大黄蒽醌类成分含量的测定方法

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。

这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。

本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。

大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。

醇提法是最常用的提取方法之一。

一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。

以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。

（2）加热回流提取1小时。

（3）过滤，滤去残渣。

（4）将过滤液浓缩至干燥。

（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。

大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。

其中，高效液相色谱技术最常用。

根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。

以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。

（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。

大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。

其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。

（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。

（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。

（4）记录在特定波长下的吸光度。

（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。

总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。

通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。

仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。

三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。

其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。

试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。

大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。

已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。

大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。

（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。

（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。

残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。

通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。

首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。

对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。

高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。

通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。

同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。

收稿日期:20042112141大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究魏玉辉1,武新安1,陈　岚1,张承忠2(兰州大学第一医院药剂科,甘肃兰州　730000;21兰州大学药学院,甘肃兰州　730000)摘要:目的　建立大黄蒽醌类成分含量测定的方法。

方法　对三种蒽醌类成分提取方法进行实验对比研究,利用分光光度法进行含量测定。

结果　蒽醌类浓度在01856～251680μg/ml 范围内与吸收度呈良好的线形关系(r =019999),平均回收率为10018%,RSD 为0134%。

结论　改进的方法简便、准确可靠,可用于大黄及其制剂的蒽醌类成分的含量测定。

关键词:光茎大黄;蒽醌类成分;提取方法;分光光度法;含量测定Study on determination methods of anthraquinones component of rhubarbW EI Yu 2hui 1,W U X i n 2an 1,C H EN L an 1,Z H A N G Chen g 2z hong2(11Depart ment of Pharmacy ,First Ho spital of Lanzhou University ,Lanzhou ,730000;21College of Pharmacy ,Lanzho u University ,Lanzhou ,730000,China )【Abstract 】　Objective To establish a determination met hod of ant hraquinones of rhu 2barb 1Methods To cont rast t hree ext ract met hods of ant hraquinones component of rhubarb ,de 2veloped a met hod ,ant hraquinones were determined using UV spect rop hotometry met hod 1R esults　Ant hraqiunones component had a good linearily in t he concent ration range of 01856～251680μg/ml (r =019999)1The average recovery was 10018%wit h RSD of 0134%1Conclusion This met hod is simple ,Accurate and reliable ,and can be used for t he determination of ant hraquinones component of rhubarb 1K ey w ords :　rheum glabricaule G 1;ant hraquinones ;ext ract met hods ;UV spect rop hotomet ry ;content deteimination 大黄为我国传统药材之一,并为我国重要的出口商品。

摘要:目的：通过HPLC法比较大黄不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量。

方法：采用Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相为甲醇-水（70:30，磷酸调至pH值＝3）；柱温：24℃；流速：1.0ml/min；检测波长：437nm。

结果：大黄酸线性范围为0.0132~0.132mg，r＝0.9991，大黄素线性范围为0.0066~0.132mg，r＝0.9999。

结论：大黄的不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量不同，以生大黄中大黄素、大黄酸的含量最多，大黄炭中大黄素的含量最少，酒大黄中大黄酸的含量最少。

关键词:大黄酸大黄素HPLC生大黄熟大黄酒大黄大黄炭大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tenguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎。

2005版药典一部规定大黄饮片为大黄除去杂质，洗净，润透，切厚片或块，晾干；酒大黄为取净大黄块，加酒拌匀，闷透，至锅内，用文火炒至规定的程度时，取出，放凉。

照酒炙法炒干；熟大黄为取净大黄块，照酒炖法或蒸至内外均呈黑色，加酒拌匀，加入液体辅料拌匀，置适宜的容器内，加热蒸透或至规定的程度时，取出，干燥；大黄炭为取净大黄块，照炒炭法炒至表面焦黑色、内部焦褐色。

酒大黄善清上焦血分热毒。

用于目赤咽肿，齿龈肿痛。

熟大黄泻下力缓，泻火解毒。

用于火毒疮疡。

大黄炭凉血化瘀止血。

用于血热有瘀出血症。

大黄中其主要活性成分为大黄蒽醌衍生物如大黄素、大黄酸、大黄酚等。

本文考察了大黄不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量，经测定在不同炮制品中大黄酸、大黄素在生大黄中的含量最多，大黄炭中大黄素的含量最少，酒大黄中大黄酸的含量最少。

实验部分1仪器与材料岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，SPD-10A紫外分析仪，CTO-10AS柱温箱，DGU-12A脱气机。

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。

提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。

在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。

2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。

为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。

柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。

薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。

3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。

常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。

红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。

以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。