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细菌分型鉴定的方法

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细菌分型鉴定的方法

细菌分型鉴定那可是超级重要的事儿！就好比你要在一群陌生人里找出那个特别的人一样。那到底咋进行细菌分型鉴定呢？嘿，首先可以从形态特征入手。咱就拿显微镜来说吧，把细菌放在显微镜下观察，就像侦探拿着放大镜找线索。看看细菌是啥形状的，是圆圆的球菌，还是长长的杆菌？这一步就像在玩猜谜游戏，你永远不知道下一个看到的细菌会是什么模样。这时候你可能会想，光看形状就能确定是啥细菌了吗？那可不行！接下来还得进行生理生化特征鉴定。这就好比了解一个人的性格爱好，细菌也有自己的“脾气”呢。看看它能利用哪些营养物质，产生啥样的代谢产物。比如说，有的细菌能发酵某种糖，产生酸和气体，这就给我们提供了重要线索。哎呀，这过程不就跟拼图一样嘛，一块一块地把细菌的真面目拼凑出来。

那进行细菌分型鉴定安全不？稳定不？放心吧！只要按照规范操作，那是相当安全的。就像走在平坦的大路上，只要你不瞎折腾，基本不会有啥危险。而且这个过程也很稳定，不会像坐过山车似的让人提心吊胆。只要你认真做好每一步，结果通常都是可靠的。

细菌分型鉴定的应用场景那可多了去了。在医学领域，医生可以通过鉴定细菌的类型来确定病因，对症下药。这就好比战场上的将军，知

道了敌人是谁，才能制定出有效的作战计划。在食品行业，能检测出食品中的有害细菌，保障咱老百姓的食品安全。这就像给食品安上了一道坚固的防线，让那些坏细菌无处可逃。在环境监测方面，也能了解环境中的细菌种类和分布，为保护环境提供依据。哇塞，这作用简直太大了吧！

优势也是杠杠的。可以快速准确地确定细菌类型，为后续的治疗和处理节省时间。就像赛车比赛，速度快的就能率先冲过终点。而且还能帮助我们了解细菌的传播途径和致病机制，为预防疾病提供指导。这不是很棒吗？

给你讲个实际案例哈。有一次，一家医院里出现了一群不明原因发热的病人。医生们就赶紧进行细菌分型鉴定，通过一系列的操作，终于确定了是一种罕见的细菌引起的感染。然后根据鉴定结果，制定了针对性的治疗方案，病人很快就康复了。你说这细菌分型鉴定厉害不厉害？

总之，细菌分型鉴定是一项非常重要的工作。它就像一把神奇的钥匙，能打开细菌世界的大门，让我们更好地了解这些小小的生物。它安全稳定，应用场景广泛，优势明显。咱可得重视起来，让它为我们的生活和健康发挥更大的作用。

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16S rDNA鉴定细菌的方法

16S rDNA鉴定细菌的方法

16S rDNA鉴定细菌的方法

细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：

1.提取细菌基因组DNA,

2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。

3.琼脂糖凝胶电泳分离

4.胶回收目的片段

5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。

7.构建系统进化树

试剂：

1.1培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。）。

1.2 1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高盐灭菌后，室温保存。冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。

1.3 0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。

1.4 10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。1M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）取20ml。高温高压灭菌，室温保存。

1×TE Buffer用10×TE Buffer稀释10倍即可。

1.5 10%SDS（W/V）：称10g，68℃加热溶解，用浓盐酸调pH至7.2。室温保存。用之前在65℃溶解。配置时要戴口罩。

6、5M NaCl：称292.2gNaCl，高温高压灭菌，4℃保存。

7、CTAB/NaCl（10%CTAB，0.7M NaCl）：溶解4.1g NaCl，加10g CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），加热搅拌。用之前在65℃溶解。

8、氯仿/异戊醇：按氯仿：异戊醇=24：1（V/V）的比例加入异戊醇。

9、酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）：按苯酚与氯仿/异戊醇=1：1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。

16S_rDNA鉴定细菌的方法

16S_rDNA鉴定细菌的方法

16S rDNA鉴定细菌的方法

细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：

1.提取细菌基因组DNA,

2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。

3.琼脂糖凝胶电泳分离

4.胶回收目的片段

5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。

7.构建系统进化树

试剂：

1.1培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。）。

1.2 1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高压灭菌后，室温保存。冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。

1.3 0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA•2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。

1.4 10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。1M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）取20ml。高温高压灭菌，室温保存。

1×TE Buffer用10×TE Buffer稀释10倍即可。

1.5 10%SDS（W/V）：称10g，68℃加热溶解，用浓盐酸调pH至7.2。室温保存。用之前在65℃溶解。配置时要戴口罩。

6、5M NaCl：称292.2gNaCl，高温高压灭菌，4℃保存。

7、CTAB/NaCl（10%CTAB，0.7M NaCl）：溶解4.1g NaCl，加10g CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），加热搅拌。用之前在65℃溶解。

8、氯仿/异戊醇：按氯仿：异戊醇=24：1（V/V）的比例加入异戊醇。

9、酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）：按苯酚与氯仿/异戊醇=1：1的比例混合Tris-HCl平衡苯酚与氯仿/异戊醇。

细菌分子生物学分型技术进展

细菌分子生物学分型技术进展

・　１７１６　・　国际检验医学杂志２０１２年７月第卷第ｌ４塑Ｉｎｔ　！　！　：塑！　ｔａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００５，３５（２）：２８３—２９２．　［９３　Ｍｏｓｅｒ　Ｄ，Ｍｏｌｉｔｏｒ　Ａ，Ｋｕｍｓｔａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｅｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｏｎ　１一Ｆ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ＮＧＦＩ—Ａ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｉｐｐｏｅａｍｐｕｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００７，８　（４）：２６２—２６８．　Ｅｌ０］Ｍｅ　Ｇｏｗａｎ　ＰＯ，Ｓａｓａｋｉ　Ａ，Ｄ　Ａｌｅｓｓｉｏ　ＡＣ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｇｕｌａ—　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｒａｉｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ　ａｂｕｓｅ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００９，１２（３）：３４２—３４８．　［１１］Ｐｕｊｏｌｓ　Ｌ，Ｍｕｌｌｏｌ　Ｊ，Ｔｏｒｒｅｇｏ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ａｉｒｗａｙｓ［Ｊ］．Ａｌｌｅｒｇｙ，２００４，５９（１０）：１０４２—１０５２．　Ｅ１２３　Ｔｕｒｎｅｒ　ＪＤ，Ａｈ　ＳＲ，Ｃａｏ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＣｐＧ　ｉｓｌａｎｄｓ，ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｍｏｒｅＥＪ］．Ｂｉ—　ｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１０，８Ｏ（１２）：１８６０—１８６８．　［１３］Ｂｉｒｄ　ＡＰ，Ｗｏｌｆｆｅ　ＡＰ．Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ－ｂｅｌｔｓ，ｂｒａｃｅｓ，　ａｎｄ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎＦＪ］．Ｃｅｌｌ，１９９９，９９（５）：４５１—４５４．　［１４］Ｗｅａｖｅｒ　ＩＣ，Ｃｅｒｖｏｎｉ　Ｎ，Ｃｈａｍｐａｇｎｅ　ＦＡ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ　ｐｒｏｇｒａｍ—　ｍｉｎｇ　ｂｙ　ｍａｔｅｒｎａｌ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ＥＪ］．Ｎａｔ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，７（８）：８４７—　８５４．　Ｅｌ５］Ｓｚｙｆ　Ｍ，Ｍｅａｎｅｙ　ＭＪ．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｂｅｈａｖｉｏｕｒ，ａｎｄ　ｈｅａｌｔｈ［Ｊ］．Ａｌｌｅｒ—　ｇＹ　Ａｓｔｈｍａ　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，４（１）：３７—４９．　［１６３　Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　Ｕ，Ｍｏｓｈｅ　Ｓ，Ｐｅｔｅｒ　Ｗ．Ｎａｔｈａｎｉｅｌｓｚ．Ｏｒｇａｎ　ａｎｄ　ｇｅｓｔａ—　ｔｉｏｎａｌ　ａｇｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｎａｌ　ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｇｌｏｂａｌ　ｍｅｔｈｙ—　ｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｆｅｔａｌ　ｂａｂｏｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｅｄ　Ｐｒｉｍａｔｏｌ，２００９，３８（４）：２１９—２２７．　［１　７］Ｅｇｌｅｎ　ＲＭ，Ｒｅｉｓｉｎｅ　Ｔ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｏｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｔｈａｔ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｅｐｉ—　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ：ａｎ　ｏｖｅｒｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｍｏｌ　Ｓｃｒｅｅｎ，２０１１，１６（１０）：１１３７—１１５２．　［１８］Ｃｈｅｎｇ　Ｘ，Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ　ＲＭ．Ｍａｍｍａｌｉａｎ　ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙ１ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ：　ａ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２００８，１６（３）：３４１—３５０．　［１９］Ｈｕ　ＹＧ，Ｈｉｒａｓａｗａ　Ｒ，Ｈｕ　ＪＬ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ａｃ—　ｔｉｖｉｔｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｄｎｍｔ３Ｌ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｄｎｍｔ３　ｅｎｚｙｍｅｓ　・综　述・　ｉｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｍｏｚ　Ｇｅｎｅｔ，２００８，１７（１７）：　２６５４—２６６４．　［２０］Ｌｉｌｌｙｅｒｏｐ　ＫＡ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ　ＥＳ，Ｔｏｒｒｅｎｓ　ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｆｅｅｄｉｎｇ　ｐｒｅｇｎａｎｔ　ｒａｔｓ　ａ　ｐｒｏｔｅｉｎ—ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｄｉｅｔ　ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｌｙ　ａｌｔｅｒｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｅ—　ｃｉｆｉｃ　ｃｙｔｏｓｉｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔｉｃ　ＰＰＡＲ　ａｌｐｈａ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｆｆ—　ｓｐｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｎｕｔｒ，２００８，１００（２）：２７８—２８２．　［２１］Ｔａｋａｙａ　Ｊ，Ｉｈａｒａｄａ　Ａ，Ｏｋｉｈａｎａ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｉｎ　ｐｒｅｇｎａｎｔ　ｒａｔｓ　ａｌｔｅｒｓ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｙｔｏｓｉｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔ—　ｉｃ　ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ一２　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ［Ｊ］．　Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１１，６（５）：５７３—５７８．　［２２］Ｌｉｌｌｙｅｒｏｐ　ＫＡ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ　ＥＳ，Ｊａｃｋｓｏｎ　ＡＡ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｅｔａｒｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅ—　ｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｅｇｎａｎｔ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｎｄ　ｆｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｐｒｅｖｅｎｔｓ　ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｕｔｒ，２００５，１３５（６）　１３８２—１３８６．　［２３］Ｌｉｌｌｙｃｒｏｐ　ＫＡ，ｓｌａｔｅ　ｅｆｆｅｒｉｅｓ　ＪＬ，Ｈａｎｓｏｎ　ＭＡ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｆｅｄ　ａ　ｐｒｏｔｅｉｎ—。ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｄｉｅｔ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｒｅｇ—’　ｎａｎｃｙ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ｔｈａｔ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ一１　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｉｍｐａｉｒｅｄ　ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｈｉｓｔｏｎｅ　ｍ０ｄｍｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｎｕｔｒ，２００７，９７（６）：１０６４—１０７３．　Ｅ２４３　Ｍｅａｎｅｙ　ＭＪ，Ｓｚｙｆ　Ｍ，Ｓｅｅｍ　ＪＲ．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｎａｔａｌ　ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ　ｏｆ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ－ｐｉｔｕｉｔａｒｙ—ａｄｒｅｎａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｅａｌｔｈ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｍｏｌ　Ｍｅｄ，２００７，１３（７）：２６９—２７７．　［２５］Ｄｏｌｉｎｏｙ　ＩＸ；，Ｗｅｉｄｍａｎ　ＪＲ，Ｗａｔｅｒｌａｎｄ　ＲＡ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｔｅｒｎａｌ　ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ　ａｌ～　ｔｅｒｓ　ｃｏａｔ　ｃｏｌｏｒ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　Ａｖｙ　ｍｏｕｓｅ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｏｂｅｓｉｔｙ　ｂｙ　ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｅｔａｌ　ｅｐｉｇｅｎｏｍｅ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｐｅｒｓｐｅｃｔ，　２００６，１１４（４）：５６７－５７２．　细菌分子生物学分型技术进展　陆水英综述，陈维贤审校　（重庆医科大学附属第二医院检验科４０００１０）　（收稿日期：２０１卜１２—１０）　关键词：电泳，凝胶，脉冲场；聚合酶链反应；　分子生物学；　细菌分型技术　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１２．１４．０２４　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１２）１４—１７１６—０３　耐药细菌尤其是多耐药、超级耐药细菌的出现，以及由细　菌造成的医院感染和暴发流行的发生，不仅严重威胁着人类健　康，也造成了医疗资源的浪费，是当今医学界面临的严重挑战。　对细菌的正确分型是诊断医院感染、确定暴发流行并采取控制　措施的关键。传统的细菌分型方法如细菌的形态特征、染色特　征、血清型、噬菌体型等在微生物研究中起了重要作用，但上述　方法存在分辨力不高、鉴定时间长等诸多局限。针对这些缺　陷，建立有效、快速、灵敏、重复性好、分辨力高的分型方法十分　必要。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，特别是聚合　酶链反应（ＰＣＲ）技术的发展，分子生物学技术应用于病原微生　物分子分型成为临床诊断研究中的热点　］。　１脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）　ＰＦＧＥ技术是１９８４年由Ｓｃｈｗａｒｔｚ和Ｃａｎｔｏｒ发展起来的，　该技术采用多个电场交替地开启和关闭，使包埋在琼脂糖凝胶　中的ＤＮＡ分子的电泳方向随电场方向发生相应改变。在凝　胶上出现按分子大小排列的条带，通过比较核酸限制性内切酶　图谱，进行细菌的分型。ＰＦＧＥ相较于其他方法有分辨率高、　重复性好、结果稳定、易标准化的优点，被誉为细菌分子生物学　分型技术的“金标准”Ｌ２］。Ｐａｌａｄｅ等　采用噬菌体分型技术和　ＰＦＧＥ对流行病学上不具相关性的１８株肠道沙门菌进行分　型，噬菌体分型技术仅能将其中４株分为ＤＴ４１、ＤＴ８６、ＤＴ１三　型，而以Ｘｂａｌ和Ｂｌｎｌ设计染色体进行的ＰＦＧＥ可分出７个型　别和８个型别。林一曼等　也证实同种噬菌体分型的肠炎沙　门菌用ＰＦＧＥ可以分出更多的型。Ｋｎａｂｅｌ等ｌ＿５　联合ＰＦＧＥ、　ＭＬＳＴ及ＭＶＬＳＴ三种方法证实了１９８８￣２０１０年在加拿大境　内流行的单核增生李斯特菌为同一克隆。随着该方法的应用　增多，目前已发展出脉冲场梯度凝胶电泳、正向交变电场凝胶　电泳、横向交变凝胶电泳、电场倒转凝胶电泳、转动凝胶电泳、　转动电场电泳、双重脉冲场凝胶电泳、钳位均匀电场电泳等技　术。随着该方法的不断优化，该技术已用于肺炎链球菌、铜绿　假单胞菌、大肠杆菌、肠球菌及非结核杆菌等多种病原体的分　

浅述动物源性肺炎克雷伯菌常见分型方法

浅述动物源性肺炎克雷伯菌常见分型方法

浅述动物源性肺炎克雷伯菌常见分型方法

作者：汪娟 黄泽虎 单文杰等

来源：《江西饲料》 2018年第1期

摘要：分型技术分析研究常用于确定菌株间的流行病学相关性，对细菌病的预防、监测起到积极的作用。本研究主要对肺炎克雷伯菌从传统分型方法和现代分子分型进行阐述，为动物源性肺炎克雷伯菌分型研究提供依据。

关键词：肺炎克雷伯菌；传统分型；多位点序列分型

中图分类号：S852.6 文献标识码：A 文章编号：1008-6137（2018）01-0013-04

0 引言

肺炎克雷伯菌属于肠杆菌科克雷伯菌属，革兰阴性。广泛存在于自然环境中，健康人和动物的呼吸道、消化道及泌尿生殖道也分离到过该菌。

人医研究报道表明，肺炎克雷伯菌已经成为医院内获得性肺炎（HAP）的常见致病菌。在兽医研究领域，各种家禽、家畜、特种经济动物及多种野生动物均被报道过感染肺炎克雷伯氏菌。近年来由于抗生素的广泛使用，导致动物源性肺炎克雷伯菌已经产生了多种耐药菌株，这给临床预防、诊断及治疗都带来了许多困难。通过分型技术分析研究确定菌株间的流行病学相关性，对肺炎克雷伯菌病的预防、监测起到积极的作用[1]。传统分型方法包括血清分型、药物敏感性分型、噬菌体分型及克雷伯素分型。随着分子生物学的高速发展，肺炎克雷伯菌的分型已进入分子分型时代，现代分子分型技术主要包括脉冲场凝胶电泳（PFGE）、质粒DNA图谱分析及多位点系列分析（MLST）等技术。笔者通过翻阅资料，就目前肺炎克雷伯菌的分型研究进行浅述，旨在对肺炎克雷伯菌进行深入研究提供依据。

1 传统分型方法

1.1 生物分型

根据肺炎克雷伯菌的生化反应特征建立的生物分型系统，据此对不同来源的菌株进行生物学分型研究，但此方法需要的反应步骤较多，并且有些反应培养时间很长，故生物分型不是最好的研究工具。

1.2 血清学分析

血清学分型是目前应用最广泛的分型方法，这种方法主要是依据其荚膜抗原的不同来分类，肺炎克雷伯菌主要包括K、O两种抗原，利用K抗原来进行分类的应用还是比较普遍。利用这一特性已成功将肺炎克雷伯菌分为82个血清型，此种方法重复性较好，可以用于鉴别临床大多数的分离株；不足之处在于有时候会出现血清学交叉反应，结果判断易受影响，而且分型地过程费时费力。