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专题22
微生物的利用
考考点点11
考点2
-7-
特色梳理
选考提升
知识强化教科书灭菌方式的归纳
灭菌 菌后处理
高压 蒸汽 灭菌
121 ℃,1 kg/cm2
培养基、 压力(若培养基中
玻璃器 含有葡萄糖,防止
皿等
其碳化,90 ℃以
上,500 g/cm2 压力)
15 min(若 含有葡萄
专题22
微生物的利用
考考点点11
考点2
-5-
特色梳理
选考提升
2.大肠杆菌的培养和分离的实验操作
50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及
培养基灭 培养皿高压蒸汽灭菌
菌
将固体培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中,水
↓
平放置,使之形成平面
倒平板 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌,培养
(2)“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的
。用琼脂糖
代替琼脂配制固体培养基的原因为
。为检测能
降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂,若存在,
则菌落周围将形成
色环带。
(3)上图中为将细菌转接到固体培养基上,应采用
法进行
接种,获得单菌落后继续筛选。
(4)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是
。
A.高压蒸汽灭菌
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专题22
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微生物的利用
考点1
考考点点22
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分离以尿素为氮源的微生物 1.菌种特点:含有脲酶,通过降解尿素作为其生长的氮源。 2.培养基:以尿素为唯一氮源的培养基,以LB全营养基为对照。 3.实验原理 (1)筛选以尿素为氮源的微生物,可使用以尿素为唯一氮源的选择 培养基(功能)进行培养选择。 (2)尿素在脲酶的降解下产生NH3,使培养基的pH由原来的中性变 为碱性,于是培养基中的酚红由红黄色变成红色。
题型 分离以尿素为氮源微生物的实验操作与应用
典例精析(2017浙江金华期末)某同学为探究土壤中微生物对尿素 是否有分解作用,设计了如下实验。并通过该实验成功筛选出了能 高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示,实验步骤 如下图所示。请回答下列问题。
KH2PO4
1.4 g
Na2HPO4
2.1 g
↓
12 h
接种
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一
↓
次,在固体培养基的平板上连续划线,盖好培养皿
划线分离 培养皿倒置(盖在下面),放在 37 ℃恒温培养箱中
↓
培养 12~24 h 后,可看到划线的末端出现不连续的
培养观察 单个菌落
↓
无菌条件下,将单菌落用接种环取出,再用划线法
菌种保存 接种在斜面上,37 ℃培养 24 h 后,置于 4 ℃冰箱中
条件下,维持15 min D.当灭菌锅压力与大气压相同时,可以打开锅盖将灭菌物品拿出来 解析 用于分离微生物的土壤样品不能使用高压蒸汽灭菌,否则
会导致样品中微生物全部死亡,而分离不到微生物,A项错误;灭菌 前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎,B项正确;为达到良好的灭菌效 果,一般在压力为1 kg/cm2,温度为121 ℃的条件下,维持15 min,C项 正确;当灭菌锅压力与大气压相同时,即灭菌锅内没有压力了,可以 打开锅盖将被灭菌物品拿出来,D项正确。
专题22
微生物的利用
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特色梳理
选考提升
题型二
划线分离与涂布分离操作比较
典例精析2划线分离和涂布分离是纯化微生物的两种常用方法, 下列描述正确的是( D )
A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.划线分离是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表 面连续划线的操作 C.涂布分离是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D.都会在培养基表面形成单个的菌落 解析 划线分离不需要进行梯度稀释,A项错误;划线分离不需要 进行梯度稀释,划线分离是将菌液通过接种环在固体培养基表面连 续划线的操作,B项错误;涂布分离是将不同稀释度的菌液涂布到固 体培养基的表面,C项错误;划线分离和涂布分离都能在培养基表面 形成单个菌落,D项正确。
MgSO4·7H2O 葡萄糖
0.2 g 10 g
尿素
1g
琼脂糖
15 g
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到 100 mL
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微生物的利用
考点1
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特色梳理
选考提升
(1)制备培养基的一般步骤是:计算、称量、溶化、
、分
装、加塞、包扎、灭菌等。
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考点2
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解析 (1)检验大肠杆菌的含量时,通常将水样用无菌水进行一系列 的梯度稀释。将稀释后的水样分别用玻璃刮刀涂布到LB固体培养 基。为了防止冷凝水污染培养基,因此需要将培养基倒置于恒温培 养箱,在37 ℃条件进行培养。(2)根据④中结果可知,图示表示利用 划线分离法分离和纯化大肠杆菌的部分操作步骤。步骤①倒平板 操作时,需要在酒精灯火焰旁进行,A项错误;步骤②③中的接种环 需要进行灼烧灭菌,即在火焰上灼烧后,待冷却后才可以蘸取菌液 进行平板划线,B项错误;步骤④恒温培养箱培养后的结果说明整个 过程中划线4次,但是只蘸取菌液1次,C项错误;划线分离操作简单 方便,但是单菌落不易分离,D项错误。
专题22 微生物的利用
专题22
微生物的利用
考点1
考点2
考纲要求
考试内容 1.大肠杆菌的培养和分离 2.分离以尿素为氮源的微生物
考试要求 选考
实验与探究能力
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大肠杆菌的培养和分离
1.培养基及无菌技术 (1)微生物对培养基的需求
微生物类型 培养基配制特点
保存。
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特色梳理
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题型一 无菌操作
典例精析1下列有关高压蒸汽灭菌的叙述,错误的是 ( A ) A.用于分离微生物的土壤样品必须高压蒸汽灭菌 B.灭菌前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 C.为达到良好的灭菌效果,一般在压力为1 kg/cm2,温度为121 ℃的
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知识强化 1.选择培养基的选择方法 (1)在培养基中加入某种化学物质。例如,加入青霉素可以分离出 酵母菌和霉菌,加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里 的化学物质是在主要营养成分完整的基础上加入的。 (2)改变培养基中的某种营养成分。例如,缺乏氮源时可以分离出 固氮微生物,石油作为唯一碳源时,可以分离出能消除石油污染的 微生物。 (3)改变微生物的培养条件。例如,将培养基放在高温环境下培养, 可以得到耐高温的微生物。 (4)尿素不耐高温,所以不能用高压蒸汽灭菌法灭菌,而只能采用 G6玻璃砂漏斗过滤法。尿素在实验中可起选择作用。
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考点1
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4.实验操作
流程
具体操作
土壤取样 ↓
从有哺乳动物排泄物的地方取土样 1 g
制备细菌 在无菌条件下,将 1 g 土样加到有 99 mL 无菌水的三角
悬液
瓶中,振荡 10 min,即成 10-2 土壤稀释液;取样时,尽量只
↓
取悬液
涂布分离 法分离细 菌 ↓
(2)使用高压锅灭菌,计时时间不是高压锅通电后,而是有压力后 开始计时灭菌15 min;灭菌结束,不是灭菌锅压强降为0停止,而是与 大气压相同时打开锅盖。
(3)对于培养基pH的调节,需在灭菌之前。 (4)检测培养基灭菌是否彻底,最简便的方法是空白接种,即将未 接种的培养基放在适宜温度下培养一段时间后观察是否有菌落生 长,若培养基中出现菌落,说明培养基灭菌不彻底或被污染,反之说 明培养基灭菌彻底。
糖,灭菌时 间 30 min)
实验用具在 60~80 ℃烘 箱中烘干;培 养基冷却待 用
接种环、
灼 烧 灭 菌
接种针 或其他 金属用 具;玻璃
在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧
烧红;玻璃 防止过热杀 刮刀上的 死目的菌种, 酒精燃尽 冷却后使用
刮刀
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选考提升
知识强化划线分离和涂布分离操作比较
项目 划线分离法
涂布分离法
工具 接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体 将菌液进行一系列的梯度稀释, 培养基表面连续划线的 然后用玻璃刮刀将不同稀释度
操作,将聚集的菌种逐步 的菌液分别涂布到琼脂固体培
原理
稀释分散到培养基表面。 养基的表面进行培养。在稀释 在数次划线后培养,可以 度足够高的菌液里,聚集在一起
典例精析3(2017浙江温州期末)生活饮用水的微生物安全性日常检
测是很重要的。请回答下列问题。
(1)检验大肠杆菌的含量时,通常将水样用
(液体)进行
一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用
涂布
到
培养基表面上,然后将培养皿
于恒温培养箱,
在
℃条件进行培养。
专题22
微生物的利用
考考点点11
考点2
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特色梳理
