检验科微生物室院感监测标准操作程序文件
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检验科微生物室
院感监测标准操作程序文件
一、【环境采样的一般原则】
1、具有代表性和一定的数量
2、送检时间＜6h
3、分析样本污染的来源（是来源于环境，病室空气、病人本身）
二、【空气采样及检查方法】
1、监测对象：手术室、治疗室、抢救室、病房、换药室等
2、采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前进行。
3、采样的高度：与地面垂直高度80～150cm。
4、布点方法
房间面积≤30m2采三点（内、中、外对角线三点，内、外距墙1米。
）
房间面积＞30m2采东、西、南、北、中，其中东、西、南、北距墙1米。
5、采样方法：
用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5分钟后送检。
6、检验方法
将采样平板置37℃培养箱，24小时观察结果并计数5个（3个）平板中的平均菌落数。
7、结果计算
公式：
A:平板面积，cm2； T为平板暴露时间，min； N为平均菌落数,cfu/平皿。
三、【物体表面采样及检查方法】
1、采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。
2、采样面积
被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
3、采样方法
用5cm×5c m 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1～4个规格板面积，
剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
4、检验方法
将每个采样管敲打80次，10倍递次稀释。
每个稀释度，分别取1ml放灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，置37℃温箱，培养24小时观察结果，每个稀释度作平行样品2～3个。
取菌落数为30～300个的平板计数，求出平均菌数。
结果计算
四、【医务人员手采样及检查方法】
1、采样时间：在接触病人，从事医疗活动前进行采样。
2、采样面积及方法
被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样的试管内送检。
采样面积按平方厘米（cm2）计算。
3、检验方法
将每个采样管敲打80次，10倍递次稀释。
每个稀释度，分别取1ml放灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，置37℃温箱，培养24小时观察结果，每个稀释度作平行样品2～3个。
取菌落数为30～300个的平板计数，求出平均菌数。
4、计算结果
五、【医院各部门空气、物表、医务人员手细菌菌落总数卫生标准】
空气物表医务人员手
cfu/m3 cfu/m2 cfu/m2
Ⅰ类：层流洁净手术室，层流洁净病房≤10 ≤5 ≤5
Ⅱ类：普通手术室、产房、新生儿室、早≤200 ≤5 ≤5产儿室、供应室无菌区、烧伤病房等
Ⅲ类：儿科病房、妇产科检查室、注射室≤500 ≤10 ≤5换药室、治疗室、化验室等
Ⅳ类：传染病房—≤15 ≤15
六、【使用过程中的消毒剂的采样和检查方法，以及常用消毒剂的中和剂】
1、采样时间
采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。
2、采样量及方法
在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可，对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3%(W/V)吐温80，以中和被检样液的残效作用。
3、检验方法
采得的样品应于1小时内送实验室检验。
用每毫升50滴（每滴0.02ml）的无菌滴管吸取上述稀释的消毒液，滴于2个普通营养琼脂平板上，每个平板滴10滴，每滴之间应隔天一定距离。
将一平板放温箱内，35℃培养3天，另一平板放室温20℃培养7天，观察并计算菌落生长数。
4、结果分析
平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌），若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜再用。
5、常用消毒剂的中和剂见附表
附表常用消毒剂的中和剂
消毒剂（浓度）中和剂（浓度）
含氯（碘）消毒剂（有效氯）（碘）0.1%-0.5%
过氧乙酸（0.1%～0.5%）
过氧化氢（1.0%～3.0%）
福尔马林（甲醛1%）
戊二醛（2%）
季铵盐类消毒剂（0.1%～0.5%）
洗必泰（0.1%～0.5%）
酚类消毒剂（3.0%～5.0%）
碱类消毒剂
酸类消毒剂
酒精硫代硫酸钠（0.1%～1.0%）
硫代硫酸钠（0.1%～1.0%）
硫代硫酸钠（0.5%～1.0%）
（1）双甲酮（1%）与吗啉（0.6%）混合液
（2）亚硫酸钠（0.1%～0.5%）
（3）氢氧化铵（25%）
甘氨酸（1%）或同甲醛（1）
吐温80（0.5%～3.0%）
卵磷脂（0.1%～2.0%）
吐温80（3.0%～5.0%）
等量酸
等量碱
1%～3%吐温80
七、【医疗器械采样及检查方法】
1、采样时间：消毒灭菌后存放在有效期内采样
2、采样方法：每批样品数量的2%～10%随机抽样
a、外科敷料：剪1×3cm→4ml肉汤内，37℃培养3天，应为无菌生长。
b、医疗器械：用棉签涂
c、一次性注射器、输液器：取不同量的洗脱液振80次
0.5ml普通培养30℃～35℃5天
2 ml→混匀取洗脱液 0.5ml厌O2培养30℃～35℃5天
0.5ml霉菌培养 20℃～25℃7天
注射器ml 数与洗脱液升数之间的比例关系
注射器洗脱液
1ml 0.5ml
2ml 1ml
5～10ml 2ml
20～25ml 5ml
输液器 5ml
（附：浸在消毒液中的器械作细菌监测时肉汤中应加中和剂）
洗脱液的配方： 0.18ml吐温-80
18g 蛋白胨 +100ml DH2O，121℃，15′
0.85g NaCl
八、【卫生标准值】
1、同时不能检出乙型溶血链球菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单孢菌。
各类环境空气、物体表面、医护人员手卫生标准见第五条。
2、母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室、儿科病房的物表，医务人员手不能检出沙门氏菌。
3、进入人体无菌组织，器官或接触破损皮肤，粘膜的医疗器械必须无菌。
4、接触皮肤的医疗用品细菌数应≤200cfu/g或100cm2；致病性微生物不得检出。
5、接触粘膜的医疗用品细菌数应≤20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得检出。
6、使用中的消毒剂细菌菌落总数应≤100cfu/ml；致病微生物不得检出。
7、无菌器械保存液必须无菌。
