植物类黄酮检测试剂盒(比色法)

蔬菜水果中黄酮和黄酮醇含量检测检测蔬菜和水果中黄酮类化合物的含量。

方法采用反相高效液相色谱方法，选用C18色谱柱，以甲醇/0.1%磷酸水溶液（v/v，3/2）作为流动相进行洗脱，柱温30℃，流速1.0mL/min，在339nm波长下进行检测。

结果槲皮素分布最为广泛，为主要的黄酮类化合物；蔬菜和水果中槲皮素、山奈酚、芹菜素、异鼠李黄素和毛地黄黄酮的含量范围分别为0～10.65mg/100g、0～11.67mg/100g、0～13.93mg/100g、0～10.44mg/100g和0～5.72mg/100g。

结论不同蔬菜和水果中黄酮类化合物的组成和含量存在差异。

夏季蔬菜中槲皮素、山奈酚、异鼠李黄素、毛地黄黄酮、芹菜素含量最高的种类分别是紫生菜、小葱、紫色甘蓝、紫生菜、旱芹叶。

夏季水果中槲皮素、山奈酚、异鼠李黄素、毛地黄黄酮、芹菜素含量最高的种类分别是油桃、油桃、李子、油桃、圣女果（红色）。

黄酮类化合物（flavonoids），又称类黄酮，是指具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，是多酚类化合物中最大的一个亚类，广泛存在于蔬菜和水果中。

其基本骨架具有C6-C3-C6的特点，即由2个芳香环A和B，通过中央三碳链相互连结而成的一系列化合物（图1）。

按其结构可分为黄酮、黄酮醇、黄烷酮、黄烷酮醇、异黄酮、双黄酮、花青素、查耳酮及其苷等[1]，自然界中最常见的是黄酮芹菜素（apigenin）、毛地黄黄酮（luteolin）和黄酮醇槲皮素（quercetin）、山奈酚（kaempferol）、异鼠李黄素（isorhamntin）。

研究发现黄酮类化合物具有多种生物学作用和药理学特性，如抗氧化、抗突变、抗衰老、抗肿瘤、抗菌等生物学作用[2]。

因此，黄酮类化合物对健康的影响已引起人们广泛的关注，成为营养学及药理学研究的热点。

尽管大多数的研究均已经证实了黄酮类化合物具有多种生物学作用，但目前的观点普遍认为黄酮类化合物对人体健康促进作用的发挥主要依赖于它们的摄入量和生物利用度。

四川植物类黄酮测检测试剂盒介绍以下是四川植物类黄酮测检测试剂盒介绍：（1）常规染色液：苏木素伊红（HE）染色液、苏木素伊红混合染色液（一步法）、Harris苏木素、Gill苏木素、Delafield苏木素、Carazzi 苏木素、Core苏木素、伊红染色液（进口水溶）；（2）结蹄组织和肌纤维染色：网状纤维染色液、Masson三色染色液、Pollak三色染色液、天狼星红染色液、Van Gieson染色液、弹力纤维染色液（Gomori醛品红法）、Russell改良Movat五色套染染色液、肌纤维染色液；（3）微生物染色：吉姆萨染色液、瑞氏-吉姆萨复合染色液、抗酸染色液、革兰氏染色液、标准鲁哥氏染色液（Lugol's碘液,1%）、Lugol's 碘液（5%,无菌）、鞭毛染色液、布氏杆菌染色液、幽门螺旋杆菌染色液、麻风杆菌染色液、乙型肝炎病毒染色液、病毒包涵体染色液（亚甲蓝伊红法）、石碳酸复红染色液、改良苯酚品红染色液、螺旋体染色液、异染颗粒染色液、乳酸酚棉蓝染色液、乳酚油、甘油-孔雀绿染色液、甘油-亚甲蓝染色液、印度墨汁、吕氏碱性美蓝染色液、亚甲基蓝染色液；（4）病理沉着物和色素染色：普鲁士蓝染色液、Masson-Fontana 黑色素染色液、脂褐素染色液、钙盐染色液、尿酸盐染色液、茜素红S染色液；（5）碳水化合物染色：糖原PAS染色液、AB-PAS染色液、黏液卡红染色液、黏液HID-AB染色液、Alcian阿利新蓝染色液（pH2.5）、黏蛋白染色液、淀粉样物质染色液、纤维素染色液；（6）神经组织染色：Luxol Fast Blue髓鞘染色液、改良Bielschowsky 神经染色液、尼氏染色液（焦油紫法）、核仁组成区嗜银蛋白染色液（AgNOR Stain）；（7）脂类和核酸类染色：油红O染色液、苏丹黑B染色液、甲基绿-派络宁染色液；（8）酶类染色：碱性磷酸酶染色液、酸性磷酸酶染色液、乙酰胆碱酯酶染色液、α-乙酸萘酚酯酶染色液（α-NAE法）、葡萄糖-6-磷酸酶染色液、ATPase染色液（钙钴法）、琥珀酸脱氢酶染色液、乳酸脱氢酶染色液（四唑盐法）、过氧化物酶染色液；（9）骨类染色：改良番红O-固绿软骨染色液、Goldner三色染色液；（10）植物染色：醋酸洋红染色液、花粉活力染色液（TTC法）、GUS染色液、亚历山大染色液；（11）细胞染色：巴氏染色液、迪夫染色液、台盼蓝染色液、中性红染色液、网织红细胞染色液、詹纳斯绿B染色液、线粒体染色液、甲苯胺蓝染色液、红细胞/白细胞/血小板/精子计数稀释液、精子活体染色液、精子形态学染色液、DAPI染色液、Heinz小体染色液、基底膜六胺银染色液、碱性蛋白染色液；（12）染色其他：硫堇染色液、脱氧胆酸钠溶液、溶液（1%）、酸性乙醇分化液（1%）等；（13）指示剂：刚果红指示剂、溴酚蓝指示剂、酚酞指示剂、绿-甲基红指示剂等。

植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1330规格：50管/24样产品内容：提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备实验用品及仪器天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤：一、类黄酮提取将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。

10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。

二、测定操作表对照管测定管样本待测液（μL）200200试剂一（μL）5050混匀，25℃静置5min试剂二（μL）50混匀，25℃静置5min试剂三（μL）40040060%乙醇（μL）350350。

混匀，25℃静置15min，对照管调零，1mL玻璃比色皿，测定A502三、类黄酮含量计算公式标准曲线：y=6.2096x+0.0008，R2=0.9996类黄酮含量（mg/g）=（A502-0.0008）÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)=2.013×A502÷WV样总：加入提取液体积，2.5mL；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；W：样品质量，g注意事项：1、吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。

2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。

黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。

黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。

3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。

- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。

3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。

2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。

3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。

4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。

5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。

3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。

2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。

3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。

3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。

2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。

3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。

4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。

4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。

5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。

通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。

本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。

黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。

因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。

中药总黄酮的含量测定方法
中药总黄酮的含量测定方法常用的有以下几种：
1. 酸碱比色法：先将中药样品提取，然后加入酸性试剂，使黄酮化合物转化为黄色络合物，再通过比色法测定黄色染色的强度，从而计算出黄酮的含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：中药样品经过适当溶剂提取后，利用高效液相色谱仪对黄酮进行分离和检测，通过峰面积或峰高与标准品进行比较计算黄酮的含量。

3. 紫外分光光度法：根据黄酮化合物在紫外可见光区域的吸收特性，在一定波长范围内测定样品的吸光度，通过比较吸光度与标准曲线计算黄酮的含量。

4. 荧光法：将黄酮溶液与适当溶剂混合后，在特定波长下激发，并测定荧光强度，通过标准曲线计算黄酮的含量。

以上方法可根据实际研究需求和条件选择适合的方案进行测定。

值得注意的是，不同的中药样品可能有不同的成分和浓度，因此在具体测定过程中需根据样品特点进行方法优化和验证。

植物中黄酮化合物的提取与测定一、实验目的：学习植物中黄酮化合物的提取的一般方法；学习植物中黄酮化合物含量测定的方法，以及紫外分光光度计的使用方法。

二、实验原理：黄酮类化合物的提取主要是根据被提取物的性质及伴存的杂质来选择适合的提取溶剂，苷类和极性较大的苷元，一般用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂(如甲醇－水：1∶1)进行提取。

大多数苷元宜用极性较小的溶剂如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取。

但乙醇和甲醇是最常用的黄酮类化合物的提取溶剂。

银杏叶与桔子皮中的黄酮来化合物大部分属于苷类，故此次试验选用乙醇作为溶剂。

三、实验仪器：紫外分光光度计、电子天平、超声波提取机、漏斗、滤纸、三角瓶、50ml移液管、容量瓶、移液枪、烧杯等。

四、所配试剂：实验试剂：橘子皮、银杏叶、95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠。

配制试剂：30%乙醇：准确移取16ml 95%乙醇放置于50ml容量瓶中并定容至刻线。

5%NaNO2溶液：准确称取5g NaNO2放置于烧杯中溶解，移至100ml容量瓶中并定容至刻线。

10% Al(NO3)3溶液：准确称取10g Al(NO3)3放置于烧杯中溶解，移至100ml容量瓶中并定容至刻线。

1mol/L NaOH溶液：准确称取4gNaOH放置于烧杯中溶解，移至100ml容量瓶中并定容至刻线。

五、实验步骤：1、准确称取橘子皮、银杏叶各1克，分别放置于三角瓶中，并分别加95%乙醇溶液50ml，塞上棉塞，放置于超声波提取机中，在45℃时提取2h。

2、配置空白对照：准确吸取30%乙醇5ml，在吸取5% NaNO2溶液0.3ml，放置6min；再加10% Al(NO3)3溶液0.3ml，放置6min，最后加1mol/LNaOH溶液4ml，放置15min。

备用。

3、溶液用漏斗过滤，取滤液备用。

4、.黄酮化合物的鉴定：吸取5ml的滤液，加入少量镁粉，再滴加2-3滴浓盐酸，摇匀，放置2min，溶液颜色呈橙色，即说明该溶液中含有黄酮化合物。

黄酮含量测定的方法黄酮是一类具有丰富生物活性的化合物，广泛存在于植物中。

黄酮化合物在医药、保健品、食品等领域有着重要的应用价值。

因此，黄酮含量的测定方法成为研究者们关注的焦点。

目前，常用的黄酮含量测定方法主要有色谱法、光谱法、色度法和电化学法等。

1. 色谱法：色谱法是目前应用最广泛的黄酮测定方法之一，包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。

（1）HPLC法：该方法利用高效液相色谱仪，以色谱柱为分离介质，通过调节流动相的组成和流速，完成黄酮化合物的分离和检测。

此外，还可以采用紫外检测器（UV）或荧光检测器（FL）对黄酮进行定量分析。

（2）GC法：该方法适用于挥发性和具有一定蒸汽压的黄酮化合物的分析。

通过进样、分离柱和检测器的配合，实现黄酮的分离和检测。

常用的检测器有火焰离子化检测器（FID）、氮磷检测器（NPD）等。

2. 光谱法：光谱法是测定黄酮含量的快速方法之一，包括紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）、荧光光谱法和红外光谱法等。

（1）UV-Vis：该方法利用黄酮化合物在紫外-可见波段对特定波长光的吸收性能进行测定。

测定前可以进行适当的前处理，如提取、纯化等。

（2）荧光光谱法：该方法基于黄酮化合物的固有荧光特性，通过检测黄酮在激发光作用下发出的荧光信号强度，完成黄酮的定量分析。

（3）红外光谱法：该方法基于黄酮分子中的特定基团（如羟基、酚羟基等）对红外光的吸收特性进行测定。

测定中可以采用透射光谱法或者反射光谱法。

3. 色度法：色度法是根据黄酮化合物于酸性或碱性条件下与金属离子或其他有色试剂形成络合物，并通过比色法测定络合物的光密度来确定黄酮含量的方法。

常见的色度法包括铝盐试剂法、铁盐试剂法等。

4. 电化学法：电化学法是指利用黄酮化合物的电化学性质进行测定，包括循环伏安法（CV）、方波伏安法（SWV）等。

这些方法利用某些黄酮化合物的氧化还原反应，在电化学电极上形成电流信号，并通过电流的大小和形状进行定量分析。

黄酮含量测定一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

植物类黄酮-3’,5’-羟化酶（F3 ’ ,5 ’H ）试剂盒（ELISA）使用说明书⚫本试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物类黄酮-3’,5’-羟化酶（F3 ’ ,5 ’H ）的含量。

⚫有效期：6个月⚫保存条件：2-8℃⚫本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被植物类黄酮-3’,5’-羟化酶（F3 ’ ,5 ’H ）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的植物类黄酮-3’,5’-羟化酶（F3 ’ ,5 ’H ）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。