液相常见问题

液相的常见问题:

一、在实际工作中,我们经常能遇到基线的漂移的情况。关于基线漂移(或上下波动)的原因,可能有以下几种:

1、柱子的平衡时间长。一般来说,新柱子的平衡时间要短。有些老柱子的平衡就是时间长。当然,柱子的平衡就是时间也与它使用的流动相有关系。如果使用了离子对试剂,那么比普通的简单的流动相(例如二元流动相:甲醇:水,乙腈:水,,,,,,)

2、系统存在漏点。如果系统存在漏点,那么出现基线向下漂移。需要检漏

3、PUMP头有气泡。PUMP头的气泡会导致基线的漂移与波动。如果怀疑就是PUPM头有气泡导致基线不稳,只需要瞧仪器的压力就是否稳定就好。

4、流动相脱气。如果流动相没有脱气,基线肯定就是不稳的

5、柱后气泡。在柱子后有气泡产生,导致检测器中的读数有波动。

6、PUMP密封不好。密封不好,也会导致PUMP头的气泡(好象不可能)与漏夜,基线当然不稳定了。

7、系统的环境。仪器的使用,如温度的变化,流速的变化,,,,,,,以及梯度洗脱,当然基线漂移

8、单向阀睹塞或污染。单向阀的睹塞与污染,能造成流量不准确,压力波动。故也会波动,漂移

9、检测器污染或有杂质

10、如果就是紫外或二极管阵列检测器(PDA),排除以上原因还出现基线噪音大,就有可能就是氘灯的能量不足了

二、主峰后面有很多杂质峰可能原因

1,仪器问题:最有可能的就就是系统污染,尤其就是管路,比如,入口单向阀或各接口处等有盐残留;

2,色谱柱问题:这个好办,换新的色谱柱,大部分能解决问题;

3,试剂试药问题:所用试剂、试药达不到色谱级别所需,或者不同批号不同厂家的东西都有可能影响,最直接影响的就就是物质的纯度影响流动相的吸收;

4,梯度洗脱程序:梯度洗脱程序设置不合理,比如在某个时间段急剧变化;

5,其她:如配制方法不同,超声方法不同等。

如今,瞧似很简单的问题,在经过很长一段时间的摸索后发现,上述原因其实都就

是比较客观的,如果以上4点都解决不了,可以考虑以下原因:仪器本身功能上的区别导致。比如安捷伦低压梯度与高压梯度做的同样的东西,能重复出来,而且梯度峰都很小,甚至没有,而用岛津的低压与高压梯度仪器,所表现的就不一样了,具体原因,因只具有经验所得,所以目前只能作为讨论的一个话题,仅供各位参考。

三、冲洗液相管路

1、如果系统污染可以考虑用异丙醇冲洗,把过滤后的异丙醇当流动相,以0、5ml/min冲洗30-60分钟,一般杂质就可清除。如果不行可以考虑12%的磷酸冲洗,它可以有效清洗不锈钢与其它材料的管路,清除有机杂质及污垢,比用有机溶剂更有效,也比用稀硝酸有效(用5-15%硝酸清洗虽然有效,但就是清洗后系统很难平衡,特别低紫外区域)。磷酸清洗方法如下:先用甲醇或者乙腈彻底清洗系统,然后就是纯水,然后就是12%磷酸冲洗60分钟左右,冲洗过程中可以将进样器一并冲洗,然后换用水,甲醇或乙腈冲洗,这样就基本可以了。

2、用5%硝酸洗脱管路1h后未知峰去无踪,效果不错,推荐大家有必要试试如果不就是污染严重,还就是别用硝酸洗脱管路,因硝酸对不锈钢管路损害较大四、梯度洗脱

做梯度洗脱有时候就是会这个样子的,基线会漂移的满厉害的。要用足够的时间来平衡,如果有在线脱气装置会好一点。特别就是走梯度洗脱时后面往往有一些杂峰而有机相在不同的比例下吸光度也不一样,由于UV检测的就是相对吸收度,所以就造成了基线漂移。而且,如果柱子没有平衡好,这种漂移也不一样。如果走上两个小时后,这种漂移相对就稳定。在梯度分析时,流动相的选择与波长的选择就是很重要的;在梯度洗脱时,一般波长不应再变,否则再高的水平也做不好,尤其在低波长时。

分析波长较高时,流动相相对容易些,如在300nm以上,影响相对较小。但就是,在大多数的情况下,流动相首选低紫外吸收的,如乙腈与水,少用甲醇与四氢呋喃,无机盐以磷酸盐等低紫外吸收的为好,少用醋酸盐、柠檬酸等有机盐,酸用磷酸与硫酸少用醋酸,同时梯度变化尽可能小与缓与,虽然分析时间将增加。另外,A,B(C)相都采用混合流动相,以减少流动相变化对紫外的影响。还有一点,所用的试剂要求为色谱纯,国内有的厂家所标的色谱纯连化学纯的都不如,有一些特定的添加试剂,如离子对试剂,只能使用进口的色谱纯级。注意以上几点,您的梯度色谱图必将

大有改观。当然您的仪器也要好的了。

建议您使用一种方法:扣除本底法。此种方法由色谱工作站来完成,具体方法就是:1、不进样,严格按梯度方法空跑出基线,得出不进样的梯度基线。2、进样,做梯度洗脱,得到谱图。3、在工作站上用谱图相减的功能处理,用谱图减去梯度基线,即可得到比较漂亮的谱图,而且不影响定量计算！

五、样品池污染

1、如果就是流通池脏,可以把柱子去下来,用50－50(v/V)的异丙醇、异丙醇纯水、来冲洗流通池。如果还不行,用1N的硝酸冲流通池,再用纯水冲洗。

http://www、dxy、cn/bbs/thread/6935925?keywords=样品池污染#6935925

2、液相管路脏、样品池脏、样品池能量比参比池低很多,处理方法:不接柱子,接上二通管,用8%硝酸冲洗2小时,纯水冲洗2小时,用甲醇过度,接着用异丙醇冲洗2小时,最后过度成甲醇。结果:基线平稳,峰行明显改善,样品池能量恢复

六、异丙醇的作用:

在安捷伦液相中会使用的10％异丙醇,它的作用就是柱塞清洗附件的清洗液,它主要就是当流动相中含有盐类时,为了防止盐类在柱塞产生结晶,磨损宝石杆与柱塞密封圈,加入异丙醇10％异丙醇一方面有防止长菌的作用,另一方面有增加清洗液的润湿性,减少泵内气泡产生。在泵运行的时候一定不能干。异丙醇就是一个很特殊的角色,就是维护液相的专业溶剂,它的“露面”至少有以下几处:

1、10%的异丙醇就是柱塞清洗附件的清洗液。

2、更换密封圈后用异丙醇磨合。

3、洗针用溶剂。

4、峰拖尾时,可尝试用异丙醇冲柱子。

5、泵的压缩性补偿值,就是以异丙醇为基准:标准的100,而常用的流动相:甲醇120,乙腈115,而水则偏差较大,就是46。

6、正相与反相系统转换时的中间过度溶剂。

另外在其她厂家的液相中使用30％甲醇,作用都就是与异丙醇的一样,用于洗泵与洗针。

七、检测限与定量限