血液及骨髓液标本细菌学检验

1目的规范血液及骨髓标本细菌学标准超作规程，确保检验结果准确可靠2适用范围血液及骨髓3标本3.1标本类型血液及骨髓3.2标本采集3.2.3 采血量以无菌方法从患者肘静脉或股动脉采血。

采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血10-20mL，儿童为3-5mL.血液抽出后立即以无菌操作注入血培养瓶，充分混匀后送检。

3.2.4 骨髓标本用骨髓穿刺针从髂前采集1-2mL，立即以无菌操作注入血培养瓶，由于骨髓标本量少可选择小儿需氧及厌氧瓶。

3.3标本拒收3.4 标本保存采集标本后立即送检，不能及时送检的可室温放置，切勿放冰箱。

冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。

4试剂、仪器4.1革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、沙保罗平板及相关生化试剂等。

4.2恒星BC-60血液细菌培养仪、恒星HX-21细菌鉴定药敏分析仪，成人血培养瓶，厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、恒星细菌鉴定药敏分析试剂板。

4.3接种针、接种环、红外灭菌器、显微镜、电热恒温箱、CO2恒温培养箱、生物安全柜等。

4.4试剂有效期和使用参照试剂说明书。

5细菌鉴定及药敏质控参见《微生物组内质量的控制程序》。

6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号登记。

门诊病人登记联系方式6.1自动化培养2培养箱培养18-24h。

若涂片为酵母样真菌时转接沙保罗培养基。

从琼脂平板挑去菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶实验。

根据初步分出的菌属选不同的鉴定及药敏卡片上机进行细菌鉴定和药敏试验。

7操作流程8.2 阴性结果报告血培养72h未见细菌生长，应通知临床医生，以便作相应处理，但培养瓶要继续培养至第5日，方可发出阴性报告。

如发现细菌生长，可补发报告。

8.3对已发出的报告进行销号，并做好菌名或无菌报告日期登记。

8.4传染病（伤寒沙门菌）报院感科及医务科。

8.5传染病菌株保存（伤寒沙门菌）交疾病控制中心复核9注意事项9.1抽血后无需更换针头即可注入血瓶9.2抽血前即应贴好标签，标签不可掩盖培养瓶自身条形码。

临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。

（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。

2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。

按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。

2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。

2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。

3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。

（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。

2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。

3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。

4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。

（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。

2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。

二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。

（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。

准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。

2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。

为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。

（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。

血液标本的细菌学检验1.1 采血部位与方法：实验室应按照CLSI的有关文件制定用不同采血管采集血液标本的规范(如：H3-静脉穿刺血液标本采集程序，H4-外周血液标本采集装置和程序，H11-动脉血液标本采集程序，H21-凝血检验血液标本的采集、运输和处理及各种抗凝方法的性能特点)。

采血部位通常为肘静脉，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。

疑为细菌性心内膜炎时，以在肘动脉或股动脉处采血为宜。

疑为细菌性骨髓炎或伤寒时，在病灶或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓1～2 mL注入培养瓶内。

要事先规定好是何种血液标本，是动脉血、静脉血还是毛细血管血；如果需要抗凝血，应选择何种抗凝剂。

还应考虑到样品是否应该维持在真空状态(例如钙离子的检测)。

分离血清或血浆的真空采血管和硅化注射器能干扰某些测试，甚至可能导致错误的结果[1]。

血液采集后应尽快分离红细胞和其他细胞碎片。

当采样条件偏离标准状态时，实验室工作人员应考虑其对检验结果的影响，并从已报道的文献中寻找解决方法。

1.2 采血量：一般要求血液量与培养基量之比应为1：5～1：10。

采血量每人每份1瓶，成人每瓶8～10mL，儿童每瓶l～5 mL。

骨髓采血量每瓶1～2mL。

1.3 采血时间及采集份数：采集血液标本应尽量在使用抗菌药物之前进行，于24h内采集2～3份血液标本(抽取1次血做多个培养应视为1份)，最好分别于不同部位采集(如左、右肘静脉，颈静脉)。

对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒战、发热后1h进行。

不宜在发热高峰时采血，因为在高热时血液中可能已没有细菌[2]。

特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则：①可疑细菌性心内膜炎患者，在1～2 h 内采集3份血液标本，如果24h后阴性，再采集2份。

②不明原因发热的患者，先采集2～3份血液标本，24～36h后在体温升高之前再采血2份或以上。

临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。

不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。

2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。

尿液样本要进行离心去除悬浊物等。

3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。

通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。

培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。

4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。

然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。

根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。

最终确定细菌的种类和特征。

5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。

药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。

6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。

最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。

总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。

这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。

临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。

《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。

因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。

1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。

病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。

对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。

2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。

若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。

3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。

另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。

4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。

如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。

【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。

当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。

细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。

一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。

穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。

2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。

伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。

3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。

血培养检测规范化操作（世上最全基本操作流程)2016—08—22来源:南方检验医学网阅读： 1291次【字号：大中小】导读:一、血培养检测采血指征: 对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征： 1．发热(38℃）或低温(36℃)。

2．寒战. 3．白细胞增多（1010 9/L，特别有核左移未成熟的或带状的白细胞一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养,患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征：1．发热（≥38℃）或低温（≤36℃）。

2．寒战。

3．白细胞增多（>10×10 9/L，特别有“核左移"未成熟的或带状的白细胞增多.4．粒细胞减少（成熟的多核白细胞〈1×10 9/L）。

5．血小板减少。

6．皮肤粘膜出血。

7．昏迷.8．多器官衰竭。

或同时具备上述几种体征时应采血培养。

在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养.肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症的患儿(特别是2岁以下的幼儿）一般多见于门诊，常伴有明显发热(≥38.5℃)和白细胞增多（≥20×109/L）.老年菌血症患者，可能不发热或不低热,如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染性心内膜炎的重要指征.血培养检测皮肤消毒程序：血培养为防止皮肤寄生菌污染,可使用消毒剂（碘酊或碘伏）对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地减低皮肤污染.感染性心内膜炎，特别是心脏瓣膜修复术的感染，可能由皮肤寄生的微生物引起(例如:表皮葡萄球菌或棒杆菌属）.因此,在采集过程中血培养的污染一定要减小至最低程度。

用做培养的血液均不应该在静脉或动脉的导管中抽取，除非静脉穿刺无法得到血液或用来评价与导管感染相关性指标。

如果抽取了导管血，也应同时在其他部位穿刺获取非导管内静脉血液进行血培养。

血液及骨髓标本的细菌学检验一、标本采集（一）操作方法1．将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好静脉穿刺点，以皮点为中心用2．5 ％～3 ％碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。

消毒范围不得过小。

2．以无菌手续由静脉取血5 ml ，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。

（二）注意事项1．血液标本应在病人发热1 ～2 天内或发热高峰采集培养为宜，此时阳性率较高。

2．培养基与血液的比例为10∶1 。

3．培养一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，培养对营养要求较高的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。

4．采血和接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌。

5．磺胺和抗生素可影响细菌检出的结果。

故在采集标本时应力争在抗菌药物治疗之前。

如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100 ml 培养基内加对氨苯甲酸5 mg ，以防止磺胺类药物对细菌的抑制作用。

如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。

若病人已用其他抗生素治疗时，可用硫酸镁肉汤增菌。

6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。

二、检验程序血液标本的细菌学检验程序见下图。

三、检验方法及报告方式（一）一般细菌的检验1．标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内孵育，每天取出一次观察有无细菌生长，应特别注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变色等现象，并记录之。

如有细菌生长，肉汤可呈现各种不同的生长现象，若发生混浊，大多可疑为革兰阴性杆菌；若均匀混浊有绿色荧光，则可疑为绿脓杆菌；上面澄清，下面有沉淀，可疑为链球菌；若见自下而上的溶血现象，可疑为溶血性链球菌；若呈现肉冻样凝固现象，疑为葡萄球菌；若表面有灰白菌膜，疑为枯草杆菌或类白喉杆菌。

2．当疑有细菌生长时，应以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰染色镜检。

一旦见有细菌生长，并能排除污染，应及时转种于血平板或其他培养基进行药物敏感试验或分离培养。

实验十、血液标本的细菌学检验【器材】发已增菌血液标本1套/桌（1#、2#、3#、4#），发血琼脂平板1个/人【分离培养】（仅做有氧培养）标本→分区划线血平板，35℃18—24h观察结果。

【形态学检查】（每人做）（1#尿标本）涂片，革兰染色镜检。

【鉴定】1.观察菌落形态：2.涂片、革兰染色镜检：3.生化试验1）G+C→触酶：①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C2）G-b→氧化酶①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定结合凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定。

【实验结果】（1#尿标本）1.观察菌落形态：在血平板上完全透明的溶血环（β溶血）2.直接镜检，G+葡萄状球菌葡萄状球菌3.生化试验1）触酶试验（+）2）血浆凝固酶试验（+）鉴定结果：1#血液标本直接涂片革兰染色观察：G+球菌，单个或呈葡萄状排列；再经过血平板分离培养，观察菌落特征，革兰染色，生化鉴定（触酶+、血浆凝固酶+）鉴定1#血液标本中的细菌为金黄色葡萄球菌。

【实验讨论】1.血液标本的采集：①采血时间和次数：血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养，为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。

②血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。

采血量为成人一次5ml～10ml，儿童为3-5ml。

抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检。

③采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。

④根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。

2.血液标本采集注意事项：血液标本的细菌学检验，一般不用抗凝剂(因为氟化钠、EDTA、枸橼酸钠可对细菌不利，肝素目前尚未报导有影响)近年来认为在培养中加入0.03-0.05%聚茴香脑磺酸钠有抑制血清中的杀菌物质作用，效果较好。

血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围血液及骨髓。

3.标本3.1标本类型血液及骨髓。

3.2 标本采集3.2.1 采血时间抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。

3.2.2 采血频率对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位采集2-3套（每套包括一瓶需氧瓶，一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶），对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采血；婴幼儿病人，推荐同时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。

3.2.3 采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5-10ml，婴幼儿为1-2ml。

3.2.4 骨髓标本用骨髓穿刺针从髂骨采集。

3.3 标本拒收标准3.3.1 血培养瓶破裂或有明显污染。

3.3.2 血培养瓶标识与化验申请单不符。

3.3.3 用过期的培养瓶采集标本、采血量不足等。

3.3.4 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。

3.3.5 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放入冰箱。

冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。

4.试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦糠凯平板、相关生化试剂等。

4.2 BACT/ALERT 3D 或BACTEC9000全自动血培养系统、鉴定系统。

成人需氧培养瓶、厌氧培养瓶、儿童培养瓶、革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GBS）、真菌鉴定卡（TBC）、药敏纸片、TTB板条等。

4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、co2培养箱等。

4.4 试剂的有效期和使用参照试剂说明书。

5. 细菌鉴定和药敏质控。

参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

门诊病人要同时登记住址，联系电话等病人信息。

6.1 自动化培养将血培养瓶置全自动血培养仪中。

当标本有菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医师报告，同时转种血琼脂平板，麦糠凯平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35°C、5%CO2培养箱培养18-24小时。

单位及实验室名称项目汉源县人民医院检验科血液及骨髓标本的细菌学检验操作编号：LAB/SOP/HY/微-001日期：2010年5月3日版本：第一版，第0次修订第1页，共3页一、【标本采集】1.血液采集：（1）以无菌方法采血，采出的血液标本立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使之充分混匀，以防止凝固。

（2）采血量：增菌液与血液标本比例为5-10：1，成人一次采血8-10ml，婴幼儿1-5ml。

2.骨髓标本：（1）采集部位及时间：一般用骨髓穿刺针从髂骨采集骨髓标本，最好在用药前，发热患者要在发热初期或高热期采集标本。

（2）标本采集要严格无菌操作，增菌与运送同血液标本。

二、【检验方法】1.培养：标本接种于肉汤增菌液后，立即置35℃孵箱内孵育，每天观察培养液内有无混浊、沉淀菌膜、色素颜色变化等。

肉汤出现变化怀疑菌种混浊革兰氏阴性杆菌均匀混浊，有绿色荧光绿脓杆菌上面澄清，下面沉淀链球菌自下而上溶血现象溶血性链球菌肉栋样凝固葡萄球菌表面有灰白菌膜枯草杆菌或类白喉杆菌2.检验：对有细菌生长迹象的血培养瓶应及时做如下检验（1）以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰氏染色镜检，一旦有细菌生长可向临床作初步报告。

（2）同时转种于血平板或其它培养基进行分离培养。

（3）根据菌落特征及菌体染色镜检形态，进行常规生化反应，同时做药敏试验。

三、【检验程序】血液、骨髓↓增菌培养（需氧及厌氧）↓————————————————————————————↓↓↓涂片染色镜检分离培养直接药敏试验∣↓（35℃ 4-6小时）初步报告↓↓↓需氧培养及CO2环境培养厌氧培养（血平板等分离培养基）（血琼脂平板和巧克力平板）∣——————————菌落观察—————————∣↓↓↓涂片、革兰氏染色镜检纯培养↓———————————————————↓↓血清学检查→确定报告←生化反应试验、药敏试验四、【结果报告】1.根据增菌液培养结果直接直接涂片、染色、镜检确属致病菌时可向临床做初步报告，最后根据细菌鉴定结果及药敏试验及时向临床报告。