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超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定使用艾普拉唑后人血浆中二甲基精氨酸(ADMA)、对称二甲基精氨酸(SDMA)、单甲基精氨酸(NMMA)、瓜氨酸(Cit)和L-精氨酸(L-Arg)的浓度.采用HILIC亲水相互作用色谱和非衍生化的蛋白沉淀法进行分离分析,色谱柱选取Waters Atlantic HILIC柱(2.1 mm×50 mm×3μm),流动相由乙腈(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)-水(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)(85:15,v/V)组成,流速0.25 mL/min.采用多反应离子监测(MRM)模式,以电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测.结果显示,ADMA、SDMA、NMMA、L-Arg和Cit的线性关系良好,相关系数r均大于0.994 0;ADMA、SDMA和NMMA的线性范围为0.1～5 mmol/L,L-Arg和Cit的线性范围为10～250 mmol/L;5种氨基酸的日内、日间精密度均小于15％,准确度在85％～115％之间.该方法快速、简便、灵敏,可为相关疾病的临床诊断提供一种高效的检测手段.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】7页(P446-452)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS);艾普拉唑;蛋白沉淀法;亲水性色谱【作者】田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【作者单位】福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730【正文语种】中文【中图分类】O657.63一氧化氮是人体重要的信使分子，L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮全酶(NOS)的催化下，产生一氧化氮(NO)和瓜氨酸(Cit)[1-2]。
Vo l 26No 2Fe b ru a r y 2010(Se ria lN o 124)研究方法Reasearch M ethod液相色谱-串联质谱法测定人血浆中盐酸度洛西汀的浓度及其药代动力学研究D eter m i nati on concentration of dul oxeti ne hydroch l oride i n hu man plas ma by HPLC M S/M S and study on its phar m acoki netics收稿日期:2008-09-23修回日期:2009-09-01作者简介:赵瑞柯(1983-),男,硕士研究生,主要从事临床药学工作通讯作者:刘家稳,主管药师T e:l (0731)5292092Em ai:l lis ayang @sohu .com赵瑞柯,刘家稳,程 钢,唐 靖,宋 娟,彭文兴(中南大学湘雅二医院临床药学教研室,长沙 410011)ZHAO Rui ke ,LI U Jia w en ,C H E NG Gang ,TANG Jing ,SONG Juan ,PENG W en x i n g(C linical Phar m acy R esearch Laborato ry,The Second X iangyaH os p it a l ,C en tralSout hUn iversit y ,Changsha410011,China)谱-串联质谱联法测定人血浆中度洛西汀(抗抑代动力学。
方法 5名男性与5名女性健康志溶片60m g ,色谱柱为phenom enex C 18,流动相为水相,含0 02%的甲酸)-乙腈=55 45;电喷雾电离源正离子-串联质谱法测定盐酸度洛西算药代动力学参数。
结果 度洛西汀血浆浓度在0 89~内与峰面积积分值线性关系良好( =0 9977)。
方法回收率 27%,萃取回收率在72 81%~89 96%。
LC-M S/M S测定人血浆中阿米替林的含量王贤亲1,吴建章2,李艳霞1,张园1,王学宝1,林丹1,叶发青1*(1.温州医学院分析测试中心,温州325035;2.温州医学院药学院,温州325035)摘要目的:建立检测一种人血浆中阿米替林液相色谱-串联质谱(LC-M S/M S)的方法。
方法:加入地西泮为内标,血浆中的药物用乙醚液-液萃取去蛋白。
采用A g ilent Zorbax SB-C18(211mm@150mm,5L m)柱,流动相为甲醇-011%甲酸溶液(70B30,v/v)。
采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测,多反应监测(m ultiple reacti on m onito ri ng,MRM)方式进行定量分析阿米替林,监测碎片离子峰分别为m/z233,91(阿米替林)和m/z257,222(内标)。
结果:血浆中阿米替林检测方法的线性范围为2108~1040ng#mL-1,最低检测限为0152ng#mL-1,平均萃取回收率在6715%~7515%之间,日内和日间精密度R SD都小于7%。
结论:本方法简单、灵敏,可用于临床毒物分析和药物动力学研究。
关键词:液相色谱-串联质谱;血浆;阿米替林中图分类号:R917文献标识码:A文章编码:0254-1793(2009)11-1846-04LC-M S/M S deter m i nation of a m itri ptyli nei n hu m an plas m aWANG X ian-q i n1,WU Jian-z hang2,LI Y an-x ia1,Z HANG Yua1,WANG Xue-bao1,LI N Dan1,YE Fa-q i n g1*(1.Anal yti cal and Testi ng C enter ofW enzhou M ed i calC ollege,W enzhou325035,C hina;2.Schoo l of Phar m acy ofW enzhou M ed ical College,W enzhou325035,Ch i na)Abst ract Objec tive:To deve l o p an LC-M S/M S m et h od for deter m inati o n of a m itripty li n e i n hu m an plas m a. M et hods:A fter addition of d iazepa m as i n ter nal standard,li q u i d-liquid extraction w as used to produce a protein-free extract by usi n g ehty l ether.Chro m atograph ic separation w as achieved on a Zorbax SB-C18(2.1mm@ 150mm,5L m)column w ith m ethanol-wa ter conta i n i n g0.1%for m ic aci d(70B30,v/v)asm ob ile phase.E lectr os-pray ion izati o n(ESI)source w as applied and operated i n positive i o n m ode,m u ltiple reaction monitori n g(MRM) m ode w as used to quantify a m itripty line usi n g targe t frag m en t i o ns m/z233,91for a m itri p ty li n e and m/z257,222 for the IS.R esults:Ca li b ration p l o ts w ere li n ear over the range o f2108-1040ng#m L-1for a m itriptyline i n p las-m a.L i m it o f detection(LOD)fo r a m itri p ty li n e w as0152ng#m L-1.M ean extracti v e recovery of a m itri p ty li n e fro m plas m a w as i n the range o f6715%-7515%.RSDs of i n tra-day and inter-day prec i s ion w ere less than7%,re-specti v e l y.Conclusi o n:Th ism e t h od is si m ple and sensitive enough to be used in cli n ic tox i c olog ical ana l y sis and phar m acokinetic research for de ter m inati o n of a m itri p ty li n e in hum an plas m a.K ey w ords:LC-M S/M S;hum an p las m a;a m itripty li n e阿米替林,为临床最常用的三环类抗抑郁药,能选择性地抑制中枢突触部位对去甲肾上腺素的再摄取,其抗抑郁作用相似于丙米嗪,可使抑郁症患者情绪提高,对思缓慢、行为迟缓及食欲不振等症状能有所改善。
超高效液相色谱-串联质谱法同时检测人血浆中11种镇静催眠药浓度*安静，董占军，魏欣，白万军，宋浩静【摘要】摘要：目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定人血浆中11种镇静催眠药的浓度。
方法血样采用二氯甲烷：正己烷：乙酸乙酯(5：4：1)进行萃取，Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)色谱柱进行分离，乙腈-0.1%氨溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2 mL·min-1，通过电喷雾离子源(ESI)，多重反应监测(MRM)正离子模式进行检测。
结果11种镇静催眠药在所测质量浓度范围内呈现良好的线性关系，相关系数均>0.99，除右佐匹克隆检测限为200 pg·mL-1，其他物质检测限为10～20 pg·mL-1，11种被分析物的日内、日间RSD 均<15.0%，提取回收率范围为72.3%～108.0%，基质效应范围为0.86～1.12。
结论该方法快速、灵敏、准确，适用于人血浆中11种镇静催眠药浓度的同时检测。
【期刊名称】医药导报【年(卷),期】2016(035)009【总页数】5【关键词】镇静催眠药；色谱，超高效液相；质谱，串联；血药浓度苯二氮类镇静催眠药、唑吡坦、扎来普隆及右佐匹克隆由于较易获得，易发生误服、滥用而导致中毒[1]；另一方面，该类药物起效快，能够引起短期失忆，产生幻觉，一些不法分子也利用其实施犯罪活动。
因此有必要建立快速、灵敏的分析方法，以配合临床的抢救工作和法庭刑事案件侦破。
目前该类药物的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[2-3]、毛细管电泳法[4]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[5-7]、液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法[8-10]等。
HPLC法是应用较多的方法，但其检测灵敏度低，分析速度慢。
毛细管电泳法检测限较低。
GC-MS法具有仪器便宜、数据丰富等优点，但灵敏度低，或操作繁琐。
液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量王健吉林大学药物代谢研究中心（130021）E-mail: wjpsw@摘 要：本文建立了液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）方法测定人血浆中佐米曲普坦的含量。
色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5µm粒径，150×4.6 mm I.D.，美国Agilent公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min。
本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度以及专属性，完全适用于临床应用及药物代谢研究。
关键词：佐米曲普坦；LC/MS/MS1. 引言佐米曲普坦（Zolmitriptan）为选择性5-HT1B/1D受体激动剂，通过对颅部血管扩张和三叉神经系统感觉神经的5-HT1B/1D受体的激动作用，促进颅部血管收缩，抑制炎症后神经肽的释放，临床用于治疗偏头痛[1,2]。
本试验建立了测定人血浆中佐米曲普坦含量的液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）分析方法用于临床应用及药物代谢研究。
2. 试验2.1仪器与药品API 4000型三重四极杆串联质谱仪，配有离子喷雾离子化源以及Analyst 1.3.2 数据处理软件，美国Applied Biosystem公司；Agilent 1100 高效液相色谱系统，包括二元输液泵，自动进样器，切换阀，美国Agilent公司。
佐米曲普坦标准品（纯度>99％）：英国AstraZeneca公司提供；苯海拉明对照品（纯度>99％）：中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，空白人血浆由吉林大学第一医院提供。
2.2血浆样品的分析方法血浆样品的预处理精密取血浆样品0.5 mL置具塞试管中，加入内标溶液（2 ng/mL- 1 -苯海拉明甲醇溶液）100 µL，加入100 µL甲醇-水（50:50，v/v）混合溶液，加入1 mol/L Na2CO3溶液100 µL，混匀；加入3mL正已烷-二氯甲烷-异丙醇（300:150:15，v/v），涡流混合1 min，往复振荡10 min（240次/分），离心5 min（3500 rpm），取上层有机相于另一试管中，40°C 空气流下吹干，残留物加入100 µL流动相溶解，涡流混合，取20 µL进行LC/MS/MS分析。
色谱条件色谱柱：Zorbax Extend-C18柱，5 µm粒径，150×4.6 mm I.D.，美国Agilent 公司；流动相：甲醇-水-甲酸（80:20:1，v/v/v）；流速：0.8 mL/min；柱温：室温；进样量：20 µL质谱条件离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：5000 V；温度：550°C；源内气体1（GS1，N2）压力：65 psi；气体2（GS2，N2）压力：55 psi.；气帘气体（N2）压力：20 psi；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测（MRM）；DP电压：50 V；碰撞气（N2）压力：3 psi；佐米曲普坦和苯海拉明的碰撞诱导解离（CID）电压分别为44 V和25V；用于定量分析的离子反应分别为m/z 288.4→m/z 58.0（佐米曲普坦）和m/z 256.3 →m/z 167.1 （苯海拉明）。
2.3分析方法确证质谱分析将佐米曲普坦、苯海拉明溶于流动相中，按“质谱条件”项操作，相应的二级全扫描质谱图见图1。
方法的专属性分别取6名受试者的混合空白血浆0.5 mL，按“血浆样品的分析方法”项下操作，进样20 µL，得色谱图2A；将一定浓度的佐米曲普坦标准溶液和内标溶液加入空白血浆中，依同法操作，得色谱图2B，佐米曲普坦和内标苯海拉明的保留时间分别为0.63 min和0.80 min；取受试者给药后收集的血浆样品，依同法操作，得色谱图2C。
结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰佐米曲普坦和内标苯海拉明的测定。
标准曲线的制备取空白血浆0.5 mL，加入佐米曲普坦标准系列溶液100 µL，配制成相当于血浆浓度为0.10, 0.20,0.60, 2.00, 6.00, 20.0和40.0 ng/mL的血浆样品，按“血浆样品的分析方法”项下依法操作，制备标准曲线。
以血浆中待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权（W=1/x2）最小二乘法进行回归运算[6]，求得的直线回归方程，即为标准曲线。
每个分析批（每天）建立一条标准曲线（例如图3）。
线性范围根据标准曲线，佐米曲普坦的线性范围为0.10-40.0 ng/mL, 定量下限为0.10 ng/mL。
精密度 按“标准曲线的制备”项下操作, 制备佐米曲普坦低、中、高三个浓度（分别为0.20, 2.00, 32.0 ng/mL）的质量控制（QC）样品，每一浓度进行6样本分析，连续测定三天，根据当日的标准曲线，计算QC样品的测得浓度，根据QC样品结果计算本法的准确度与精密度，结果见表1。
- 2 -- 3 -提取回收率 取空白血浆0.5 mL ，按“血浆样品的分析方法”项下操作，制备低、中、高三个浓度（佐米曲普坦分别为0.20, 2.00, 32.0 ng/mL ）的样品，每一浓度进行3样本分析。
同时另取空白血浆0.5 mL ，按“血浆样品的分析方法”项下操作，向获得的上清液中加入相应浓度的标准溶液和内标溶液各100 µL ，涡流混合，40°C 空气流下吹干。
残留物以流动相溶解，进样分析，获得相应峰面积（三次测定的平均值）。
以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。
高、中、低三个浓度的提取回收率分别为50.5%，47.1%和46.6%。
稳定性考察 血浆样品经处理后，室温下放置12 h 稳定。
结果表明：测定血浆中佐米曲普坦的分析方法符合有关规范要求[7]，可用于药物动力学试验。
2.4未知样品的测定按“血浆样品的分析方法”项下操作，每个分析批（一天内测试的同种样品）制备一条工作曲线，同时制备低、中、高（0.20，2.00和32.0 ng/mL ）三个浓度的质量控制样品，每个浓度的质量控制样品进行双样本分析。
根据每一分析批的工作曲线计算质控样品和未知样品的浓度。
上述质控样品中最多允许两个不同样品的浓度超出理论值的15%（低浓度点为20%），否则此批数据不被接受。
3 结果分析22名健康受试者口服佐米曲普坦5 mg 后平均血药浓度-时间曲线见图4，药代动力学参数如下：血浆中佐米曲普坦的T max 为1.8 ± 0.6 h ； C max 为8.63 ± 3.77 ng/mL ；t 1/2为5.57 ± 2.82 h ；采用梯形法计算，AUC 0-t 为41.27 ± 15.94 ng ⋅h/mL ，AUC 0-∞为43.65 ±17.16 ng ⋅h/mL 。
表1 血浆中佐米曲普坦LC/MS/MS 测定方法的准确度与精密度 浓度 (ng/mL) RSD (%) 加入量平均值日内日间RE (%)0.20 0.20 10.00 13.60 -2.45 2.00 2.07 1.77 13.90 3.27 32.00 32.08 3.77 7.26 2.41- 4 -amu 20004000600080001.0e41.2e4I n t e n s i t y , c p s m/z,1.8e6m/z, amu 2.0e54.0e56.0e58.0e51.0e61.2e61.4e61.6e6I n t e n s i t y , c p s图1 佐米曲普坦和内标苯海拉明[M+H]+的二级全扫描质谱图 （A ） 佐米曲普坦 （B ） 苯海拉明- 5 -0.8Time, min0.20.40.61.0 1.21.4Time, min0%20%40%60%80%100%R e l. I n t . (%)m/z 288→m/z 58 Max. 230.0 cps.0.20.40.60.8 1.0 1.21.40%R e l. I n t . (%)m/z 256 →m/z 167Max. 390.0 cps.A0.8Max. 3.3e4 cps.Time, minMax. 2.3e5 cps.B 0.20.40.61.0 1.2 1.4Time, min0%R e l. I n t . (%)m/z 288→m/z 58 峰I0.63R e l. I n t . (%)0.20.40.60.8 1.0 1.2 1.40%m/z 256 →m/z 167峰IITime, minMax. 4.1e4 cps.Time, minMax. 1.9e5 cps.C 0.20.40.60.8 1.0 1.2 1.40%R e l. I n t . (%)m/z 288→m/z 58 峰I0.630.20.40.60.8 1.0 1.2 1.40%R e l. I n t . (%)m/z 256 →m/z 167峰II0.80图2 LC/MS/MS 测定人血浆中佐米曲普坦及内标苯海拉明的典型MRM 色谱图 （A ） 空白血浆（B ） 空白血浆加入6 ng/mL 佐米曲普坦（峰I ）和2 ng/mL 内标苯海拉明（峰II ） （C ） 人口服给予佐米曲普坦 5 mg/人3 h 后的血浆样品- 6 -1802468101214162022242628303234363840Analyte Conc. A n a l y t e A r e a / I S A r e a图3 测定血浆中佐米曲普坦典型工作曲线（run-03）时间0.03.06.09.012.006121824(h)浓度(n g /m l )图4 22名受试者的平均血药浓度-时间曲线参考文献[1]Caroline M Spencer, et al. Zolmitriptan. A review of its use in Migraine. Drugs, 1999, 58（2）：347-374[2]傅伟鹏，廖联安. 偏头痛治疗新药-佐米曲普坦. 中国新药杂志，1999，8（9）：597-599[3]卫生部药典委员会. 中华人民共和国药典. 二部. 2000年版. 北京：化学工业出版社, 2000. 附录193-197[4]Karthick V, et al. Determination of antimigraine compounds rizatriptan, zolmitriptan, naratriptan andsumatriptan in human serum by liquid chromatography/electrospray tandem mass spectrometry. Rapid commun mass spectrum,2000,14（3）：168-172[5]Clement EM, et al. Simultaneous Measurement of zolmitriptan and its major metabolitesN-desmethylzolmitriptan and zolmitriptan N-oxide in human plasma by high performance liquid chromatography with coulometric detection. J chromatogr B Analyt technol biomed life sci,2002,766（2）：339-343[6]钟大放. 以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题. 药物分析杂志, 1996, 16 （5）：343-346[7]Sah VP. et al. Analytical methods validation: bioavailability bioequivalence, and pharmacokinetic studies. JPharm. Sci. ,1992, 81（3）：309[8]梁文权主编. 生物药剂学与药物动力学. 北京：人民卫生出版社, 2000：318Determination of Zolmitriptan in Human Plasma by Liquid Chromatographic Tandem Mass SpectromitryJian WangResearch Center for Drug Metabolism, Jilin University, Changchun 130023, P.R .ChinaEmail: wjpws@AbstractAn analytical method based on liquid chromatography with tandem mass spectrometry detection was developed for the determination of zolmitriptan in human plasma. Column: Zorbax Extend-C18, 5 µm，150×4.6 mm I.D.，Agilent; mobile phase was methanol-water-formic acid (80:20:1，v/v/v) at a flow rate of 0.8 mL/min. This method is accurate, precise, sensitive and specific to be used in clinic applications and pharmacokinetics studies.Keywords: zolmitriptan; LC/MS/MS作者简介王健： 1980年2月生，2003年进入吉林大学药物代谢研究中心攻读硕士学位，主要从事药物分析工作。
