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光合细菌对褶皱臂尾轮虫的饵料价值许兵;丁明宇;毛景华;徐怀恕【期刊名称】《海洋湖沼通报》【年(卷),期】1992()2【摘要】我们自青岛栈桥浅海海泥中分离到一株光合细菌,经鉴定为球形红假单胞菌(Rhodopseudomonas spheroides)。
对其生化特性、生长条件以及做为褶皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)的饵料价值,进行了研究。
结果表明,以球形红假单胞菌的新鲜培养物,混以青岛大扁藻(Platymonas helgolandica var.tsingtaoensis)喂养轮虫,轮虫的增殖率明显高于单独使用光合细菌、扁藻和海洋酵母,也高于光合细菌与海洋酵母的混合。
提示在轮虫的生产性培养中,以一定浓度的光合细菌与单胞藻混合投喂轮虫,可能取得较高产量。
【总页数】6页(P17-22)【关键词】光合细菌;轮虫;饵料;价值【作者】许兵;丁明宇;毛景华;徐怀恕【作者单位】青岛海洋大学海洋生物系;青岛海洋大学【正文语种】中文【中图分类】Q949.321【相关文献】1.光合细菌在水产养殖中应用的研究（3）——光合细菌作为仔鱼开口饵料的价值[J], 黄皓2.不同饵料对褶皱臂尾轮虫生长繁殖的影响 [J], 耿瑞静;陈健安;王卫民3.饵料中添加鱼油型HUFA强化剂对褶皱臂尾轮虫生产及营养价值的影响 [J], 黄旭雄;施兆鸿;周洪琪;袁灿东;孙玉鑫4.饵料增强剂对褶皱臂尾轮虫Brachionus plicatilis\r培育的影响研究 [J], 陈瑜;刘飞;王爱民;於叶兵;杨文平;田红艳5.光合细菌在水产养殖中应用的研究(3)——光合细菌作为仔鱼开口饵料的价值 [J], 黄皓;姚祖旭;郑晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
轮虫的培养技术养殖技术（轮虫的培养技术）轮虫是一群微小的多细胞动物，种类多，广泛分布于淡水、半咸水和海水中。
其对环境适应性强、繁殖快、营养丰富、大小适中、易培养，是鱼、虾、蟹幼体理想的动物性饵料，目前广泛应用于生产性培养的是褶皱臂尾轮虫。
一、轮虫概况1、饵用特点1）生活力强：易培养，喜欢有机质较丰富的水体。
2）繁殖快：环境条件适宜时，日生长率达30%。
3）营养丰富：干物质中蛋白质含量57%、脂肪20%、钙1.8%、磷15%。
4）大小适宜：约150×250μ，为大多数有鳍鱼类的开口饵料。
2、研究发展史1）1960年日本伊藤发现轮虫作为仔鱼的饵料，1964年日本开始大量培养轮虫。
2）1965年，Hirata 和Mori首先利用面包酵母培养轮虫。
70年代就大量利用面包酵母，但发现酵母轮虫造成鱼苗大量死亡，原因为酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸（20个碳以上），随后研究酵母轮虫的营养强化技术。
3）我国从60年代开始研究，70年代后期研究培养轮虫，80年代中期开始利用面包酵母培养轮虫，90年代研究轮虫品系的选育，如小轮虫（<100μ）、大轮虫（500-1000μ）、低温轮虫等。
3、存在问题1）探明轮虫两性繁殖的机制。
2）开发高密度培养轮虫的装置。
3）选育和引进优良的轮虫品系。
4）探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施。
5）进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然下降的原因和机制。
二、轮虫的生物学集美大学水产学院陈学豪教授番禺梅山马利酵母有限公司（联合编写）1、形态特征1）、轮虫为雌雄异体，雄性个体小，结构简单，仅有纤毛环和精巢，也不摄食，专为有性生殖交配。
雌性个体大，被甲长196-250μ，宽150-202μ，前沿背面有棘刺6个，而腹面仅4个。
轮虫有一个尾足，其内有粘液分泌于足趾，可粘于池壁等物体上作休息。
2）、轮虫三大特征a、轮盘：由纤毛环、棒状突和触毛组成，具运动和摄食作用。
b、咀嚼器：接口后端，将食物磨碎。
光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。
我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。
本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。
1. 光合细菌的培养1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。
目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。
1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。
基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。
如制固体培养基再加20%琼脂。
1.3 培养生态条件1.3.1 pH值：光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。
1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。
光强度一般为1000-2000Lux。
1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。
据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。
1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。
一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌（温度121℃、压力15磅、时间20分钟）, 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。
关于轮虫高密度培养的研究作者：宋月林，王伟洪来源：《河北渔业》 2012年第10期宋月林，王伟洪（浙江海洋学院水产学院，浙江舟山 316000）摘要：综述了国内有关轮虫高密度培养方面的研究现状，着重介绍了轮虫高密度培养过程中轮虫种类的选择、饵料种类的选择、培养条件的设置，培养的方式方法和营养强化等方面的研究成果。
关键词：轮虫；高密度；饵料；n3HUFA；营养强化轮虫营养丰富特别是n3系列多不饱和脂肪酸（n3HUFA），尤其是二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）含量丰富。
EPA和DHA在生物发育过程中对维持细胞正常的生理功能、神经系统发育、繁殖率与孵化率等有重要作用[1]。
此外轮虫一般个体较小，适宜于幼苗的口径，游泳速度慢，容易消化吸收，一直被公认是鱼虾蟹等经济水产品育苗阶段优质的开口饵料。
目前经济水产品养殖发展形势不断高涨，轮虫作为该产业育苗阶段理想的开口饵料其需求量不断增大。
然而，目前国内轮虫的来源主要是依赖于室外土池培养和水泥池培养。
这两种培养方式存在受自然因素影响较大、产量不稳定、周期长的缺点。
所以轮虫高密度快速培养势在必行，同时解决高密度培育轮虫的技术问题迫在眉睫。
本文依托于前人的研究结果加之自己的研究，对轮虫高密度培养的现状进行有针对性的综述，旨在为相关领域研究提供参考。
1高密度培养轮虫种类选择目前，在海水和半咸水育苗过程中，广泛使用的轮虫是褶皱臂尾轮虫（Brachionus plicatilis）和圆形臂尾轮虫（Brachionus rotundi fotmis）；在淡水育苗中，常使用萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus）进行实际生产[2]。
以下讨论主要围绕此三种展开。
1.1褶皱臂尾轮虫和圆形臂尾轮虫褶皱臂尾轮虫被甲长平均240 μm、甲均宽170 μm，通常称为“L型”轮虫；圆形臂尾轮虫相对个体较小，被甲长平均140 μm甲均宽110 μm，称为“S型”轮虫。
轮虫培养轮虫是一群微小的多细胞动物，种类多，广泛分布于淡水、半咸水和海水中。
其对环境适应性强、繁殖快、营养丰富、大小适中、易培养，是鱼、虾、蟹幼体理想的动物性饵料，目前广泛应用于生产性培养的是褶皱臂尾轮虫。
一、轮虫概况1、饵用特点1）生活力强：易培养，喜欢有机质较丰富的水体。
2）繁殖快：环境条件适宜时，日生长率达30%。
3）营养丰富：干物质中蛋白质含量57%、脂肪20%、钙1.8%、磷15%。
4）大小适宜：约150×250μ，为大多数有鳍鱼类的开口饵料。
2、研究发展史1）1960年日本伊藤发现轮虫作为仔鱼的饵料，1964年日本开始大量培养轮虫。
2）1965年，Hirata 和 Mori首先利用面包酵母培养轮虫。
70年代就大量利用面包酵母，但发现酵母轮虫造成鱼苗大量死亡，原因为酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸（20个碳以上），随后研究酵母轮虫的营养强化技术。
3）我国从60年代开始研究，70年代后期研究培养轮虫，80年代中期开始利用面包酵母培养轮虫，90年代研究轮虫品系的选育，如小轮虫（<100μ）、大轮虫（500-1000μ）、低温轮虫等。
3、存在问题1）探明轮虫两性繁殖的机制。
2）开发高密度培养轮虫的装置。
3）选育和引进优良的轮虫品系。
4）探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施。
5）进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然下降的原因和机制。
二、轮虫的生物学1、形态特征1）、轮虫为雌雄异体，雄性个体小，结构简单，仅有纤毛环和精巢，也不摄食，专为有性生殖交配。
雌性个体大，被甲长196-250μ，宽150-202μ，前沿背面有棘刺6个，而腹面仅4个。
轮虫有一个尾足，其内有粘液分泌于足趾，可粘于池壁等物体上作休息。
2）、轮虫三大特征a、轮盘：由纤毛环、棒状突和触毛组成，具运动和摄食作用。
b、咀嚼器：接口后端，将食物磨碎。
c、原肾管：为一原始的肾，内有焰细胞。
2、生殖习性1）、孤雌生殖：在适宜的生态条件下，轮虫均进行孤雌生殖，即由雌性成体产生夏卵，然后孵化出雌性小轮虫。
光合细菌配合面包酵母与藻粉培养转曳的实脸摘要---以面包醉母与一定量螺旋藻粉培养褶皱臂尾轮虫的过程中,添加光合细菌液进行实验。
结果表明:光合细菌作为辅助性饵料,对轮虫的生长具有明显特殊的促进作用。
4组实验显示:投喂适宜量光合细菌轮虫增殖明显加快,但与光合细菌添加量的增加不完全呈正比关系;投喂光合细菌新鲜培养液与老培养液轮虫增殖效果相近;投喂光合细菌只能作为辅助性饵料。
当配合酵母、藻粉培育轮虫时,3者在饵料上起到了良好的互补作用,培养效果最佳。
关键词轮虫培养光合细菌面包酵母藻粉轮虫是鱼、虾、蟹类人工育苗幼体阶段重要的活饵料之一,培养轮虫无疑是育苗技术中的重要环节。
轮虫在工厂化培养中可利用高密度单胞藻获得高产,但目前该技术仍有占地多、耗用人力多的问题。
近年来用面包酵母单独投喂轮虫,也可获得高产。
因酵母来源广,贮运方便,此法已广为利用。
但发现轮虫培养过程中易出现延迟期,且培养出的轮虫个体小,饵料价值有待提高。
近年来国内外开展的光合细菌(PSB)在水产养殖的应用研究,各方面效果很好。
在PSB培养轮虫方面,就PSB单独投喂、PSB与藻液、PSB与面包酵母混合投喂轮虫分别进行实验,取得很好的效果。
本实验以PSB混合面包酵母与螺旋藻粉投喂轮虫,并对其培养效果进行比较详细的观察,旨在为工厂化培养轮虫从饵料方面提供一些数据和补充。
1材料与方法1.!材料2.1.1光合细菌(photos押thetieBaete‘a,以下简称PSB)由海南大学水产系微生物实验室从当地海泥中分离、培养,属红假单胞菌属,密度为50亿celllml。
实验用接种7一14天的新鲜培养液,老培养液为接种4个月。
1.12面包酵母(Saeeharo卿eeseerevisia)市售中法合资生产。
收稿日期:2003一01一201.1‘3螺旋藻粉海南晨光生物有限公司生产,以下简称藻粉。
1.14轮虫(肠动角us夕Iica石方习无病、健康、活力好的褶皱臂尾轮虫。
11.5海水盐度26,砂滤海水,水温28℃。
!.2方法1.2.1培养方法用漂白粉消毒砂滤海水,曝气2天,用硫代硫酸钠中和余氯,装人40L白桶中,大量充气,放入轮虫初密度在30一100个/耐,进行实验。
每日早换水90%,换水后加水至4oL,取样进行计数,镜检。
根据轮虫总数量,计算投饵量,每日投6次,每个实验组平行2次。
1.2.2日投喂量酵母按69/百万轮虫,藻粉按酵母量的115(即129/百万轮虫),2者混合后用300目筛绢搓,分6次投喂。
光合细菌按酵母:PSB二19:1ml比例的日添加量一次性投人水中。
如果按100个轮虫/ml计算,40L水体日投饵量为酵母249:藻粉4.89:PsB24ml。
1.2.3带卵率计算和观察用培养皿取10而左右的样品,滴加碘液杀死轮虫,放在显微镜下观察轮虫的带卵情况。
带卵率计算公式如下:带卵率=视野中带卵的轮虫个体总数/视野中轮虫个体总数x100%;带一卵率二视野中带一卵的轮虫个体总数/视野中带卵的轮虫个体总数x100%;并依次计算出带二卵率、带三卵率等。
1.2.4日增殖倍数和日增殖率计算日增殖倍数二末轮虫卉斗降业2003年第20卷第6期ShandongFisheries2003,20(6)密度/初始轮虫密度(以24小时为单位计算)。
日增殖率2.1投喂PsB(新鲜与老培养液)与不投喂PsB组培养轮(r)二InN洲0’Nt:1天后的轮虫密度,N0:初始密度。
虫的情况2结果见表1。
衰1投喂Ps日与不投喂PsB组培养轮虫实验记录最初24小时后48小时后组别轮虫密度带卵率一卵率二卵串(个/nil)(%)轮虫密度(个/nil)OJ-月耳 b01‘J bQU,J门月才产(.A)一。
55555(0A一9595外外仍95808080808080l,‘ UR‘J斑一‘IJIJ4飞 IJ内」不投PSB(对照组)老PSB液组新鲜PsB组日增殖倍数带卵率一卵率二卵率(r)(%)(%)(%)雨{O{丽2丫一809641.91(0.647)829552.1(0.742)9360402.0(0.690)95564420协.69伪9858422.16(0.771)986347轮虫密度(个/血)109110187179166174日增殖倍数带卵率一卵率二卵率(r)(%)(%)(%)丽6扣万21)8190101.81(0.593)859282.23(0.802)946535236(0.858)965842237(0.862)9853462,45(0.896)996()40由以上结果分析可知,无论是新鲜还是老PsB培养物添加到面包酵母和藻粉中培养轮虫,都能明显提高轮虫增殖速度,差异极显著。
但是这种增殖效果有个过程,在24小时内主要是轮虫抱卵积累的过程,从镜检看在第12小时轮虫抱卵率已经开始增加,24小时后抱卵情况明显好转,第48小时后,轮虫增殖效果差异变得极显著,意味着PsB的持续添加,将带来持续稳定的促长效果。
另外新鲜和老PsB培养物对轮虫的增殖效果的方差分析结果不显著。
2.2在酵毋和藻粉中添加不同比例PsB培养枪虫的实验见表2。
裹2添加不同比例pSB培养轮虫的实验。
酵母:PSB(91111)l:01:0.11:03751:0.751:151:2轮虫初密度313540363838(个/ml)士07士1.4士26土1.8土2.1士2.124小时后轮虫607075788083密度(个/ml)土14土0.8土2.2土2.4士2.1士2248小时后轮虫110128158181199209密度(个/ml)10.7士4.8士6.2土5.8土7土8.848小时/24小时l,8351832,112.322.489252轮虫的增殖倍数士003土0.05士0,06土0.06士007土0.08 ‘藻粉的添加量仍按醉母(幼:藻粉(幻二1:1。
2.3以面包酵毋为主依次添加藻粉、光合细菌培养轮虫实验见表3。
从表3可见,当酵母中逐次添加藻粉和PSB时,轮虫增殖结果三合一组>二合一组>单独投酵母组。
2.4降低酵母与藻粉投喂量后投喂高浓度psB实验见表4口表3以面包醉母为主添加旅粉、光合细菌培养轮虫实验记录组别最初轮虫密度(个/ml)24小时后轮虫密度(个/ml)48小时后轮虫密度(个/ml)48小时/24小时轮虫增殖倍数(r)Q户,‘41,‘ O41486063898400八110nn 面包酵73母组76面包酵母69+藻粉组73面包酵母十藻70粉+玲B组661681.521861.62内j八书,‘气一O八O八砚‘一J件.…,.上1,工,白14473040,乙,‘月J门」0‘以.了.OJ,‘O沪111,乙4飞」..且,月月五.L1.1...11.1 表4阳氏酵母与旅粉投喂t后投喂高浓度pss实验结果*组最初轮带卵率12小时后带卵率24小时后带卵率日增殖别虫密度轮虫密度轮虫密度倍数(个/而)(%)(个/而)(%)(个/Inl)(%)(r)降低组1139618060190151.05(0.054)士1.42士3·5士5·2士2.8士7.2士0.8士0.05(0002) 原量组1109518090419902.322(0.778)土1.96士4.3士6.3士3.2士8.6士4.6士004(0002),降低组为把酵母与藻粉量降低至原投喂最的30%,但每日照常添加PSB;原量组仍按酵母与藻粉的原量投喂,添加PsB。
从表4可见,当面包酵母和藻粉的投喂量严重不足时,即使PSB仍按600x10一‘添加,1天后轮虫的带卵率也会明显下降,轮虫的增殖倍数比原量组小,轮虫的带卵率仅为巧%。
3讨论3.1光合细菌的适量添加可明显提高使用面包酵母和藻粉培养轮虫的效果,其原因可能是3者在饵料营养上的互补作用。
表1一3三组实验发现,在一定的轮虫密度下,无论是新、老PSB培养液均在适宜浓度下能明显提高使用面包酵母和藻粉的培养效果。
实验过程中发现,PSB投32卉斗违业2003年第20卷第6期ShandongFisheries2003,20(6) 喂24小时后,轮虫的带卵情况明显变化,不仅带卵率增至95%一100%,而且带2卵的较多,带2卵率能达到40%一60%,带3卵、4卵、5卵的均有。
这是没投喂PsB组所没有的。
同时还发现,投PSB组比不投PSB组所繁殖的后代个体肥大,胃肠摄食饱满,卵巢色泽浓。
另外,每8小时就有一批轮虫卵生成;不投喂PSB组每12小时才少量生成一批新轮虫卵。
其原因,笔者认为可能是光合细菌中含有的特殊活性物质与酵母、藻粉的饵料价值的互补作用,这与坂本久川、王鉴【21观点一致。
光合细菌富含蛋白质,尤其富含对动物生长发育起促进作用的特殊生理活性物质(如辅酶Q和相当完全的B族维生素),特别是酵母中所缺乏的维生素B.2、叶酸、生物素含量丰富。
如光合细菌中富含的维生素B,2,对面包酵母培养轮虫就有独特的互补作用。
据报告,面包酵母由于添加维生素B12,其饵料价值得以改善,轮虫卵由很多不孵化转为全部孵化。
但光合细菌所含的其它重要活性物质对轮虫的独特的促长作用,其机制未作进一步的研究。
可推测,PSB的某些营养成份可提高轮虫对酵母的利用率,促进卵生成的速度和数量,而高的带卵率和数量往往带来下一代轮虫的增殖高峰。
3、2投喂新鲜PSB比老PsB培养液培养轮虫效果略好,但差别不大。
从表1的结果我们看到2种PsB培养液的增殖效果接近,由此可推测,PSB对轮虫的增殖促进主要是营养方面,而改善水质方面可能属于次要作用。
3.3随着PSB液添加量的不断增加,轮虫增殖速度在增加,但不完全成正比。
首先PSB添加量要达到适宜量,促进轮虫增殖的效果才明显。
从表2中可见,按酵母:PsB二19:0.lml时,促长效果并不明显,当2者比例达到1:0.375时,添加组轮虫比对照组增长明显加快但2者并不成正比,当2者比例达到1:2后,增殖率基本稳定,轮虫带2卵率也不超过60%,也不再出现更多的3卵、4卵,说明PsB对轮虫的增殖效果是一定的,有限的。
3.4光合细菌促长轮虫的效果可靠,但同时如果水中有原生动物时,同样也可促进原生动物的繁殖,所以务必使水中轮虫为优势种。
3.5光合细菌虽能促长轮虫,但其单独作为饵料,价值甚小,从表4可看到,当酵母量减少时,即使有PSB的添加,仍不能满足轮虫正常繁殖的需要。
这点和坂本久[’]的观点一致。
所以在用酵母培养轮虫的过程中,酵母的量一定要给足,否则即使添加光合细菌也达不到预期的很明显效果。
36虽光合细菌能有效促进酵母培养轮虫的效果,但酵母在水中的存活时间及污染水质仍是不容忽视的问题,如果有高浓度的藻液同时添加PSB应为培养轮虫最好的办法。
据王鉴[2]报道此时添加350xl仓‘较合适。
参考文献坂本久等.光合成细菌、桃红英硫菌对臂尾轮虫的饵料价值.国外水产,1984,(4):44一心s王鉴,祝国芹.不同浓度的光合细菌对轮虫繁殖的影响水产科学,1994,13(5):23一25许兵等.光合成细菌对褶皱臂尾轮虫的饵料价值.海洋湖沼通报,1992,(2):17一22王金秋等.面包醉母添加PSB和Vc后培养轮虫的效果.水产科技情报,1999,(l):25一31王育锋等.用光合细菌液池塘培育淡水鱼种的试验,水产学报,1990,14(4):347一350《齐鲁渔业》2002年精装合订本开始发售应广大读者要求,2002年(齐奢渔业》推出精装合仃本,并于即日起向广大读者发售。
