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1822018 年第 5 卷第 34 期2018 Vol.5 No.34临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical·实验研究·炮制影响中药大黄5种蒽醌成分含量的检测分析马小芳，朱宝康（江苏苏中药业集团股份有限公司，江苏 泰州 225500）【摘要】目的 探讨分析炮制影响中药大黄5种蒽醌成分含量的检测。
方法 选择色谱柱填料，检测波长为254 nm 。
流动相甲醇-0.1%磷酸溶液。
结果 平均收回率，大黄酸为94.8%，RSD 为0.73%；芦荟大黄素为94.6%，RSD 为1%；大黄酚为96.1%，RSD 为0.41%；大黄素为97.2%，RSD 为0.58%；大黄素甲醚为95.6%，RSD 为0.38%在经过炮制之后，与生品相比较，生大黄当中的五种蒽醌苷元都有不同程度下降。
结论 此方法具有良好的重复性，便于操作，较为稳定，能够应用在大黄炮制工艺和质量标准研究当中。
【关键词】炮制；中药大黄；蒽醌成分；含量检测【中图分类号】R283 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.34.182.02大黄具有解毒凉血，通便清热，能够达到通经逐淤效果。
其含有的蒽醌类衍生物能够显著起到利尿，消炎，抗肿瘤以及抗菌等效果[1]。
蒽醌的测量方式主要包括重量法，比色法，极谱法以及薄层扫描法等，应用最多的就是高效液相色谱法，此次研究主要是探讨分析炮制影响中药大黄5种蒽醌成分含量的检测，现将此次研究报告作如下汇报。
1 药品、仪器和试剂此次研究所使用的紫外检测器和高效液相色谱仪主要为惠普-1100型，中国药品生物制品提供大黄酚，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚以及芦荟大黄素。
其中大黄素，大黄酚和大黄酸为含量测定规格，大黄素甲醚和芦荟大黄素利用高效液相法检测纯度超过98%。
炮制品执行炮制，试剂主要为磷酸，硫酸，盐酸以及乙醚和氯仿等，色谱纯为甲醇，检测用水为纯水。
一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。
2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。
3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。
二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。
本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。
2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。
（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。
（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。
（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。
（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。
（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。
（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。
2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。
（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。
（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。
实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。
HPLC法测定大黄药材中5种游离蒽醌的含量李红英;向极钎;龙澜;帅超群;李亚杰【摘要】[目的]建立HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量,并对不同产地的大黄样品进行测定.[方法]采用依利特ODS2 C18柱(200 mm × 4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-浓度0.1％磷酸(75∶25,v/v),流速为1 ml/min,检测波长为254nm,柱温25℃.[结果]芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性回归方程分别为:Y=1.96X-0..25,相关系数R =0.999 94;Y=2.45X+0.18,相关系数R=0.999 94;Y=1.91X +0.05,相关系数R=0.999 90;Y=1.25 X-0.06,相关系数R=0.999 95;Y=0.96 X-0.20,相关系数R=0.999 98;平均回收率分别为99.39％、98.84％、98.94％、99.11％和98.37％.[结论]该方法简单、快速、重现性好、结果准确,可用于大黄药材品质评价与质量检测.%[Objective] The establishment of HPLC method for simultaneous determination of aloe emodin inrhubarb,rhein,emodin,chrysophanol physcion,content,and different places in rhubarb samples.[Method] ODS2 C18 column (200 mm ×4.6 mm,5μm),mobilephaseof methanol:0.1％phosphoric acid =75∶25 (V/V),the flow rate was 1 ml/min,the detection wavelength was 254 nm,column temperature was 25 ℃.[Result] The linear regression equation of aloe-emodin; rhein; emodin; chrysophanol ; physcion are Y =1.96X-0.25,correlation coefficient R =0.999 94 ; Y =2.45 X + 0.18,R =0.999 94; Y =1.91 X + 0.05,R =0.999 90 ; Y =1.25 X-0.06,R =0.999 95 ; Y =0.96 X-0.20,R =0.999 98 ; the average recoveries were99.39％,98.84％,98.94％,99.11％,98.37％.[Conclusion] The method issimple,rapid,reproducible,accurate results,and can be used for quality evaluation and quality test of rhubarb.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(000)012【总页数】2页(P5278-5279)【关键词】HPLC;大黄;芦荟大黄素;大黄酸;大黄素;大黄酚;大黄素甲醚【作者】李红英;向极钎;龙澜;帅超群;李亚杰【作者单位】湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站,湖北恩施445000;恩施清江生物工程有限公司,湖北恩施445000;湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站,湖北恩施445000;恩施清江生物工程有限公司,湖北恩施445000;湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站,湖北恩施445000;恩施清江生物工程有限公司,湖北恩施445000;恩施清江生物工程有限公司,湖北恩施445000;湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站,湖北恩施445000【正文语种】中文【中图分类】S567大黄为蓼科(Polygonaceae)植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)的干燥根及根茎［1］，具有泻下攻积、清热泻火、止血、解毒和活血化瘀之功效［2］。
大黄特征图谱研究及游离蒽醌含量测定目的:建立大黄不同炮制品的特征图谱,对其中5种游离蒽醌类成分进行比较研究。
方法:HPLC-DAD法建立大黄的特征图谱,同时测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种游离蒽醌的含量。
流动相甲醇-0.1%HAc水梯度洗脱,检测波长270nm、420nm,流速0.8ml/min;柱温25℃。
结果:所建立的特征图谱信息丰富,5个游离蒽醌在测定范围内线性关系较好(r>0.9999),平均回收率分别为100.3%、99.55%、96.56%、99.84%、101.3%。
结论:不同炮制品其特征图谱有所差别,游离蒽醌表现出一些规律性的变化。
标签：大黄;特征图谱;游离蒽醌大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palamatum L、唐古特大黄R.tanguticum Maxim exBalf.或药用大黄R.officinale Bail的干燥根及根茎[1]。
神农本草经中记述,大黄味苦寒,归胃、肝大肠经。
大黄具有抗菌、泻下、止血、抗肿瘤、抗衰老等多种生物活性,临床上常以不同的炮制品组方入药发挥不同的功效,如生大黄苦寒沉降泻下作用为主,酒大黄苦寒泻下作用缓和,炭大黄具有止血作用。
蒽醌类成分是大黄的主要有效成分,在治疗疾病过程中起着重要的作用,同时这类成分与其炮制品的功效变化密切相关[2-3]。
本实验以HPLC-DAD法建立了大黄不同炮制品的特征图谱,并测定了大黄不同炮制品中5种游离蒽醌类成分的含量,比较了这类成分在大黄炮制过程中的变化,以期为大黄的质量控制及临床应用提供依据。
1仪器与试药Agilent1200色谱工作站系统(G1315D型DAD检测器,G1316A恒温柱箱,G1312A二元泵,G1322A在线脱气机,G1329A自动进样器);超声清洗器KQ-100(昆山市超声仪器有限公司);十万分仪器之一分析天平BP211D(Sartorius 赛多利斯科)。
甲醇为色谱纯(山东禹王),水为超纯水(江苏省方剂重点实验室),使用前均经0.45μm滤膜滤过;其余试剂均为分析纯。
清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析清蒸大黄是一种常见的中药材，被广泛应用于中医领域。
大黄炮制的过程及其五种游离蒽醌的含量分析对于中药的质量评价具有重要意义。
本文将对清蒸大黄的炮制方法进行介绍，并详细说明其五种游离蒽醌的含量测定分析方法，以期为中药研究和生产提供参考。
一、清蒸大黄的炮制方法大黄又名黄连，是一种常用的中药材，具有清热泻火、解毒润肠的功效。
清蒸大黄是对大黄进行炮制的一种方法，以提高其药效和降低毒性。
清蒸大黄的炮制方法主要包括以下几个步骤：1. 选材：选择新鲜的大黄药材，质地饱满、表面光滑。
2. 清洗：将大黄药材用清水浸泡，去除表面的泥土和杂质。
3. 切片：将清洗好的大黄药材切成均匀的薄片，以便于后续的处理。
4. 清炒：将切好的大黄片放入锅中炒热，直至表面呈现微黄色，然后取出晾凉备用。
5. 蒸制：将清炒好的大黄片摆放在蒸笼中，用文火蒸熟，直至大黄变软，表面出现鱼鳞纹路。
6. 干燥：将蒸制好的大黄药材晾晒至表面完全干燥。
通过以上炮制方法，大黄药材的毒性得到一定程度的降低，药效得到提高，适用于中医治疗各种疾病。
二、五种游离蒽醌的含量测定分析方法大黄中含有多种有机化合物，其中以蒽醌类物质为主要成分，包括大黄素、大黄酚、大黄素、大黄酸和大黄酚苷等五种游离蒽醌。
这些化合物对于大黄的药效有着重要的影响，因此对其含量进行分析具有重要意义。
五种游离蒽醌的含量测定分析可以采用高效液相色谱法（HPLC），以下是具体的测定方法：1. 提取样品：将清蒸大黄样品粉碎成细粉，取适量加入乙醇，超声提取，过滤得到提取液。
2. 色谱条件：使用反相C18色谱柱进行分离，以甲醇-水为流动相，在一定梯度下进行洗脱。
3. 进样量：取适量提取液，经过滤膜过滤后，取一定体积进样。
4. 色谱条件：流速1.0ml/min，柱温25℃，检测波长为254nm。
5. 内标法定量：采用大黄素为内标，通过建立外标法，确定五种游离蒽醌的含量。
2019年6月| 33酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均达到基线分离，理论板数按大黄素峰计算均不低于5000，拖尾因子均在0.95～1.05，阴性对照无干扰。
见图1。
A. 混合对照品溶液；B. 供试品溶液；C. 阴性供试品溶液1.芦荟大黄素；2.大黄酸；3.大黄素；4大黄酚；5大黄素甲醚图1 对照品、供试品及阴性供试品的色谱图2.6 线性关系考察按照2.2项下的方法，取各对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含芦荟大黄素58.78μg、大黄酸116.00μg、大黄酚67.93μg，大黄素41.40μg，大黄素甲醚22.06μg 的混合标准储备液。
再以甲醇对倍稀释，摇匀，即得系列混合对照品溶液。
吸取各浓度混合对照品溶液10μL，进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
回归方程及线性范围分别为芦荟大黄素Y=49.092x+2.0575，1.84～58.78μg ·mL -1，r=1；大黄酸Y=43.821x+4.6572，3.63～116.00μg ·mL -1，r=1；大黄素Y=35.906x+0.9923，1.29～41.40μg ·mL -1，r=1；大黄酚Y=52.149x+3.8537，2.12～67.93μg ·mL -1，r=1；大黄素甲醚Y=40.763x+0.5908，0.69～22.06μg ·mL -1，r=1。
2.7 定量限将对照品溶液稀释进行测定，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的定量限分别为0.92、1.59、1.48、0.71、0.78ng。
0 引言一种保健食品减肥片由制大黄、泽泻等有效成分组成，具有辅助减肥的保健功能。
其中制大黄含蒽醌类化合物，具有多种活性[1-3]。
本试验采用HPLC 法建立了总蒽醌5个成分的含测方法，结果表明此法专属性、重复性好，为大黄类保健食品的质量标准研究提供了依据。
1 仪器与试剂Agilent 1200液相色谱仪，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均购自中国食品药品检定研究院，甲醇、乙腈为色谱纯。
大黄主要蒽醌类成分的闪式提取及HPLC检测目的建立简便的闪式提取法提取中药大黄中蒽醌类成分，并用HPLC法测定其中5种主要游离蒽醌的含量，为大黄蒽醌类化合物高效提取和工业生产提供依据。
方法建立闪式提取法提取大黄中蒽醌类成分，与常规的回流提取法进行比较研究，采用C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸为流动相，梯度洗脱，建立HPLC 检测方法，同时检测五种蒽醌的含量，并比较两种方法的提取效率。
结果建立的HPLC法能够同时检测5种蒽醌成分，方法准确、可靠。
与回流提取方法比较，闪式提取法在短时间内可以达到相近的提取率，显示了闪式提取大黄蒽醌类化合物的优势。
结论在相同实验条件下，闪式提取法显示了快速简便、节能高效的特点，可为大黄蒽醌类有效成分成分的高效提取和工業生产提供理论依据。
标签：大黄；蒽醌；闪式提取；HPLC；回流提取[Abstract] Objective To establish a simple flash extraction to extract the anthraquinones component of rhubarb and the content of 5 kinds of main free anthraquinones was measured by the HPLC method thus providing basis for the effective extraction and industrial production of anthraquinones component of rhubarb. Methods The anthraquinones component of rhubarb was extracted by the flash extraction，and compared with the routine reflux extraction，and the C18 chromatographic column was used and the acetonitrile -0.1% phosphoric acid was used as the mobile phase and the content of five kinds of anthraquinones was tested by the HPLC test method and the extraction effect was compared. Results Five kinds of anthraquinones could be tested by the HPLC，and the method was accurate and reliable，and the flash extraction could reach the similar extraction rate in a short time，which showed that the advantages of it in extraction of rhubarb anthraquinone analogues. Conclusion The flash extraction is rapid，simple，energy-saving and effective under the same experimental conditions，which can provide theoretical basis for the effective extraction and industrial production of anthraquinones component of rhubarb.[Key words] Dahuang；Anthraquinone；Flash extraction；HPLC；Reflux extraction大黄有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经及利湿退黄的功效[1]。
大黄的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探究从大黄中提取有效成分的方法，并对提取产物进行定性和定量分析，以了解大黄中活性成分的含量和性质。
二、实验原理大黄中含有多种化学成分，如蒽醌类化合物（大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等）、鞣质、多糖等。
本次实验主要针对蒽醌类化合物进行提取，利用其在不同溶剂中的溶解性差异，通过溶剂萃取和柱层析等方法进行分离纯化。
三、实验材料与仪器1、材料大黄药材：干燥的大黄根茎。
试剂：乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、乙酸乙酯、硅胶等。
标准品：大黄酸、大黄素等标准对照品。
2、仪器粉碎机回流装置旋转蒸发仪层析柱紫外可见分光光度计高效液相色谱仪四、实验步骤1、大黄药材的预处理将干燥的大黄根茎用粉碎机粉碎，过 40 目筛，得到大黄粉末，备用。
2、提取称取一定量的大黄粉末，加入适量的乙醇，在回流装置中加热回流提取 2 小时。
提取液过滤，收集滤液，减压浓缩至无醇味，得到粗提物。
3、酸水解在粗提物中加入适量的盐酸溶液，加热水解 1 小时，使结合型蒽醌转化为游离型蒽醌。
水解液冷却后用氢氧化钠溶液中和至中性。
4、萃取将水解后的溶液用乙醚萃取多次，合并乙醚萃取液，减压浓缩至干，得到乙醚提取物。
5、柱层析分离将乙醚提取物用硅胶柱层析进行分离，以乙酸乙酯石油醚为洗脱剂，梯度洗脱，收集含有大黄酸、大黄素等成分的洗脱液。
6、浓缩与干燥将收集的洗脱液减压浓缩至干，得到纯化的大黄提取物。
五、实验结果与分析1、定性分析采用薄层色谱法（TLC）对提取物进行定性分析。
以大黄酸、大黄素等标准品为对照，在相同的展开条件下，观察提取物的斑点与标准品斑点的位置和颜色是否一致。
结果显示，提取物中含有与标准品相同的成分。
2、定量分析采用高效液相色谱法（HPLC）对提取物中的大黄酸、大黄素等成分进行定量分析。
根据标准曲线计算出提取物中各成分的含量。
六、实验讨论1、提取方法的选择本次实验采用乙醇回流提取法，该方法操作简单，提取效率较高。
HPLC同时测定大黄利胆胶囊中5种蒽醌类成分的总含量李锐【期刊名称】《食品与药品》【年(卷),期】2017(019)005【摘要】目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定大黄利胆胶囊中5种蒽醌类成分总含量的方法.方法采用phenomenon luna C18色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(82:18),检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,柱温为30℃.结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的线性范围分别为1.057~67.67mg/L(r=0.9999),1.117~71.49 mg/L(r=0.9999),1.047~67.02mg/L(r=0.9999),1.089~69.71 mg/L(r=0.9999),0.5968~38.20 mg/L(r=0.9996);平均加样回收率(n=6)分别为98.0%(RSD=1.69%),99.2%(RSD=2.19%),99.4%(RSD=1.89%),98.9%(RSD=0.7 6%),97.8%(RSD=1.26%).结论该方法简便,可行、重现性好,可作为大黄利胆胶囊的质量控制方法.【总页数】4页(P350-353)【作者】李锐【作者单位】海南省药品检验所,海南海口 570216【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.HPLC法同时测定黄蒲通窍胶囊中3种蒽醌类成分的总含量 [J], 韩燕全;洪燕;谢道俊;高家荣;汪永忠;夏伦祝2.HPLC法测定胆石通胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量 [J], 何素琴;欧阳吉德;肖琳3.HPLC法测定通腑胶囊中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚及芦荟大黄素的含量 [J], 樊磊磊4.HPLC法测定附黄胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素大黄酚及大黄素甲醚的含量 [J], 张松涛5.HPLC法测定复方大黄利胆片中大黄素、大黄酚的含量 [J], 刘善新;马毅;钟方晓;靳光乾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大黄通便胶囊中5种蒽醌类化合物的含量测定周燕霞;毛坤军;周慧云;何丽针;黄平【摘要】建立大黄通便胶囊制剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的HPLC含量测定方法.采用Gemini-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1％的磷酸水溶液(74:26,V/V)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为254 nm.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚在质量浓度分别为10.48～104.8、5.58～55.8、3.36～33.6、17.72～177.2、6.24～62.4μg/mL范围内呈良好的线性关系.本试验所建立的方法准确、可靠、重复性好,可为大黄通便胶囊的质量控制提供科学的依据.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2018(046)022【总页数】3页(P79-81)【关键词】大黄通便胶囊;蒽醌类;含量测定;HPLC【作者】周燕霞;毛坤军;周慧云;何丽针;黄平【作者单位】江西医学高等专科学校, 江西上饶 334000;江西医学高等专科学校, 江西上饶 334000;江西医学高等专科学校, 江西上饶 334000;江西医学高等专科学校, 江西上饶 334000;江西医学高等专科学校, 江西上饶 334000【正文语种】中文【中图分类】O657.72大黄通便胶囊是由大黄药材经提取加工制成的中药制剂，具有清热通便之功效，临床上主要用于实热食滞所致的便秘，食欲不振[1-2]。
其组成药大黄主要有效成分为蒽醌类化合物[3]，该类化合物具有较强的泻下、抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血脂等生物活性[4-6]，常作为药物质量评价的主要指标成分[7-8]。
大黄通便胶囊现行标准为《国家药品监督管理局国家药品标准》WS3-089(Z-089)-2002(Z)[9]，其含量测定项下以大黄素和大黄酚为指标成分。
但单一或者少数成分难以全面评价药物的内在质量。
高效液相色谱法测定大黄药材的蒽醌衍生物含量来进君;陈志【摘要】用高效液相色谱法测定大黄药材中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量.选用SunfireTMC18分析柱(250mm×4.6mm,5um);流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(90:10);检测波长440nm;流速1ml/min;柱温为30℃,进样量20ul.方法快速,灵敏,准确.【期刊名称】《青海草业》【年(卷),期】2017(026)002【总页数】3页(P10-12)【关键词】大黄酸;大黄素;大黄酚;高相液相【作者】来进君;陈志【作者单位】青海师范大学生命与地理科学学院,青海西宁810008;青海师范大学生命与地理科学学院,青海西宁810008【正文语种】中文【中图分类】S812.6蓼科草本植物掌叶大黄(Rheum pabnarum L)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf)或药用大黄(Rheum officinale Baill)的根或茎，是我国重要药材之一。
大黄具有泻下、抗炎、保肝利胆、保护胃黏膜、利尿、改善肾功能、降血压、抗菌、抗病毒、祛痰、抗肿瘤、降脂、减肥、改善胰岛素抵抗等功能。
现代药理研究表明，大黄含有蒽醌衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸、挥发油、多糖等。
蒽醌衍生物主要包括大黄酚(chrysophanol)、大黄素(emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素甲醚(physcion)、芦荟大黄素(aloc-emodin)、番泻苷A，B，C，D(sennosideA，B ，C，D)、大黄酸-8-葡萄糖苷(rhein-8-mono-β-D-glucoside)、芦荟大黄葡萄糖苷(aloc-emodin monoglucoside)、大黄素葡萄糖苷(emodin monoglucoside)、大黄酚-1-葡萄糖苷(chrysophanol-1-8-monoglucoside)等。
本研究采用HPLC法测定大黄中的大黄素、大黄酸、大黄酚的含量，亦能取得稳定、快速、重现性好的效果。
大黄提取物中5种蒽醌化合物的分离纯化刘婷婷;卢春霞【摘要】为研究大孔树脂对大黄5种蒽醌的分离效果,本文采用静态吸附实验,比较6种大孔树脂(HPD-100、XDA-6、AB-8、LX-38、ADS-7和ADS-17)对5种游离蒽醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的吸附及解吸附性能,筛选出对大黄5种蒽醌吸附率和吸附率最高的大孔树脂.然后以筛选的大孔树脂作为载体,对其动态吸附特性进行了初步研究.结果显示,HPD-100大孔树脂对大黄5种蒽醌吸附率和吸附率最高;在层析柱径高比1∶8,上样溶液5种蒽醌总浓度为3.64 mg/mL,上样体积2.0 BV,流速1.0 BV/h,85％的乙醇洗脱,洗脱体积为3.0 BV 的优化条件下,H PD-1 00对5种蒽醌的动态吸附率为86.3％,洗脱率为85.9％,5种蒽醌总含量增加了2.88倍,由原来的7.13％增加到20.5％,总回收率98.7％,提取物中残留的离子液体[bmim] Br也同时被除去,表明本实验选择的优化条件具有可行性.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)015【总页数】5页(P55-59)【关键词】大黄;蒽醌化合物;离子液体;大孔树脂;分离;纯化【作者】刘婷婷;卢春霞【作者单位】新疆石河子职业技术学院,新疆石河子832000;长江师范学院生命科学与技术学院,重庆408100【正文语种】中文【中图分类】TS201.1大黄为蓼科(Polygonaceae)大黄属(Rheum)多年生草本,可分为掌叶大黄(R. palmatum L)、唐古特大黄(R. palmatum Maxim.ex Balf.)和药用大黄(R. officinale Baill),以根及根状茎入药,其性味苦、寒,具有泻下清热、凉血解毒、活血祛瘀等功效[1]。
现代中药化学研究证明,大黄主要含有蒽醌衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸、花青素类、多糖等化学成分,其中,蒽醌衍生物(大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等)被认为是主要的活性成分,具有抗菌抗病毒[2]、抗氧化[3]、抗炎[4]、保肝[5]、抗肿瘤[6]等药理作用。
HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量作者：卓俊睿
来源：《现代养生·下半月版》 2017年第5期
【摘要】目的：采取HPLC 法测量评定中药材大黄中5 种蒽醌（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的含量。
方法：采用依利特ODS2 C18、柱
(200mm×4.6mm,5μm)，流动相为无水甲醇- 浓度0.1% 磷酸(75:25,V/V），流速为1ml/min，检测波长为255nm，柱温26℃。
结果：芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸的回归方程如下：Y=1.97X-0.35，相关系数R=0.99993;Y=0.98X-0.21，相关系数
R=0.99996;Y=1.26X-0.16，相关系数R=0.99994;Y= 2.35X +0.17，相关系数
R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相关系数R=0.99992;5 种蒽醌的回收率如下：
99.49%,97.37%,99.21%,98.84% 和98.74%。
结论：用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且具有准确性高、重现性好的特点，可以用于推广。
【关键词】HPLC 法；芦荟大黄素；大黄素甲醚；大黄酚；大黄素；大黄酸
目前对大黄的研究已较为深入，然而以HPLC 法对大黄蒽醌含量的测定仍然欠缺研究，因
此开展本研究，希望提供参考。
1 研究材料
大黄样品采用自成都市大黄中药材培植基地所产的掌叶大黄。
实验仪器为Ultimate3000
高效液相色谱仪、赛多利斯BT125D 电子天平及KQ-250D 型超声波清洗器。
主要试剂方面，芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸5 中对照品及磷酸、分析甲醇、色谱甲醇等均来自市场购买，去离子水由研究者自制。
2 研究方法
2.1 色谱条件
255nm 的检测波长；1ml/min 的流速；柱温26℃；色谱柱采用依利特ODS2C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。
2.2 自制溶液对照品
取适量大黄对照品，应用无水甲醇，分别配置5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的对照品溶液，采用浓度20、10、20、20、和20μg/ml 。
2.3 自制供试品
精确称量取用大黄中药材0.500g，放置在25ml 的容量瓶内，分别添加无水甲醇20ml 和
超声波提取35min，待溶液冷却至接近室内温度，加入无水甲醇，定容到刻度，使震荡溶解，
用0.20μm 滤膜过滤。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察
依据前文所述色谱条件，取用对照品溶液，精密吸取2、5、10、20、40μL，并分别进行
进样测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行回归分析，得到5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程。
2.4.2 精密度考察
依据前文所述色谱条件，吸取对照品的混合溶液，5 次连续进样，计算5 种蒽醌成分（芦
荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。
2.4.3 稳定性考察
各吸供试品溶液，间隔2h 进行一次测定，得到供试品溶液中 5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。
2.4.4 重复性考察
取大黄样品精密称取5 份，按照供试品的制备方法，制作溶液用于方法测定，依结果计算
5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的保留时间以及峰面积
下的RSD。
2.4.5 回收率考察
大黄样品已知含量，精密称取0.500g，共取三份，每一份中加入相同含量的对照品，按照
供试品制备方法处理，得出平均回收率及RSD。
2.5 大黄含量测定
按照供试品制备方法，制得大黄样品溶液后进样20μl，在255nm 处，检测样品各成分所
对应峰面积，根据所计算的线性回归方程，得出5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大
黄酚、大黄素和大黄酸）含量。
3 结果
3.1 方法学考察结果
（1）线性关系考察。
计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大
黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程，发现5 种蒽醌成分均呈良好线性关系。
具体结果见
表1。
（2）精密度考察。
计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分精密度良好，RSD 分别是0.55%、
1.25%、1.87%、1.08% 和1.61%；
（3）稳定性考察。
计算得出大黄样品中5种蒽醌成分稳定性良好，在12 个小时内保持稳定。
RSD 分别是1.91%、1.30%、1.42%、1.54%、1.51%（n=7）；（4）重复性考察。
计算得出
大黄样品中5 种蒽醌成分重复性较好，在保留时间上的RSD 分别是0.72%、2.04%、1.09%、
1.74%、1.63%，在峰面积上的RSD 分别是1.44%、1.82%、1.91%、0.74%、1.06%；（5）回收率考察。
计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分回收率分别是99. 49% ,97. 37% ,99. 21% ,98. 84%、98.74%，其RSD 分别是0.41%、1.47%、0.55%、1.32%、0.84%；方法学考察结果说明，用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且准确性高、重现性好。
3.2 含量测定结果
成都产掌叶大黄的5 种蒽醌成分分别如下：芦荟大黄素0.076%；大黄素甲醚0.145%；大
黄酚0.823%；大黄素0.187%；大黄酸0.113%。
4 结论
本研究通过使用HPLC 法，对大黄药材中5 种游离蒽醌含量进行测定，确定了这种方法简单快速、准确性高、重现性好，可用于大黄药材质量评定。
参考文献
[1] 颜永刚, 尹立敏, 王红艳等.HPLC法同时测定大黄炮制品中10 种化学成分的含量[J]. 中国药房,2016,27(27):3839-3842.
[2] 毛春芳, 施忠, 罗琳等.HPLC 法同时测定大黄中芦荟大黄素等11 种成分的量[J]. 中草药,2014,45(16):2400-2403.
作者简介
卓俊睿（1991-），女，贵州省遵义市人。
遵义医药高等专科学校助教。
硕士学位。
专业为药物化学, 主要研究方向为生物催化与手性合成。
