160410脑脊液标本的微生物学检验

脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围脑脊液培养。

3.标本3.1标本类型脑脊液。

3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。

脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。

因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。

3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。

3.3.2 标本未用无菌试管留取。

3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。

4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。

．4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。

5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。

根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。

6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。

必要时可作生化反应进一步鉴定。

分离培养6.2．6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。

聊一聊脑脊液检验的方法及临床意义脑脊液属于一种细胞外液，主要是由人体的各脑室脉络从通过血液透析作用下而生成的，会充满人体的脑室系统以及脑和脊髓的蛛网膜下腔，最终一同进行血液循环，脑脊液的形成始终维护着动态平衡。

正常人的脑脊液量为120-180毫升，伴随着生物化学、免疫学检验技术的飞速发展，特别是分子生物学技术的提升，脑脊液检验开拓出更多的研究领域，为临床研究提供了有效的诊断指标。

今天就与大家聊一聊脑脊液检验方法及其临床意义，希望大家可以仔细阅读文章。

1.标本采集脑脊液检验需要进行腰椎穿刺采集标本，必要时行小脑延髓池和脑室穿刺。

由于脑脊液标本采集有一定的创伤性，临床应用中还必须严格掌握其适应证和禁忌证。

腰椎穿刺成功后应立即测定脑脊液压力。

将标本留取于3个无菌试管中立刻进行送检，化验通常不会超过一小时，容器须始终保持着无菌清洁的状态，容积也不应太大。

进行穿刺采集时，应从根本上避免把血液带入进标本中，为了不对细胞计数造成影响，当遇到高蛋白标本时，可以在其中添加少量的抗凝剂。

2.理学检验标本采集颜色：①无色。

正常的脑脊液颜色为无色透明。

除正常以外，梅毒性神经炎、慢性结核性脑膜炎、脑炎以及脊髓灰白质炎也会呈现出无色。

②红色。

红色脑脊液是由于其中混入血红细胞所造成的，并且因为出血量以及出血时间存在差异，可呈现出多种颜色，比如红色、淡红色、红褐色。

将脑脊液离心，上层溶液呈现出黄色，隐血试验阳性多数为蛛网膜下腔陈旧性出血。

上层液体无色，红细胞会沉入管底，一般为损伤病变所导致的新鲜出血。

③黄色。

黄色也被叫做黄辩证，主要显现在蛛网膜腔陈旧性出血、化脓性脑炎、椎管梗塞、流行性脑炎、重症结核性脑膜炎等。

④绿色。

绿色一般多见于绿脓杆菌、甲型链球菌性脑膜炎以及肺炎双球菌。

（5）白色：白色多见于白细胞增加所致的化脓性脑膜炎。

（6）褐色或黑色：常见于脑膜炎黑色素瘤。

透明度：正常的脑脊液呈现出透明澄清的状态，结合浑浊程度，可以将其分为清晰、微混以及浑浊。

脑脊液常规检测标准操作规程1.【检验目的】为了使脑脊液常规检验方法标准化，特制定本规程。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：新鲜脑脊液3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型：可用EDTA盐抗凝3.4实验试剂：苯酚 (饱和石碳酸溶液)3.5标本的采集和保存3.5.1腰椎穿刺成功后立即测定脑脊液压力，然后留取脑脊液标本于3个无菌试管，每个试管1-2ml。

第一管做病原微生物学检验，第二管做化学和免疫学检验，第三管做理学和细胞学检验。

标本采集后立即送检，并于1h内检验完毕。

因放置过久，可造成细胞破坏、葡萄糖等物质分解、细菌溶解等，影响检验结果。

脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液。

若混入血液应注明，进行细胞计数时应做校正。

3.5.2收到标本后应立即检验。

久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖含量降低；病原菌破坏或溶解。

3.5.3细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。

4.【测定原理】脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，即潘氏（Pandy）试验。

5.【操作步骤】5.1一般性状.：主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明（白细胞200/μl或红细胞400/μl可致轻微混浊）白雾状混浊，微黄混浊、绿黄混浊、灰白混浊等。

颜色①红色如标本为血性、为区别珠网膜下隙出血或穿刺损伤，应注意以下情况。

将血性脑脊液使管离心沉淀（1500r/min），如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为珠网膜下隙出血，且出血时间已超过4h，约90%患者为12h内发生出血。

如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。

红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可以见到。

脑脊液标本细菌学检验1. 检验目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2. 适用范围脑脊液培养3. 标本采集与运送3.1 标本采集：由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml,盛于无菌容器中送检。

3.2 标本运送3.2.1 采集标本后立即送到细菌室，不能及时送检可置室温或保温，放置时间不应超过2h。

切勿放冰箱，否则影响检出率。

3.2.2 非细菌室工作时间，标本应送急诊化验室进行标本保温。

4. 检验步骤4.1 涂片检查：外观浑浊或脓样脑脊液直接涂片。

无色、透明的脑脊液，应3000rpm/min离心10-15min后取沉淀物涂片。

涂片后革兰染色、墨汁染色、抗酸染色。

镜检阳性应立即以电话的方式将镜检结果告知临床医生，并登记到危急值登记本。

4.2 接种：在生物安全柜中用一次性无菌接种环挑取浑浊脑脊液或离心沉淀的沉淀物按照分区划线的方法接种血平板和巧克力平板。

血平板和巧克力平板需要预先置于室温平衡30min。

4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。

4.4 培养结果观察4.4.1 培养24h无菌生长需继续培养24h,如仍然无菌生长，则报告“无菌生长”。

4.4.2 培养出细菌，挑取单菌落革兰染色镜检，将镜检结果以电话方式告知临床医生，并登记到危急值登记本。

4.4.2.1 血平板上菌落呈浅灰色、不溶血，或者菌落呈粘稠状，菌落附近呈灰绿色。

在巧克力平板上的菌落光滑整齐、圆形凸起、半透明、露滴状菌落。

革兰染色镜检为肾形或咖啡豆装的革兰阴性双球菌，应怀疑为脑膜炎奈瑟菌，常见于脓性脑脊液。

4.4.2.2 血平板上呈现草绿色溶血、灰色、圆形、略扁的菌落，同时革兰染色为革兰阳性链球菌，疑为肺炎链球菌。

4.4.2.3 镜下可见革兰阴性小杆菌，多形性，巧克力平板可见较多的透明、湿润革兰阴性杆菌，做卫星试验。

血平板卫星+，MH卫星-，报告“流感嗜血杆菌”。

4.4.2.4 新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。

脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围脑脊液培养。

3.标本3.1标本类型脑脊液。

3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。

脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。

因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。

3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。

3.3.2 标本未用无菌试管留取。

3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。

4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。

5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。

根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。

6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。

必要时可作生化反应进一步鉴定。

6.2分离培养6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。

脑脊液有形成分检查显微镜检查法1.实验原理在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查。

2.标本采集：2.1标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。

2.2标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。

每管收集1-2毫升。

2.3遇高蛋白标本时可采用EDTAK2抗凝。

3.标本储存：立即送检。

4.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：污染，久置标本。

6.实验材料：细胞计数板；红细胞稀释液；瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。

7.实验仪器：7.1仪器名称：OLYMPUS显微镜7.2仪器厂家：OLYMPUS7.3仪器型号：OLYMPUSCH308.操作步骤8.1细胞总数8.1.1对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每µl的细胞数。

再换算成每升脑脊液中的细胞数。

如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每µl脑脊液中细胞总数。

如用升表示，则再乘以106。

也可用生理盐水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数。

8.1.2浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20µl，加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每µl脑脊液的细胞总数。

8.2白细胞数8.2.1非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。

8.2.2血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数。

为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。

每µl脑脊液内白细胞校正数每µl脑脊液内红细胞数×每µl脑脊液内白细胞数=每µl脑脊液内白细胞未校正数－每µl血液内红细胞数例示：血液内红细胞4000000/µl；脑脊液内红细胞20000/µl；血液内白细胞10000/µl；脑脊液内白细胞60/µl20000×10000则：60－=60-50=104000000即该患者脑脊液内白细胞之校正数为10。

脑脊液生化检查项目-回复脑脊液生化检查项目是一种常见的神经系统疾病诊断方法。

脑脊液生化指标可以为医生提供有关大脑和脊髓健康问题的重要信息。

本文将详细介绍脑脊液生化检查项目的步骤和意义。

脑脊液是一种无色透明的液体，由脑室和脊髓腔产生。

它包含有关中枢神经系统的生物化学信息，并反映了神经系统的正常功能状态。

因此，脑脊液的分析可以在神经系统疾病的诊断和治疗中起到关键作用。

脑脊液生化检查通常分为以下几个步骤：1. 腰椎穿刺：脑脊液样本通常通过腰椎穿刺获取。

这是一种小型手术过程，在局部麻醉下将一根细长的针插入脊髓腔，以收集脑脊液样本。

该过程通常在医院或临床实验室中完成。

2. 样本收集和处理：一旦脑脊液样本被收集，它将被送往实验室进行分析。

在送往实验室之前，脑脊液样本通常会被分为几个小瓶并进行标签。

3. 检查项目：脑脊液生化检查通常包括对多种生化指标的分析。

以下是一些常见的脑脊液生化检查项目：- 蛋白质含量：脑脊液中的蛋白质含量是一个重要指标，可以帮助医生诊断神经系统疾病。

正常情况下，脑脊液中的蛋白质含量应该很低。

异常的蛋白质含量可能暗示有炎症、出血或肿瘤。

- 糖含量：脑脊液中的糖含量是体内能量代谢的重要指标之一。

低血糖可能暗示有代谢紊乱或脑源性糖尿病。

- 氯离子含量：脑脊液中的氯离子含量正常情况下与血液中氯离子含量相似。

异常的氯离子含量可能提示有颅内感染、水电解质紊乱或先天性异常等疾病。

- 其他指标：除上述指标外，脑脊液生化检查还可以测量和分析其他指标，如乳酸酸碱平衡、尿素氮、肾功能指标、酶活性等。

这些指标的异常值可能暗示着其他疾病或损伤。

4. 结果解读与诊断：完成脑脊液生化检查后，结果将由专业医生进行解读。

医生将综合脑脊液生化指标的结果和患者的临床症状，以做出最终的诊断。

脑脊液生化检查的主要意义是帮助医生确定神经系统疾病的类型和严重程度，并指导相应的治疗方案。

例如，蛋白质含量的增加通常与炎症性疾病（如脑膜炎）或出血有关，这可能需要针对病因的治疗。

脑脊液检验一、脑脊液常规检验(一)外观检验脑脊液颜色检验1．英文或缩写：Color of Cerebrospinal-Fluid，CSF。

2．标本采集：临床医师取脑脊液2-3 ml，立即送检。

3．正常参考值：正常脑脊液为无色。

4．临床意义：红色：排除穿刺性损伤如标本为血性，为蛛网膜下隙(下腔)出血，应注意区别：(1)将血性脑脊液离心(1500r/min)沉淀后，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血时间已超过4 小时。

如上层液体澄清无色，红细胞均沉淀管底，多为穿刺性损伤或病变所致的新鲜出血。

(2)红细胞皱缩：多见于陈旧性出血，但不能排除穿刺性损伤引起的出血。

黄色：见欲陈旧性出血，也可见于脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留和黄疸患者。

米泔样：由于白(脓)细胞增多的缘故，见于各种化脓性细菌感染引起的脑膜炎。

绿色：见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌感染引起的脑膜炎。

褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。

5．注意事项：标本送检必须及时，收到标本应立即检验，久置可使细胞破坏、葡萄糖分解、病原菌破坏或溶解。

为了避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA 盐抗凝。

脑脊液透明度检验1．英文或缩写：Diaphaneity of CSF。

2．标本采集：临床医师取脑脊液2-3 ml，立即送检。

3．正常参考值：正常脑脊液应清晰透明。

4．临床意义：化脓性脑膜炎时，可呈乳白色浑浊；结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊。

5．注意事项：标本送检必须及时，收到标本应立即检验；为了避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA 盐抗凝。

凝块和薄膜检验1．英文或缩写：略。

2．标本采集：临床医师取脑脊液2-3 ml，立即送检。

3．正常参考值：正常脑脊液无凝块或薄膜。

4．临床意义：化脓性脑膜炎的脑脊液静置12-24 h，可见倒置漏斗状的薄膜形式。

脑梅毒、脊髓灰质炎时，可有絮状凝块形式。

5．注意事项：标本送检必须及时，收到标本应立即检验，不宜使用抗凝剂。

脑脊液的培养与送检首都医科大学附属北京天坛医院唐明忠一、为什么要做细菌培养细菌培养是一个传统的方法，但感染性疾病病原更复杂 , 病原诊断越来越重要。

近年感染性疾病发生了重大的变化，主要表现在四个方面：一，传统的传染性疾病减少，如鼠疫、霍乱等传染病现在有下降的趋势。

而一些新的感染有上升的趋势，主要表现为院内感染。

二，从病原体来看，传统的病原微生物越来越少，“条件致病菌”成主要病原体。

三，细菌耐药性越来越严重，细菌药敏试验有非常重要的临床意义。

四，病毒和真菌性感染问题严重。

现在最突出的问题是细菌耐药。

细菌生存 35 ～ 38.5 亿年，人类生存 2.5 万年，而抗生素存在了 80 年。

由于抗生素的发现，在诊断和治疗上都取得了很大的成绩。

当时人们认为随着抗生素发现的越来越多，细菌性感染的问题很快就能够得到解决，其他病原微生物也会随着这个思路找到一个很好的治疗途径。

但最近几年，尤其从70年代以后，细菌的耐药的情况非常突出。

造成诊断和治疗上发生了很大的变化。

这是由于细菌的耐药造成的。

细菌耐药原因很多，一，最根本的原因是细菌生物的进化，实际上在没有抗生素之前，细菌在自然界已经接触过抗生素，在这个过程中细菌为了生存产生耐药性，是必然的结果。

二，但是人为因素加速了细菌耐药性的产生，医院作为抗生素使用的一个主要地点，它的滥用直接导致了细菌耐药性的上升。

三，农畜牧业的大量应用抗生素、人口的流动和旅游等因素都是造成细菌耐药性上升的主要原因。

现在的耐药性细菌主要出现在医院，属于院内感染，但是院内感染的耐药菌有向社区蔓延的趋势，这也是我们现在进行细菌培养和药敏试验的一个重要任务。

二、中枢神经感染中枢神经感染是威胁生命的严重感染。

中枢神经感染近年变化情况 : 原发性中枢神经感染 ( 尤其急性脑膜炎 ) 的控制取得较大成绩；医院内相关中枢神经感染不断上升，如手术后感染。

每年我院神经外科手术接近万台 , 脑脊液的细菌培养和药敏是诊断治疗中枢神经系统感染的金标准。

医院检验中心脑脊液检验操作规程（1）标本处理1．标本送验必须及时，收到标本后应立即检验。

久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。

2．细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。

（2）一般性状检查主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。

脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基。

1）红色：如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：（1）将血性脑脊液试管离心沉淀（1500r ／min），如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。

（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到。

因脑脊液渗透压较血浆高所致。

2）黄色：除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。

黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。

但前者呈黄色透明的胶冻状。

3）米汤样：由于白（脓）细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。

4）绿色：可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。

5）褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。

（3）潘氏（Pandy）球蛋白定性试验[ 原理]脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。

[ 试剂]5％苯酚溶液：取纯苯酚25m1,加蒸馏水至500m1,用力振摇，置37C温箱内 1 — 2 天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。

[ 操作]取试剂2—3ml,置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液I 一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。

[ 结果判断]阴性：清晰透明，不显雾状。

极弱阳性（土）：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。

弱阳性（十）：灰白色云雾状。

阳性（2 十）：白色浑浊。

强阳性（3 十）：白色浓絮状沉淀。

最强阳性（4 十）：白色凝块。

[ 临床意义]正常时多为阴性。