA）生成反应。

由于葡萄糖氧化酶法具有灵敏度高、反应时间短、反应简便、检测量程广等特点，近些年来在生物医药领域的研究应用越来越广泛，因此对于葡萄糖氧化酶法的介绍显得尤为重要。

一、葡萄糖氧化酶法的原理葡萄糖氧化酶法是通过由某种特殊酶（G6Pase）催化葡萄糖氧化而产生氢氧化物（H2O2），再由过氧化氢酶（H2O2ase）催化H2O2反应，最后将H2O2转化为电荷被电极检测，测定其等效电导率，来判断溶液中glc浓度。

该过程简称为G6Pase-H2O2ase流程。

二、葡萄糖氧化酶法的性能特点①灵敏度高。

以G6Pase酶为催化剂利用葡萄糖氧化酶法检测浓度非常低的葡萄糖，其灵敏度可达1μM。

②反应时间短。

由于采用了G6Pase酶催化葡萄糖氧化，所以在H2O2ase催化下，在室温下其反应时间仅为几分钟。

③反应简便。

葡萄糖氧化酶法的解决方案简单，只需要简单的试剂和仪器，实验过程也很简单，不用配制和稳定各种溶液，只需几步就可完成检测。

④检测量程广。

葡萄糖氧化酶法可从0.5μM到10.0mM范围内检测葡萄糖浓度。

三、葡萄糖氧化酶法的实际应用葡萄糖氧化酶法广泛应用于药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域，由于其具有灵敏度高、反应时间短、反应简便以及检测量程广等特点，受到了广大科研人员的关注。

（1）药物研发。

葡萄糖氧化酶法可以方便快捷地检测药物活性，从而为药物研发提供重要依据。

（2）疾病检测。

葡萄糖氧化酶法可用于检测血液中的葡萄糖浓度，可以快速有效地诊断糖尿病。

（3）抗病毒活性的检测。

葡萄糖氧化酶法可用于检测抗病毒药物的活性，以便快速有效地诊断抗病毒药物的抗病毒活性。

综上所述，葡萄糖氧化酶法的发展为广大科研人员提供了一种新的检测技术，在药物研发、疾病检测以及抗病毒活性等领域均有着重要的应用价值。