液相常见问题汇总
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高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象:泵无法正常启动或启动后无法正常停止。
解决方法:检查泵头是否有污物堵塞,清除污物;检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好,如有松动,重新插紧。
2. 故障现象:泵的流量不稳定或无法调节。
解决方法:检查泵头是否有污物堵塞,清除污物;检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好,如有松动,重新插紧;检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏,如损坏,更换密封圈。
二、流动相跑空1. 故障现象:流动相液位下降至最低液位以下,导致无法正常进样。
解决方法:检查流动相的储液瓶是否已空,如已空,重新更换储液瓶;检查流动相的流速设置是否正确,如不正确,重新设置流速;检查管路是否有泄漏点,如存在泄漏点,修复泄漏点。
2. 故障现象:流动相液位迅速下降,导致无法正常进样。
解决方法:检查废液瓶是否已满,如已满,倾倒废液;检查管路是否有堵塞或弯折,如有,更换管路或调整管路布局。
三、峰面积重复性差1. 故障现象:同一色谱条件下,每次运行同一色谱图时,峰面积重复性差。
解决方法:检查进样阀的切换次数是否过多,如过多,减少切换次数;检查进样针的清洗是否彻底,如不彻底,加强清洗;检查样品前处理的稳定性是否可靠,如不可靠,重新进行样品前处理。
2. 故障现象:不同色谱条件下,每次运行同一色谱图时,峰面积重复性差。
解决方法:检查流动相的组成是否恒定,如不恒定,重新配制流动相;检查色谱柱的稳定性是否可靠,如不可靠,更换色谱柱;检查检测器的波长是否准确,如不准确,重新调整波长。
四、峰丢失1. 故障现象:在色谱图中看不到预期的峰。
解决方法:检查进样针是否堵塞或断裂,如堵塞或断裂,更换进样针;检查进样阀的切换次数是否过多,如过多,减少切换次数;检查样品前处理是否可靠,如不可靠,重新进行样品前处理。
2. 故障现象:在流动相中添加了某种物质后,出现了预期之外的峰。
解决方法:检查流动相中添加的物质是否稳定,如不稳定,重新配制流动相;检查检测器的灵敏度是否足够高,如不够高,调整灵敏度;检查色谱柱的类型是否正确,如不正确,更换色谱柱。
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常,清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中,操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障,并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。
调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
为什么HPL C柱柱压过高柱压过高是H PLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。
这时,如果柱压仍不下降,再检查;4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高,请与厂商联系。
一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的R heod yne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HP LC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
液相色谱分析常见故障及解决方法液相色谱维修保养液相色谱作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确方式操作的话,就容易导致一些棘手的小问题。
其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
常见问题及解决方法一、柱压问题柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在345kPa 以内或在50PSI之间(在使用梯度洗脱时,柱压平稳缓慢的变化是允许的)。
压力过高、过低都属于柱压问题。
1压力过高这是液相在使用中常见的问题,指的是压力突然升高,1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时,我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;(2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。
处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI以下,过滤白头正常,在检查;(3).把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。
处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。
这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。
问题无法解决可考虑更换色谱柱。
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、流动相流量不合适。
调整流速即可。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查(在安装了保护预柱的情况下);2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,若压力仍高则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。
这时,如果柱压仍不下降,再检查;4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高,请与厂商联系。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
3、流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合HPLC 仪器问题1、我的HPLC泵压明显的偏高,请问可能的原因?答:流速设定过高;流动相或进样中有机械杂质,造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞;流动相粘度过大;柱温过低;缓冲盐结晶;压力传感器故障。
液相色谱仪常见故障分析及解决要点液相色谱仪作为一种常用的分析仪器,经常会遇到一些故障。
以下是液相色谱仪常见故障的分析及解决要点:1.噪声增加:可能原因:进样器泄漏、柱床固定不良、柱床老化、流体系统不稳定等。
解决方法:检查进样器和柱床的连接,更换柱床,检查流体系统并重新校准。
2.峰形畸变:可能原因:柱床老化、进样器问题、流体系统堵塞等。
解决方法:更换柱床、清洗进样器、检查流体系统并进行维护。
3.基线漂移:可能原因:溶剂质量不纯、流体系统不稳定、进样器问题等。
解决方法:更换纯净溶剂、检查流体系统并重新校准、清洗进样器。
4.压力异常:可能原因:流体系统堵塞、泵的柱床老化、柱床压力限制等。
解决方法:清洗流体系统、更换柱床、检查柱床的压力限制。
5.进样器问题:可能原因:进样器泄漏、进样器柱床老化、进样器阀门不灵活等。
解决方法:检查进样器的连接,更换进样器柱床,润滑进样器阀门。
6.柱温控制问题:可能原因:柱温控制器故障、柱床老化、温度传感器问题等。
解决方法:更换柱温控制器、更换柱床、校准温度传感器。
7.柱床老化:可能原因:使用时间过长、样品残留、溶剂残留等。
解决方法:更换柱床、进行柱床维护、清洗柱床。
8.溶剂选择错误:可能原因:溶剂质量不纯、溶剂选择不适合分析物等。
解决方法:更换纯净溶剂、重新选择合适的溶剂。
9.柱床堵塞:可能原因:样品残留、溶剂残留、柱床老化等。
解决方法:清洗柱床、更换柱床、进行柱床维护。
10.柱床压力限制:可能原因:柱床老化、流量设置不合理等。
解决方法:更换柱床、重新设置流量。
在解决液相色谱仪常见故障时,需要注意以下要点:确定故障现象,并记录下来,有助于分析和解决问题。
了解仪器的正常工作原理,对比故障现象,定位故障的可能原因。
逐一排除故障可能原因,一步一步进行检查和测试,从最简单的可能原因开始排除。
如果无法解决故障,及时向仪器供应商或相关专家咨询,并提供详细的故障描述和测试结果。
定期进行仪器的维护和保养,包括清洗柱床、更换柱床、校准流量和温度等。
液相常见问题及解决方法问题1:液相困扰人群广泛且珍贵液相是化学实验中常见的一种分析技术,它广泛应用于各个领域。
然而,在进行液相分析时,常常出现一些问题,影响了实验结果的准确性和稳定性。
以下是液相常见问题及解决方法的一些示例:问题1.1:样品制备不足导致分析结果不准确•问题描述:样品制备不足是液相实验中常见的问题之一。
样品制备不足可能导致分析结果偏低或波动大,影响实验结果的可靠性。
•解决方法:1.确保样品制备过程中的各个步骤严格按照标准操作进行,避免操作失误。
2.采用适当的提取方法和提取溶剂,确保样品中目标成分的充分提取。
3.样品制备前要进行充分的前处理,如过滤和稀释等,以避免可能影响分析的干扰物质。
问题1.2:柱寿命短导致分离效果下降•问题描述:在液相分析中,柱寿命是一个重要的指标。
柱寿命短可能导致分离效果下降,分析结果不准确。
•解决方法:1.使用高质量的液相色谱柱,选择具有较长寿命的柱材料和填料,以提高柱寿命。
2.避免使用过高的流速和压力,以减少对柱的损伤。
3.注意样品的准备和预处理,以减少对柱的污染。
问题1.3:溶剂残留影响结果准确性•问题描述:溶剂残留是液相实验中常见的问题之一。
溶剂残留可能会干扰分析结果,影响结果的准确性。
•解决方法:1.在制备溶剂和洗涤溶剂时,选择纯度高、溶剂残留低的溶剂。
2.采用适当的溶剂饱和度和流速,以避免溶剂残留的问题。
3.在分析前,进行合适的样品预处理,如蒸发浓缩和固相萃取等,以减少溶剂残留的影响。
问题2:常见的仪器故障及解决方法液相实验中,仪器故障是常见的问题之一。
仪器故障可能导致实验无法进行或结果不可靠。
以下是常见的仪器故障及解决方法的示例:问题2.1:泵压不稳定导致结果波动大•问题描述:泵压不稳定是液相实验中常见的问题之一。
泵压不稳定可能导致分析结果波动大,影响分析结果的可靠性。
•解决方法:1.检查液相泵的密封件是否正常,是否需要更换。
2.确保供液系统中的气泡被完全排除,以避免泵压波动。
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1.样品量不足,解决办法为增加样品量2.样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3.样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4.检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5.检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6.检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7.检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8.记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9.流动相流量不合适。
调整流速即可。
10.检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。
1.拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;2.把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;3.将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。
这时,如果柱压仍不下降,再检查;4.更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高,请与厂商联系。
一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?1.筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
2.存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
液相常见6种问题色谱峰解决方法(有图),你都见过几个?食品实验室服务对于每一个身经百柱的分离纯化研究员来说,液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门,科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映,有些问题可以通过改变设备参数得到解决,而有些问题则必须通过修改操作程序来解决,毕竟,正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。
小编在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总,大家一起来看一下吧。
1.拖尾峰1. 筛板阻塞:柱子两头的过滤筛板如果堵塞,样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟,使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。
需要通过反冲色谱柱,或者更换筛板。
2. 色谱柱塌陷:是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失,不能对物质形成保留,使得物质不在固定相上保留而随流动相流出,但是又还有一点柱效,因此形成拖尾。
需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。
3. 有污染:即样品不在同一起跑线起跑,从后面开始跑得到达终点稍晚,表现出拖尾。
更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上,以冲洗柱子。
4. 流动相PH值选择错误:如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡,离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。
调节pH 值可抑制分子解离,改善拖尾,对于碱性化合物,相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
2.前沿峰1. 样品过载:被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。
降低样品含量。
2. 样品溶剂选择不恰当:当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用已腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。
选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。
3. 色谱柱损坏:色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。
更换色谱柱。
4. 在大峰前有小峰出现,假象前沿峰,即大峰前包埋了没有分开的小峰。
调整流动相洗脱梯度。
3.基线漂移1. 柱温波动:即使是很小的温度变化都会引起基线的波动,通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
液相常见问题汇总 Document number:WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT常见色谱分析问题解疑一、产生前沿和拖尾的原因一般有哪些(1)拖尾:1.干扰峰,优化条件分离2色谱柱塌陷,更换色谱柱3流动相pH 不合适,调节pH值4管路没有接好,存在较大的死体积,可以重新接一下(2)前沿:1溶剂选择不合适,选择合适的溶剂2样品过载,降低进样量3柱温太低,升高柱温4色谱柱损坏,更换色谱柱5干扰峰,优化色谱条件分离可能的问题:1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因:柱过载,柱头塌陷,溶剂选择不对产生峰拖尾的原因:存在杂质未分开,柱污染,柱子选择不对。
拖尾峰与柱子有关,可能是过载,稀释样品再做,或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开,可以优化分析方法,或更换柱子试一试;也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因;再有也会根样品本身性质有关,基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质,要根据具体情况而定。
柱子可能污染了吧,溶剂也可能有,或柱效下降。
图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适,可以相应调整流动相的极性,或者适当加入酸来调整,可以得到较好的改善。
一般来讲,酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。
柱前沿是可能因为柱超载,拖尾是可能因为样品被污染,选择合适的流动相,调节好PH能够改善这以情况。
二、怎样避免拖尾和前沿,有何措施选择合适的色谱条件和色谱柱,就可以避免峰拖尾和前沿在处理样品时选择合适的流动相最为重要,所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等相关问题,摸条件时找到较好的流动相,是避免拖尾峰出现的最好方法。
避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量,每种色谱方法有一定的线性范围,超过这一范围不对称峰则会出现。
要看是由于什么原因造成的:分析物本身的性质:这类问题首先要选择合适的色谱柱,另样品的前处理非常重要,部分样品在分析过程中分解,那肯定是拖尾的。
色谱柱问题:主要由于色谱柱柱效下降等引起,维护色谱柱或者更换流动相:流动相未起到抑制拖尾或者前沿的作用,应添加适当缓冲剂如三乙胺、醋酸等。
三、一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测,对此类物质防止拖尾有什么好的建议吗对于生物碱类,应该选用封端了的色谱柱,减少硅羟基的作用,还有就是调节流动相的PH值来避免拖尾对于生物碱类成分的分离关键在于加入的酸的量,因为你得让成分被色谱柱吸附后,能够很好的溶解在流动相中,即解吸附下来才行啊,所以注意你的酸的加入量吧!还有就是选择合适的色谱柱,最重要喽!分离碱性物质,易产生拖尾,一般我们都是在流动相中加点三乙胺(即碱性物质).生物碱类液相色谱一般都会在流动相里加入少量碱(二乙胺或氨水等),使流动相的PH偏碱性。
不过用普通的C18柱来分析可能进不了几针柱效就不行了,考虑使用宽PH范围的C18柱。
关于生物碱薄层问题,可以对于薄层板的话可以用10%NaOH+CMC-Na溶液进行铺板,还可以适当调节展开剂PH 值来防治生物碱拖尾。
应该加三乙胺吧,及三氟乙酸等调节PH值,使用氨基的色谱柱啊,不管怎么说首先考虑的是色谱柱的选择。
四、用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在如何解决关于漂移问题:①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定②流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
③流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合五、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么①筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载,减少进样量。
六、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足,解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。
调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡。
解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适。
调整流速即可。
⑩检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
七、做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在如何解决①泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效,更换比例阀即可;③泵密封垫损坏,更换密封垫即可;④溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;⑤系统检漏,找出漏点,密封即可;⑥梯度洗脱,这时压力波动是正常的。
八、最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留时间不能重现,为什么这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。
尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。
正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。
因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。
在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
如分离情况可以,系统稳定,达到系统适用性要求,就不必保留时间的重现。
九、购买的HPLC柱验收测试时柱压过高,请问为什么柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。
①拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;②把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;③将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。
这时,如果柱压仍不下降,再检查;只用于使用过的柱子。
④更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高,请与厂商联系。
一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
十、色谱双峰产生的可能及判断和处理HPLC分析中,在色谱柱正常,样品灵敏度足够,分析方法合适,色谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度),峰型应对称而尖锐。
但是,在对样品了解程度不够,方法不妥,样品处理方法及进样方式不合理下,会出现各种意想不到的问题,而对色谱峰难以作出合理的解释,尤其对于新手更是如此。
下面根据本人几年工作的体会,提出一些看法,向同仁指教。
色谱双峰指的是明是一种物质,但在色谱图中出现双峰,而表明含二种物质。
我将这种情况分为四种原因。
1、色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现(出峰越快,双峰的可能性会减少),尤其采用单一纯物质时,可以肯定色谱柱出问题-柱头受损或柱头固定相变脏或流失。
如果进样量少,原来色谱柱正常,色谱峰的形状多为一大峰带一小峰,不一定拖尾,这一般应是柱头受堵,将色谱柱反过来接,用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂,将堵在柱头的残留物冲掉,再反过来,一般情况下就行了。
当然不反冲,正冲有时也会正常的。
如果峰拖尾,双峰强弱相差不大,柱头固定相变脏或流失可能性更大,这是可以将进样那头拧开,将微孔滤片超声,柱头刮去一部分填料,重新填上新填料拧紧,不过这种活,需要一定技术,同时不能老干那种事,否则用不了几次,色谱柱就会应柱效很低而报废。
2、溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然,一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容,而这确是双峰产生的一个很重要的原因。
目前HPLC分析多为反相色谱,流动相多为甲醇、乙腈、水,加各种添加剂以改善分离性能。
样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。
最佳的溶解方法是用流动相溶解,但是很多情况是不一致的。
当用溶剂极性强度大的试剂,如纯甲醇、纯乙腈,纯乙醇,而分析体系中以水为主,样品进样量大,如定量管为20ul,此条件下完全可以肯定,单一的纯物质出双峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一样),且拖尾,保留时间会提前(相对进样量少而言),将进样量减少一半以上,峰型将变为正常。
这是样品的溶剂与流动相极性相差太大,而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。
上面提到进样量造成双峰的一个原因,另一个原因是,进样量不一定大,但绝对量很大,色谱图上的双峰紧靠在一起,基本上齐高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色谱柱问题)。
将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,色谱柱过载造成的。
3、样品的特性有些样品由于其化学结构的特点,存在互变异构现象,而这种互变异构体无法分开,而是以一个动态平衡存在。
在色谱分析时,在一个特定的条件下,一种物质将出现双峰,双峰靠的很近,基本齐高,不拖尾,条件稍一变化,尤其pH,双峰现象将消失,如红霉素等。
有的样品紫外的色谱图上看不到双峰,但在LC-MS下,用质谱检测器,其质谱的总离子流图上较明显,例如我分析过的农药啶虫眯(吡虫清)。
4、参数记录的参数一般都内定的,不必修改,但GC和HPLC的参数是不完全一致的,例如C-R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC 为2ms,HPLC为5ms,如果记录间隔时间缩短,一个峰将变为二个峰或更多。
系统堵塞问:我的系统压力比它应该的压力高很多,是什么原因答:首先,让我们检查一下你的前提,你怎么知道压力应该是多少问:之前同样的柱子,同样的流动相,同样温度压力只有2000PSI。
现在是两部了。
我把泵压的上限设为4000PSI,泵停了。
答:很好你有以前的参考数据,我们可以从这里开始排查故障。
压力变大,原因很多。
首先,流动相的粘度可能不对。
其次,系统某个地方可能堵了。
后者比较常见,但是在我们拆系统前,先检查下其他的可能。
你确定你的流动相是对的如果用的是自动混合,你溶液有没有放错例如把甲醇和乙腈弄混了(由于两者与水混合液的粘度差异很容易导致压力不同)。
如果使用了柱温箱加热,确认一下它有没有工作。
温度每变10℃粘度变化25%。
所以如果你本来要开60℃,但是柱温箱没有工作,这样压力就会翻倍了。
问:OK,这个很容易检查,其它还有哪些要检查的答:我经常问这个问题,压力变大是在长期分析中慢慢出现还是突然出现的。
如果是突然出现的,可能是有些错误发生了。
让我们来检查一些东西,从简单的开始:柱子填料的颗粒大小对不对柱子压力与颗粒大小的平方成比例变化。