细胞染色方法大全

欢迎阅读Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色.Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI用于细核染红.用PIPI单一外翻色荧光。

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。

线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。

电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。

当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。

在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以欢迎阅读多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。

JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。

由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。

其实验方法如下。

JC-l染色非常简单。

首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以10-30min收集红/490nm，发射：原理：用品：1.4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。

细胞各种染色方法1细胞各种染色方法1细胞是生物体的基本结构单位，研究细胞结构和功能对于理解生命活动的基本原理具有重要意义。

而在细胞研究中，染色方法是最常用的一种技术手段之一、通过染色，可以使细胞内的各种器官、蛋白质、核酸等结构或分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

下面介绍一些常用的细胞染色方法。

1.原位杂交染色原位杂交是一种通过特异性核酸探针与目标细胞中的特定DNA或RNA 序列结合，从而实现靶分子检测和定位的方法。

通过这种方法，可以查看细胞中特定基因或RNA的表达情况，从而揭示该基因或RNA在细胞中的作用。

在原位杂交染色中，探针可以用荧光标记或放射性同位素标记，并使用显微镜观察或放射性成像等方法进行检测。

2.免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，对细胞或组织进行染色分析的方法。

由于抗体可以识别并结合到蛋白质、多肽、糖、核酸等生物分子上，所以免疫染色可以用于检测特定蛋白质或分子的存在和表达水平。

免疫染色可以通过荧光染色或酶标染色来实现，进一步结合显微镜观察和图像分析等方法，可以定量或定位地研究细胞内的各种分子。

3.组织化学染色组织化学染色是一种通过化学反应将细胞或组织中特定分子染色的方法。

常用的组织化学染色方法有哈维氏酸碱性染色、格里姆萨染色、伊红-Wright染色等。

这些染色方法可以用来观察细胞内的DNA、蛋白质、核酸以及细胞器等结构，并通过显微镜观察，从而对细胞和组织的结构和组成进行研究。

4.核酸染色核酸染色是一种利用荧光染料或放射性染料对DNA或RNA进行直接染色的方法。

通过核酸染色，可以观察到细胞和细胞核的形态、数量和分布情况，进而研究细胞的分裂、DNA合成和RNA转录等过程。

核酸染色方法包括荧光染色和核酸复合物染色等，其中荧光染色可用于显微观察，核酸复合物染色则可通过放射性成像等方法进行检测。

细胞染色是细胞生物学研究中非常重要的一种手段，通过染色可以使细胞内的各种结构与分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

常用细胞染色方法
常用的细胞染色方法包括：
1.吉姆萨染色法：使用吉姆萨染料染色，可用于观察细胞核和细胞质的形态结构。

2.荧光染色法：使用荧光染料，通过荧光显微镜观察细胞内的特定结构、蛋白质或核酸等。

3.伊诺金染色法：使用伊诺金染料，主要用于显微镜下观察和鉴别细菌和真菌等微生物。

4.嗜酸染色法：使用嗜酸染料，能够染色细胞内的酸性结构和胞质。

5.嗜碱染色法：使用嗜碱染料，能够染色细胞内的碱性结构和胞质。

6.免疫组化染色法：利用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，再使用染料标记抗体来观察和定位细胞内的特定蛋白质。

7.核酸染色法：使用DNA或RNA特异性的染料，能够染色细胞内的核酸，常用于细胞周期和细胞分裂等研究。

8.血液细胞染色法：包括委氏染色法、中日染色法等，用于观察和鉴定血液细胞
类型和形态变化。

以上是一些常用的细胞染色方法，根据需要和研究目的的不同，可以选择合适的方法来观察和研究细胞。

血细胞的染色方法
血细胞的染色方法有以下几种：
1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。

首先将薄片
经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料
的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。

这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。

2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染
料的浓度和染色时间稍有不同。

这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。

3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等
处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。

这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。

4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。

常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。

5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。

它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。

以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。

涂片染色常用的方法涂片染色是一种常用的细胞学技术，用于观察和研究细胞的形态、结构和功能。

涂片染色的方法有多种，下面将介绍几种常用的涂片染色方法。

1. 哈里斯涂片染色法哈里斯涂片染色法是最常用的涂片染色方法之一。

该方法使用的染色剂是吉姆萨精和伊红，可以染出细胞核和细胞质的不同部分。

首先，将待染细胞制备成涂片。

然后，用吉姆萨精染色液涂在涂片上，使细胞核呈蓝色。

接着，用伊红染色液涂在涂片上，使细胞质呈粉红色。

最后，用水洗净并使其干燥，即可观察到染色后的细胞。

2. Giemsa染色法Giemsa染色法是涂片染色中常用的一种方法。

该方法使用的染色剂是吉姆萨染色液，可以染出细胞核和细胞质的不同部分。

该方法的步骤与哈里斯涂片染色法类似，但染色液的配方和处理时间有所不同。

Giemsa染色法染出的细胞呈紫色，细胞质呈粉红色，可以清晰地观察到细胞的形态和结构。

3. Wright染色法Wright染色法是一种常用的涂片染色方法，适用于骨髓细胞和血液细胞的染色。

该方法使用的染色剂是Wright染色液，可以染出细胞核和细胞质的不同部分。

首先，将待染细胞制备成涂片。

然后，将Wright染色液滴在涂片上，使细胞呈深紫色。

接着，用水洗净并使其干燥，即可观察到染色后的细胞。

4. 原位杂交染色法原位杂交染色法是一种用于检测DNA序列的涂片染色方法。

该方法使用的染色剂是荧光标记的探针，可以与待检测的DNA序列特异性结合。

首先，将待染细胞制备成涂片。

然后，将荧光标记的探针加在涂片上，使其与目标DNA序列发生杂交。

接着，用荧光显微镜观察涂片，可以看到荧光信号，从而确定目标DNA序列的存在与分布。

5. PAS染色法PAS染色法是一种用于检测糖原和多糖的涂片染色方法。

该方法使用的染色剂是Periodic Acid-Schiff（PAS）反应液，可以将糖原和多糖染成紫红色。

首先，将待染细胞制备成涂片。

然后，将PAS反应液滴在涂片上，使其与糖原和多糖发生反应。

细胞各种染色方法细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。

由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。

目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。

第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。

细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。

正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。

加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。

在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。

所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。

一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。

培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。

用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。

细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。

贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。

悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。

二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。

相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。

若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。

浆细胞染色方法
1.苏木精伊红染色法（H&E染色法）：
这是一种常规的组织切片染色方法，对于检测浆细胞的分布
和形态特征非常有效。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于苏木精溶液中染色，可以染出细胞核为深蓝色，胞质为红色。

3）用伊红溶液处理薄片，可使核仁染成深蓝色，细胞质和胶原纤维染成粉红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

2.伊红/橙G染色法：
这种染色方法也可用于浆细胞的染色，它可以使细胞质染成
橙色、胞核染成淡红色。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于5%的酸性酒红溶液中，用浓盐酸处理23秒钟，使浆细胞细胞浆呈现橙色。

3）用伊红溶液处理薄片，胞核呈现淡红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

3.免疫组化染色法：
这种方法使用特异性抗体标记目标蛋白，可用于检测浆细胞中特定抗体的表达。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片进行抗原修复处理，以恢复蛋白质的免疫反应性。

3）在薄片上加上特异性的抗体，与目标抗体结合形成免疫复合物。

4）用酶标记的二抗结合免疫复合物，生成可视化信号。

5）最后用染色剂染色，观察和分析浆细胞中目标抗体的表达情况。

常用的微生物染色方法微生物染色是微生物学研究中非常重要的方法，通过染色可以使微生物的形态和结构更加清晰，便于观察和研究。

下面将介绍几种常用的微生物染色方法。

1. 革兰氏染色法（Gram染色）：革兰氏染色法是最常用的微生物染色方法之一、该方法可以根据细胞壁结构的差异将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

革兰氏阳性菌具有较厚的细胞壁，可以保留紫色的革兰氏染料-碘-酒精复合物，呈紫色；而革兰氏阴性菌由于细胞壁较薄，无法保留染料-碘-酒精复合物，经酒精洗涤后以褪色方式显现嫩蓝色。

2. 去瓶球菌染色法（Ziehl-Neelsen染色）：该染色方法主要用于诊断结核菌感染。

结核菌具有酸酒杆菌的特征，该染色方法通过热定性进行，即将杆菌加热固定在玻璃片上。

染色液为仲子红与甲苯红的酒精醚溶液，结核菌上的脂质物质可以吸附染色液，呈现红色。

3.金黄色葡萄球菌染色法：金黄色葡萄球菌染色采用的是接种在含有豆粉和盐的琼脂糖平板上的细菌进行。

染色液为碘酸钾和碘甘液的混合物，在细菌细胞内部染出棕色团块。

4. 吉姆萨染色法（Giemsa染色）：吉姆萨染色法主要用于染色血液细胞、细菌和寄生虫等。

染色液为吉姆萨染料溶液，通过染色液和蒸馏水的混合来染色。

吉姆萨染色方法对捕获染色成分极为敏感，将蓝色碱性染料用于碱性碳水化合物和核酸材料，将红色和紫红色酸性染料用于酸性成分，如蛋白质和细胞质组分。

5. 格拉姆-韦瑞染色法（Gram-Weigert染色）：该染色法用于菌体内基质和胞外多糖的特异染色。

六元蔗糖银试剂与格拉姆染色特殊染料结合，生成黑色的沉淀物，用以观察菌体内多糖地点和部位。

6.碘染色法：碘染色用于染色藻类和真菌。

该染色法主要原理是将菌丝或细胞的内部特异性细胞器染为紫黑色，以便更容易观察和研究。

7.寇歇染色法：寇歇染色法主要应用于真菌的染色，染色方法与碘染色类似，可以观察到真菌菌丝和孢子的形态和结构。

总结起来，微生物染色方法有很多种，每种方法适用于特定的微生物和研究目的。

盘点细胞组织染色方法（一）引言：细胞组织染色是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，它可以帮助科学家们观察和研究细胞的结构、功能和代谢过程。

本文将介绍盘点细胞组织染色方法中的一些常见技术，包括荧光染色、酶标染色、核酸染色、组织切片染色和特殊细胞组织染色方法。

正文：1. 荧光染色a. 选择适当的荧光染料：荧光染料的选择应考虑到目标细胞或组织的亲和性和可视性。

b. 预处理样本：在染色前，需要对样本进行适当的固定和处理，以保持细胞的结构完整性。

c. 染色条件优化：荧光染色的条件包括染料浓度、温度和时间等因素，需要根据具体实验进行优化。

d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察样本时，要根据染色结果进行正确的激发光源和滤波器的选择。

2. 酶标染色a. 选择合适的酶标标记物：常用的酶标标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

b. 优化染色条件：染色条件包括酶标记物的浓度、染色时间和温度等，应根据实验目的和样本类型进行优化。

c. 反应终止：在染色反应结束后，要进行适当的反应终止步骤，以避免染色产物的进一步发展。

d. 观察和分析：利用酶标显色的样本可以通过比较色素密度来定量分析，也可以使用显微镜观察和记录。

3. 核酸染色a. 选择适当的核酸染料：核酸染料有Ethidium Bromide(EB)、DAPI等，选择染料时要考虑到染色效果和对细胞活性的影响。

b. 处理样本：对于酶消化的样本，可以使用蛋白酶K消化去除蛋白质。

c. 染色条件优化：核酸染色的条件包括染料浓度、染色时间和温度等，需要针对具体实验进行优化。

d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察核酸染色的样本时，根据染色结果选择适当的激发光源和滤波器。

4. 组织切片染色a. 制备组织切片：使用组织切片技术对组织样本进行快速冷冻或固定处理，然后切片得到薄片。

b. 染色处理：对组织切片进行适当的染色处理，可以采用荧光染色或酶标染色等方法。

一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。

2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。

凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。

如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。

此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。

4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

二、DNA凝胶电泳（一）、检测原理细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。

但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。

（二）结果判断正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。

核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA 法检测。

（一）检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物，测光吸收制。

（二）用途该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。

可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。

该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。