高效液相色谱常见故障及解决方案

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。

对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。

其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。

压力过高、过低都属于柱压问题。

2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时，我们应该分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。

如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。

如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。

这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。

高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。

2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。

二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。

解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。

2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。

解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。

三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。

四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。

解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。

解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

3、高效液相色谱仪常见故障处理LC-10AT高效液相色谱仪是日本岛津公司1996年的产品，检测器为可变波长紫外检测器，色谱柱为岛津公司的ODS-C18，大连依利特的ODS-C18。

八年的日常工作中遇到了几种故障，如故障1经咨询岛津公司的工程师后，得以解决；故障2、故障5是频繁碰到的问题等，特作总结如下：故障1 流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purge键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。

原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。

处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge 键，清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。

打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min ，纯水冲洗过滤器1小时左右。

即可将过滤器清洗干净。

关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。

故障2柱压高原因（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；（2）样品污染沉积。

处理对于第一种情况先用40～50 ℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30 分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

故障3既无压力指示，又无液体流过。

原因（1）泵密封垫圈磨损；（2）大量气泡进入泵体。

液相色谱仪常见故障分析及解决要点液相色谱仪作为一种常用的分析仪器，经常会遇到一些故障。

以下是液相色谱仪常见故障的分析及解决要点：1.噪声增加：可能原因：进样器泄漏、柱床固定不良、柱床老化、流体系统不稳定等。

解决方法：检查进样器和柱床的连接，更换柱床，检查流体系统并重新校准。

2.峰形畸变：可能原因：柱床老化、进样器问题、流体系统堵塞等。

解决方法：更换柱床、清洗进样器、检查流体系统并进行维护。

3.基线漂移：可能原因：溶剂质量不纯、流体系统不稳定、进样器问题等。

解决方法：更换纯净溶剂、检查流体系统并重新校准、清洗进样器。

4.压力异常：可能原因：流体系统堵塞、泵的柱床老化、柱床压力限制等。

解决方法：清洗流体系统、更换柱床、检查柱床的压力限制。

5.进样器问题：可能原因：进样器泄漏、进样器柱床老化、进样器阀门不灵活等。

解决方法：检查进样器的连接，更换进样器柱床，润滑进样器阀门。

6.柱温控制问题：可能原因：柱温控制器故障、柱床老化、温度传感器问题等。

解决方法：更换柱温控制器、更换柱床、校准温度传感器。

7.柱床老化：可能原因：使用时间过长、样品残留、溶剂残留等。

解决方法：更换柱床、进行柱床维护、清洗柱床。

8.溶剂选择错误：可能原因：溶剂质量不纯、溶剂选择不适合分析物等。

解决方法：更换纯净溶剂、重新选择合适的溶剂。

9.柱床堵塞：可能原因：样品残留、溶剂残留、柱床老化等。

解决方法：清洗柱床、更换柱床、进行柱床维护。

10.柱床压力限制：可能原因：柱床老化、流量设置不合理等。

解决方法：更换柱床、重新设置流量。

在解决液相色谱仪常见故障时，需要注意以下要点：确定故障现象，并记录下来，有助于分析和解决问题。

了解仪器的正常工作原理，对比故障现象，定位故障的可能原因。

逐一排除故障可能原因，一步一步进行检查和测试，从最简单的可能原因开始排除。

如果无法解决故障，及时向仪器供应商或相关专家咨询，并提供详细的故障描述和测试结果。

定期进行仪器的维护和保养，包括清洗柱床、更换柱床、校准流量和温度等。

高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法 (申请加分)1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。

待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。

2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。

3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。

4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。

5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。

高低流速交替冲洗。

6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。

7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。

如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。

溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。

2. 对各组分都要有适当的吸收。

一般是不可能做到的。

所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。

3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。

254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。

对饱和基团也有弱的吸收。

而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。

是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。

（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。

如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。

因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。

高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。

待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。

2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。

3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。

4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。

5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。

高低流速交替冲洗。

6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。

7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。

如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。

溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。

2. 对各组分都要有适当的吸收。

一般是不可能做到的。

所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。

3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。

254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。

对饱和基团也有弱的吸收。

而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。

是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。

（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。

如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。

因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。

高效液相色谱使用中常见问题及对策
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分
析技术。

在使用HPLC的过程中，可能会遇到一些常见问题，以下是一些可能的问题及对策：
1. 峰形不对称或分离不良：可能是由于柱问题引起的。

可以尝试更换柱，确保柱的性能良好，
并尽量避免超出柱的最大推荐压力。

2. 峰形峭度低：这可能意味着分离不充分。

可以尝试调整流动相的组成、pH值或流速来改善
分离。

3. 噪音较大：可能是由于进样器或检测器的问题引起的。

可以检查进样器和检测器的状态，并
确保它们正常运行。

4. 色谱柱寿命较短：这可能是由于样品中的杂质或试剂导致的。

可以尝试优化样品的准备方法，如前处理或过滤样品，以减少对柱的损害。

5. 流动相配制错误：这可能导致峰错位或分离不良。

可以仔细检查流动相的配制方法和溶剂的
纯度，确保配制正确。

6. 峰定量不准确：可能是由于进样量不准确或方法参数设置不合适引起的。

可以检查进样量的
准确性，并根据实际情况调整仪器参数。

7. 泵压过高：可能是由于管路堵塞或柱封堵引起的。

可以检查管路是否通畅，并根据需要更换
柱或清洗柱。

8. 柱渗漏：可能是由于柱端部密封不良或柱老化引起的。

可以检查柱端部的密封情况，并确保
柱处于良好状态。

针对以上问题，及时检查、调整和维护HPLC设备，并根据具体情况进行修复或更换，可以提
高HPLC分析的效果和结果的准确性。

高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。

②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。

（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。

）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。

1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。

目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。

高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法●高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。

对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

●常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。

其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在345kPa 以内或在50PSI（针对Waters高效液相色谱仪）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。

压力过高、过低都属于柱压问题。

1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时，我们应该分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。

如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。

如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。

这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。