分子排阻柱色谱法

中国抗生素杂志２０　１　８年７月第４３卷第７期　８６３　

文章编号：１００１—８６８９（２０１８）０７—０８６３．０３　

分子排阻色谱法测定头孢克洛胶囊中高分子杂质的含量　

张云王立立孙玲　（山东省药学科学院，山东省化学药物重点实验室，济南２５０１０１）　

摘要：目的建立分子排阻色谱法测定头孢克洛胶囊中的高分子杂质。方法采用球状亲水硅胶柱（ＴＳＫ．ＧＥＬ￣Ｇ２５００ＰＷＸＬ　色谱柱，７．８ｍｍｘ３００ｍｍ，７ｇｍ），流动相为磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．０）［０．０２ｍｏｌ／Ｌ磷酸氢二钠溶液８ｎｏ．０２ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠溶液（６１：３９）】＿乙　腈（９５：５）为流动相，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２６５ｎｍ，以头孢克洛对照品外标法计算高分子杂质的含量。结果　头孢克洛在　０．５３２～２１．２８０ｇｇ／ｍＬ的浓度范围内，面积与浓度呈良好的线性关系（　０．９９９９）；最小检出浓度为０．１６１ｔｘｇ／ｍＬ；高分子杂质与头孢克　洛峰能有效分离，并先于主峰流出，方法专属性良好。结论　该方法适于测定头孢克洛胶囊中高分子杂质，灵敏度高，重复性　好，操作简便。　关键词：头孢克洛；高分子杂质；分子排阻色谱　中图分类号：Ｒ９７８．１　文献标志码：Ａ　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｃｅｆａｃｌｏｒ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｂｙ　ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－　

ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ　

ＺｈａｎｇＹｕｎ，ＷａｎｇＬｉ—ｌｉ　ａｎｄ　ＳｕｎＬｉｎｇ　（ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｒｕｇ，Ｊｉ’ｎａｎ　２５０１０１）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｃｅｆａｃｌｏｒ　ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　ＴＳＫ．　ＧＥＬ０Ｇ２５００ＰＷＸＬ　ｃｏｌｕｍｎ　ｆ７．８ｍｍｘ３００ｍｍ，７ｇｍ）ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　［０．０２ｍｏｌ／Ｌ　ｄｉｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ一０．０２ｍｏｌ／Ｌ　ｓｏｄｉｕｍ　ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（６１：３９），ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｔｏ　ａ　ｐＨ　ｏｆ　７．Ｏ１一ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（９５：５）ａｔ　ａ　ｆｌＯＷ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０．８ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　２６５ｎｍ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｗａｓ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈＯｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｆａｃｌｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆｃｅｆａｃｌｏｒ　ｗａｓ　０．５３２－２１．２８０￣ｇ／ｍＬ　９＝０．９９９９）．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｗａｓ　０．１６１　ｒｔｇ／ｒｎＬ．Ｔｈｅ　ｐｅａｋｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ｃｅ：ｆａｃｌｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｅｆａｃｌｏｒ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ．Ｃｏｎｅｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒａｐｉｄ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｃｅｆａｃｌｏｒ　ｃａｐｓｕｌｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｅｆａｃｌｏｒ；Ｈｉｇｈ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｓｓ　ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　

一种体积排阻色谱法测定玻璃酸钠分子量与分子量分布的方法与流程

要利用体积排阻色谱法测定玻璃酸钠的分子量与分子量分布，可以按照以下步骤进行：

1. 准备样品：将玻璃酸钠样品溶解在合适的溶剂中，使得样品浓度适中，通常为0.1-1 mg/mL。

2. 准备流动相：选择合适的流动相溶液，其中含有一定浓度的盐或其他添加剂，以提供合适的排阻效果。

3. 准备色谱柱：选择适合玻璃酸钠分析的色谱柱，例如凝胶渗透色谱柱（Gel Permeation Chromatography，GPC），根据样品的预估分子量范围选择合适的色谱柱孔径。

4. 进行色谱分析：将样品注入色谱柱后，通过适当的流速将样品溶液推动通过柱子。分析过程中，通过体积排阻效应使得分子在纵向流动时受到大小不同程度的碰撞阻力，从而实现分离不同分子量的玻璃酸钠。

5. 检测器选择：根据需要选择合适的检测器进行分析。体积排阻色谱通常使用光散射检测器（Light Scattering Detector，LSD）和折射率检测器（Refractive Index Detector，RID），光散射检测器可提供粒径信息，折射率检测器可提供浓度信息。

6. 数据分析：根据检测器输出的数据，使用相关的分析软件进行数据处理和分析，获得样品的分子量及分子量分布信息。

需要注意的是，体积排阻色谱测定不同分子量的玻璃酸钠需要选择合适的柱子和流动相，且色谱条件的优化也是十分重要的。而且，对于大分子量的玻璃酸钠，可能需要使用多个不同孔径的色谱柱进行串联分析，以获得更准确的结果。另外，还要注意样品的稳定性和浓度范围的选择，以避免样品在分析过程中发生聚集或分解的情况。

天津药学Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２０１５年第２７卷第２期　２１　

３讨论　有文献报道　Ｊ，甲醇一水的流动相条件下，柱压比　

较高，对色谱柱的损耗较大，并且色谱峰的分离度不　好，且考虑到槲皮素有一定的脂溶性，故加入一定量的　

乙腈。选用不同比例，经多次实验筛选，发现采用　

０．４％磷酸一乙腈（７５：２５）溶液系统作为流动相效果　

较理想，组分分离好，峰形对称，保留时间适宜。槲皮　

素在２５６　ｎｍ与３７０　ｎｍ波长处均有较大吸收，其中在　

２５６　ｎｍ处杂质干扰少，目标峰与其他相邻色谱峰分离　

度较好　，故选择２５６　ｎｍ做为测定波长。　以槲皮素为指标，通过测定其含量来控制健胃乐　

合剂的质量，方法精密度好、准确性高，具有较强的专　

属性，能够达到准确反映中药整体质量的要求。　参考文献　１宋玉乔，姚凌云，曹蔚，等．槲皮素的药理作用研究近况［Ｊ］．西北药　学杂志，２００２，１７（１）：４０—４２　２黄千，刘辉，李遇伯，等．ＨＰＬＣ法测定槐花中槲皮素的含量［Ｊ］．天津　药学，２００７，１９（２）：１０—１１　３周伟，蔡光明，黄鹤慧，等．高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中槲皮　素与异鼠李素的含量［Ｊ］．中国药房，２００７，１８（９）：６９３—６９４　

高效分子排阻色谱法测定注射用头孢匹胺钠中聚合物的含量　

郭艳娟，郭福庆　

（天津市药品检验所，天津３０００７０）　

摘要　目的：建立高效分子排阻色谱法测定注射用头孢匹胺钠中聚合物的含量。方法：采用ＴＳＫ—ＧＥＬ　Ｇ２０ＯＯＳＷｘＬ　色谱柱（７．８　ｍｍ×３００　ｍｍ）；以磷酸盐缓冲液（ｐＨ　７．０）［０．０１　ｍｏｌｆＬ磷酸氢二钠一０．０１　ｍｏｌｆＬ磷酸二氢钠溶液　（６１：３９）］一乙腈（９７．５：２．５）为流动相；检测波长２３１　ｎｍ；柱温３０℃；流速０．８　ｍｌｆｍｉｎ；进样量１０　ｌ。结果：头孢匹胺在　１．９６２　５—１９．６２４　５　ｍｌ范围内与峰面积呈良好的线性关系（ｒ＝１．０００　０），最低检出浓度０．０８　ｇ／ｍｌ。结论：建立的方法　简单、快速、灵敏度高，可有效控制产品的质量。　关键词　注射用头孢匹胺钠，高分子聚合物，ＴＳＫ—ＧＥＬ　Ｇ２０ＯＯＳＷｘＬ凝胶色谱柱　中图分类号：Ｒ９２７．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－５６８７（２０１５）０２－００２１－０４　

一. 分离原理

尺寸排阻色谱法：是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法，也称凝胶色谱法。

排阻色谱的固定相多为凝胶。凝胶是一种由有机分子制成的分子筛 , 其表面惰性 , 含有许多不同大小孔穴或立体网状结构。凝胶的孔穴大小与被分离组分大小相当 , 对不同大小的组分分子则可分别渗到凝胶孔内的不同深度。尺寸大的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内 ,

但进不了小孔 , 甚至于完全被排斥，先流出色谱柱。尺寸小的组分分子, 大孔小孔都可以渗进去, 最后流出。因此 , 大的组分分子在色谱柱中停留时间较短, 很快被洗出。小的组分分子在色谱柱中停留时间较长。经过一定时间后, 各组分按分子大小得到分离。

当组分X进入柱子后,它就要从高浓度的流动相向固定相孔隙内的流动相扩散。当组分X进入色谱固定相达到扩散平衡时：

Xm ⇌ Xn

组分的分配系数为：

尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合：0 ≤ K ≤ 1

二. 固定相

尺寸排阻色谱常用固定相有无机和有机两大类。

无机凝胶：又称硬质凝胶。是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等，此类凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱效较低。

有机凝胶：又称半硬质凝胶。如苯乙烯二乙烯苯交联共聚物凝胶，能耐较高压力，适用于有机溶剂作流动相，有一定可压缩性，可填得紧密，柱效较高。但在有机溶剂中有轻度膨胀。新型凝胶色谱填料，克服了传统软填料的一些弱点，粒度细，机械强度高，分离速度快，效果好，特别是无机填料表面键合亲水性单分子层或多层覆盖的单糖或多糖型等填料广泛用于生物大分子的分离。

三. 流动相

尺寸排阻色谱流动相：从样品的溶解性考虑，流动相应与凝胶本身有相似性，黏度低，与样品的折光率相差大;能润湿凝胶，防止吸附作用。

常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷(凝胶渗透色谱);水(凝胶过滤色谱)等。