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DNA倍体定量分析技术在肺癌诊断中的相关研究进展

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DNA倍体定量分析技术在肺癌诊断中的相关研究进展*Advances in research on DNA ploidy quantitative analysis in the diagnosis of lung cancer吕梦源①,冯　健②　LYU Mengyuan, FENG Jian摘要 近年来，肺癌的发病率和死亡率均位居各类恶性肿瘤之首，并呈逐年上升趋势。

对高危人群进行早期发现、早期诊断、早期预防治疗等是降低死亡率的重要途径。

有研究表明，早期诊断并及时有效地治疗能使Ⅰ期肺癌患者的5年生存率达到90％，但仅依靠肿瘤标志物和影像学检查仍不能很好地提高肺癌早期诊断率。

文章就DNA倍体定量分析技术在肺癌诊断中的相关研究进展进行综述，为临床肺癌早期诊断提供参考。

关键词 肺癌；DNA倍体；痰液细胞；异倍体Abstract In recent years, the incidence and mortality of lung cancer ranks first among all kinds of malignant tumors, and it is increasing year by year. Early detection, early diagnosis, early prevention and treatment of high-risk groups are important ways to reduce mortality. Studies have shown that early diagnosis and timely and effective treatment can make the 5-year survival rate of patients with stage I lung cancer reach 90%, but relying only on tumor markers and imaging examination can not improve the early diagnosis rate of lung cancer.This article reviews the research progress of DNA ploidy quantitative analysis in the diagnosis of lung cancer, and provides a reference for the early diagnosis of clinical lung cancer.Key words lung cancer; DNA ploidy; sputum cells;aneuploid肺癌是一种起源于支气管黏膜或腺体的肿瘤，据Bray F等发布的2018全球癌症数据显示，肺癌以其较高的发病率（11.6%）及病死率（18.4%）已稳居肿瘤疾病首位，早期诊断和治疗是延长生存期、降低死亡率的关键［1］。

1肺癌细胞学诊断肿瘤细胞学诊断是肺癌确诊或治疗的首要依据之一，采用纤维支气管镜刷片组织标本和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）的液基细胞学（liquid-based cytology，LBC）涂片查找癌细胞是临床诊断肺癌的主要方法［2］，特别是BALF脱落细胞学检查对周围型肺癌、弥漫型肺癌以及隐匿型肺癌的早期诊断具有重要价值［3］，尤其是对无明显临床症状、影像学不能明确诊断的患者具有重要价值。

但LBC主要是形态学定性诊断，对细胞形态改变不明显的早期肿瘤诊断较为困难，并且该标本取材均对机体具有创伤DOI：10.19450/ki.jcrh.2019.01.003*基金项目：江苏省普通高校专业学位研究生创新计划项目(YKC16105)通讯作者：冯健，E-mail:1723439171@①南通大学研究生学院，江苏省南通市崇川区西寺路20号（226001）②南通大学附属医院呼吸内科，江苏省南通市崇川区西寺路20号（226001）性。

痰细胞学检查以其安全、无创、简单易行等诸多优势已成为肺癌筛查的主要方法之一［4，5］，但其传统检测方法受诸多因素影响，致其灵敏度及阳性率相对较低，易出现假阴性结果，延误患者的最佳治疗时间。

2痰细胞学检查批量取出上述改良Sac-comanno 法保存的痰标本，加入10%（W/V）二硫苏糖醇1ml，常温下手动轻柔摇动10～20min直至固定后的痰液块溶解，标本呈混浊状。

配平离心管后于2000r/min离心5～10min,即见有形成分沉积管底。

弃上清，向沉渣内加入1～2ml PBS液重悬浮后，一半用于细胞学检查,上述处理过的痰液细胞浓缩悬液混匀后，吸出1～2滴于已涂防脱剂的玻璃片上，用玻棒涂匀后晾干，无水乙醇固定及HE染色，光镜下由两位资深病理医师阅片。

细胞学诊断分为：正常、核异质、癌疑、癌。

以癌疑、癌为阳性判断标准。

3 DNA倍体定量分析技术DNA倍体定量分析技术通过对细胞核内DNA倍体进行相关测定，继而对细胞状态进行相关判定，该技术是在液基薄层制片的基础上，进行Feulgen染色，通过全自动扫描系统进行细胞DNA定量分析，检测其细胞DNA倍体是否异常，根据细胞恶变过程中DNA含量变化较形态学改变早的优势，进而实现对异常增生细胞的识别。

有研究显示，大多数恶性肿瘤中均可发现DNA倍体异常细胞［6］。

异倍体细胞的出现是染色体结构和数目异常的表现，更是细胞癌变和癌前病变的特征［7-9］，可作为一种癌前病变的敏感性检测指标。

4细胞DNA定量分析技术检测原理细胞DNA定量分析技术检测原理：首先经过TCT制片，95%乙醇固定后，经Feulgen染色，用细胞DNA定量分析系统（武汉呵尔）进行分析。

所有Feulgen染色片均采用全自动扫描图像分析系统对每张玻片上的细胞核进行扫描测定，同时以同张玻片上的正常细胞为标准对照，并依据细胞核及核内DNA 的参数对被检细胞进行自动分类和计数，根据直方图中细胞中DNA指数（DI）对检测结果进行判定：①未见DNA倍体异常细胞；②可见1～2个DNA倍体异常细胞（DI值>2.5）；③可见少量DNA倍体异常细胞（DI值>4.5），考虑为肿瘤细胞；④可见异倍体细胞峰，考虑为肿瘤细胞；⑤可见3个以上DNA 倍体异常细胞，考虑为肿瘤细胞；⑥可见细胞异常增生，考虑为肿瘤细胞。

以上①②为阴性，③～⑥为阳性。

5细胞DNA定量分析技术的临床应用5.1支气管镜DNA倍体检测对肺癌的临床意义何敏等［10］研究表明，采用痰细胞学联合支气管镜DNA倍体检测可有效提高肺癌检测的灵敏度，降低漏诊率，具有较明显的临床意义。

其相关研究发现，单纯支气管镜DNA倍体检测以及两种方法学联合检测的阳性率显著高于痰细胞学检测，并且其支气管镜DNA倍体检测阳性率显著高于痰细胞学检测；DNA倍体检测联合细胞学检测的灵敏度明显高于单一DNA倍体分析及细胞学检测，研究表明，DNA倍体分析的Kappa值高于细胞学检查及两者联合检测，这表明DNA倍体分析技术具有较好的一致性，从而印证了联合检测可有效提高肺癌检测的灵敏度，降低漏诊率。

5.2流式细胞法痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值操乐杰等［11］相关研究表明：异倍体发生率在肺癌早期(Ⅰ+Ⅱ)较低，而在晚期肺癌(Ⅲ+Ⅳ)中则明显增多，间接说明DNA倍体异常与肺癌严重度呈正相关关系；相关研究表明：DNA异倍体类型与肿瘤是否出现淋巴结转移及其病理分级间有着密切的相关性，其出现非整倍体及多倍体者通常恶性程度较高，分期较晚，淋巴结多有转移，且预后较差；然而，部分炎性假瘤及结核球存在细胞增殖异常。

这些均印证了DNA倍体异常检测在肺癌预后及治疗的早期判断中具有重要意义。

痰液细胞DNA倍体分析技术对肺癌的早期筛查诊断具有较深远的临床诊疗意义，可能成为肺癌早期筛查诊断有效的辅助方法。

5.3 DNA异倍体定量检测技术在高危HPV感染分流中的应用徐灵等［12］研究表明：妇女HPV感染患者中，其高危型HPV感染者DNA异倍体的检出率较高，通常检测中异常细胞的个数≥3个，有较高的病变检出率。

如果DNA异倍体定量检测，未检出异常细胞，或其检测结果正常，则表明患者大多数为宫颈炎感染。

宫颈癌的致病机制通常是由正常细胞发展为癌症细胞的渐进过程，其经过宫颈上皮内瘤变、宫颈上皮病变等前期宫颈癌病理改变，而这时对患者实施相关细胞学检查，可以排查患者的宫颈上皮病变，从而更好地促进患者分流诊治，阻断患者病程发展的途径，降低宫颈癌的患病率。

5.4 DNA倍体分析系统在脱落细胞学及术中病理诊断中的应用郭超楠等［13］通过对1676例宫颈标本，279例胸腔积液标本，腹水、心包积液、尿、脑脊液、痰、支气管刷片及灌洗液、组织学印片等DNA倍体阳性率与病理阳性率比较，其灵敏度及特异度均较好，倍体分析系统在脱落细胞学及术中冰冻病理诊断中有更高的临床指导价值。

6应用前景目前国内外应用DNA倍体定量分析技术判断细胞的良恶性已经越来越受到临床医师的重视，研究主要集中在宫颈癌、乳腺癌、食管癌、空腔肿瘤等多种肿瘤早期诊断中［14-17］，肺癌早期诊断方面报道不多［18，19］。

近几年国内偶有将DNA定量技术应用在肺癌患者的纤维支气管镜刷片和BALF等标本的诊断上［20］，但该检测会对患者身体造成有创性损伤以及相关经济负担。

而痰液细胞DNA倍体定量分析技术以其无创、简单、经济、高敏感性的突出优势，对肺癌早期筛查诊断具有较深远的意义。

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DNA甲基化与肺癌临床关系研究进展

DNA甲基化与肺癌临床关系研究进展


等Ｉｌ叫应用甲基化特异性ＰＣＲ技术检测到３４／９０例（３７．７８％）
ＮＳＣＬＣ癌组织ＭＧＭＴ基因促进子甲基化，而无肺癌正常肺 组织未检测到ＭＧＭＴ基因促进子甲基化；９０例ＮＳＣＬＣ的
中位生存期是４．３年．而ＭＧＭＴ基因促进子甲基化阳性组中
位生存期仅为２．６年，两组差异显著（Ｐ＝０．０１７）。故认为
有独立的ＣｐＧ岛。ＮＯＲＥｌＡ启动子高甲基化频率在ＮＳＣＬＣ 中为１８％（３门７）。ＮＯＲＥｌＢ在同细胞系中无甲基化现象。原 发ＮＳＣＬＣ标本中２４％（６／２５）有ＮＯＲＥｌＡ甲基化【ｌ引。
３．２．２．２
ＭＧＭＴ促进子甲基化是独立的ＮＳＣＬＣ不利预后因索，是疾
病进展的重要标记物。Ｋｉｋｕｃｈｉｆ２０ｌ等在ｌ ０３例ＮＳＣＬＣ中检测
ＡＰＣ基因
万方数据
中国血液流变学杂志．２００９；１９（１）
１５５
』，肺腺癌表达分化蛋白．１ｆＤＡＬ，１）基因甲基化，结果显示在
肺腺癌中ＤＡＬ．１基因甲基化阳性发生率随肿瘤临床分期的增 高而逐渐增高『Ｉ期１ ３／３６例（３６．Ｉｌ％），Ⅱ期４／１２（３３．３３％）， ⅡＩ期１４／１７（８２．３５％），Ⅳ期３／３（１００％★Ｐ＝０．００２６】。ＤＡＬ．１ 基因甲基化的肺腺癌的元病生存期和总牛存期也显著缩短
基因异常与肺癌的发生密切相关。ＺｉＳｃｈｂａｕｅｒ－ＭＵｌｌｅｒ等”４｜报 道原发性ＮＳＣＬＣ中３７％出现该基因启动子ＣｐＧ岛甲基化，
肺癌细胞系为６５％。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和免疫组化分析，ＦＨＩＴ 基因甲基化和其ｍＲＮＡ表达及蛋白缺失密切相关。提示
ＦＨＩＴ基因甲基化参与肺癌的形成，并可以作为危险因子检 测的指标。且ＦＨＩＴ基因可能为烟草致肺癌的靶基因，其肩 动子甲基化可能是肺癌的早期分子事件。
肺癌的诊断和治疗新进展

肺癌的诊断和治疗新进展

肺癌的诊断和治疗新进展肺癌是一种非常常见的癌症类型，它的发病率和致死率都在不断的增加。

目前，肺癌依旧是全球范围内癌症死亡的最主要原因之一。

尽管肺癌发生的原因十分复杂，但随着生物技术、分子利用以及疾病管理的不断进步，肺癌的诊断和治疗也出现了很多新的进展和方法。

在本文中，我们将探讨一些最新的技术和治疗方法，为肺癌患者提供参考。

肺癌的新型诊断方法实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是目前肺癌的主流检测方法之一。

患者的肺组织和肺部血液样本可以用来检测肿瘤基因的表达，其特异性和灵敏度都非常高。

这个方法还可以对肺癌的基因表达谱进行分析，以确定每个患者的独特的肿瘤类型。

这使得患者可以得到个性化的治疗方案，并且可以有效地避免药物治疗的不良反应，提高治疗效果。

此外，还有像血浆肿瘤DNA检测和呼吸道微生物学检测等测试，也可以用于肺癌的诊断与筛查。

血浆肿瘤DNA检测是利用肿瘤细胞在分裂时释放的DNA作为检测物，通过PCR扩增和测序技术来检测极微量的癌细胞DNA。

这个方法减少了肺癌测试的侵入性，提供了一种无创的检测技术，但还需要大规模的临床试验来验证其安全性。

呼吸道微生物学检测可以帮助防止肺癌的误诊，因为在许多情况下一些肺癌患者在中低期时可能被误诊为结核病或肺炎。

肺癌的新型治疗方法靶向治疗是一种选择性地杀死癌细胞，不伤害正常细胞的治疗方法。

以 EGFR 靶向治疗为例，它是一种专门针对表皮生长因子受体，即 EGFR 激酶刺激增殖的治疗。

这个治疗方法是因为在很多肺癌患者的细胞表面富含 EGFR，所以可以直接靶向这个受体来杀死癌细胞。

近年来，许多新型 EGFR 抑制剂(Dacomitinib、Gefitinib等)也正在研制并已获得临床试验认证。

免疫疗法是另一种新型的治疗方法，它与靶向治疗不同，这种方法并不直接针对肺癌细胞，而是增强人体免疫机制，让人体自身的免疫细胞能够发现和杀死肺癌细胞。

免疫疗法主要可以分为癌症疫苗和抗 PD-1/L1 抗体疗法两种。

多原发肺癌诊断与治疗的最新研究进展

多原发肺癌诊断与治疗的最新研究进展

·3435··综述·多原发肺癌诊断与治疗的最新研究进展洪子强1，2，金大成2，白向豆1，2，崔百强1，2，苟云久2*【摘要】　随着CT 和肺癌筛查的广泛应用，多原发肺癌（MPLC ）（即同个患者中发生两个或两个以上的原发恶性肺癌）的检出率逐渐增加，但如何准确鉴别MPLC 和肺内转移（IM ）仍是一个难题。

组织学特征在某些情况下可以很好地鉴别MPLC 和IM ，但常需要进行分子分析，如下一代测序技术（NGS ）的应用有助于鉴别MPLC 和IM 。

而对于MPLC 的治疗，手术仍然是主要的治疗方式，对于不能手术的患者，放疗和局部消融发挥着重要作用。

NGS 和新疗法（如靶向药物和免疫检查点抑制剂）的出现为MPLC 的诊疗提供了新的选择。

本研究就近年来MPLC 诊断和治疗的研究进展进行论述。

【关键词】　肺肿瘤；多原发肺癌；肿瘤转移；诊断，鉴别；肺外科手术；放射疗法；免疫检查点抑制剂；分子靶向治疗；综述【中图分类号】　R 734.2　【文献标识码】　A DOI ：10.12114/j.issn.1007-9572.2022.0331洪子强，金大成，白向豆，等. 多原发肺癌诊断与治疗的最新研究进展［J ］. 中国全科医学，2022，25（27）：3435-3442.［ ］HONG Z Q ，JIN D C ，BAI X D ，et al. Recent advances in the diagnosis and management of multiple primary lung cancer［J ］. Chinese General Practice ，2022，25（27）：3435-3442.Recent Advances in the Diagnosis and Management of Multiple Primary Lung Cancer HONG Ziqiang 1，2，JIN Dacheng 2，BAI Xiangdou 1，2，CUI Baiqiang 1，2，GOU Yunjiu 2*1.First School of Clinical Medical ，Gansu University of Chinese Medicine ，Lanzhou 730000，China2.Department of Thoracic Surgery ，Gansu Provincial Hospital ，Lanzhou 730000，China*Corresponding author ：GOU Yunjiu ，Professor ；E-mail ：【Abstract 】　The wide application of lung CT scan and lung cancer screening significnatly improves the detection rateof multiple primary lung cancer （MPLC ），namely ，lung cancer patients have two or more primaries at the same time. It is a tough problem all the time that how to distinguish between MPLC and intrapulmonary metastases （IM ）. Although histological feature analysis is a good means to distinguish them in some circumstances ，molecular analysis is also needed generally. Such as the application of next generation sequencing （NGS ） is useful for the distinguish between MPLC and IM. For MPLC ，surgery remains the main treatment modality. For inoperable MPLC ，radiotherapy and local ablation are important treatments. NGS and new therapies such as targeted drug therapy and immune checkpoint inhibitors have become new altenatives for the diagnosis and treatment of MPLC. This article reviews recent advances in the diagnosis and treatment of MPLC.【Key words 】　Lung neoplasms ；Multiple primary lung cancer ；Neoplasm metastasis ；Diagnosis ，differential ；Pulmonary surgical procedures ；Radiotherapy ；Immune checkpoint inhibitors ；Molecular targeted therapy ；Review管有既定的标准，但鉴别MPLC 与肺内转移（intrapulmonary metastasis，IM）仍具有挑战性，这也是胸外科医生和病理科医生长期面临的难题［4-5］。

液基细胞学检查(TCT)细胞DNA倍体定量分析与阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中的应用

液基细胞学检查(TCT)细胞DNA倍体定量分析与阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中的应用

液基细胞学检查(TCT)细胞DNA倍体定量分析与阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中的应用液基细胞学检查(TCT)是一种常用的子宫颈癌筛查方法，通过对子宫颈细胞进行细胞学检查，可以有效筛查出潜在的癌前病变和早期子宫颈癌。

TCT在筛查过程中也存在一定的假阴性和假阳性率，因此需要结合其他检查手段来提高筛查的准确率。

近年来，细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中逐渐受到关注，可以提高子宫颈癌的早期筛查诊断效果。

细胞DNA倍体定量分析是通过对细胞DNA含量进行测量和分析，判断细胞的DNA倍体情况，来进行子宫颈癌的筛查和诊断。

研究表明，子宫颈癌细胞的DNA含量与细胞的恶性程度呈正相关关系，DNA多倍体细胞的出现往往意味着潜在的癌症细胞存在。

细胞DNA倍体定量分析可以作为TCT的补充，起到一定的辅助诊断作用。

细胞DNA倍体定量分析还可以帮助医生评估患者的癌前病变程度，指导治疗方案的制定。

细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中还具有更为灵敏的特点。

对于一些难以观察和诊断的早期子宫颈癌病变，细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用可以提高对异常情况的检出率，减少漏诊率，对患者的早期诊断和治疗起到关键作用。

细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中还具有操作简便、创伤小等优点。

细胞DNA倍体定量分析可以通过细胞标本或组织活检标本进行检测，操作简单方便，且对患者无创伤。

而阴道镜检查也只需在外阴进行观察，不会对患者的生活和工作带来太多影响，同时也能提供更为可靠的诊断信息。

细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用在子宫颈癌筛查中具有一定的科学理论基础和临床应用前景。

遗憾的是，目前这种技术在临床中的普及程度仍然比较有限，需要在未来的研究和实践中得到更多的关注和推广。

在进行该项技术的实践过程中，还需要充分考虑到患者的隐私权和个人合法权益，加强对技术的合理应用和规范管理。

相信通过不断的努力和探索，细胞DNA倍体定量分析和阴道镜联合应用一定会在子宫颈癌筛查中发挥更加重要和有效的作用，为患者的早期诊断和治疗带来更多的希望和可能。